Per iniziare, scegliete magneti rettangolari piatti per assemblare i set di magneti per i modelli a strisce. Tagliare lastre di silicone spesse 2 millimetri in rettangoli delle dimensioni di 2 x 8 x 30 millimetri. Quindi, assemblare i magneti rettangolari e le piastre in silicone strato per strato.
Per i modelli a matrice di punti, assemblare i magneti cilindrici in miniatura assicurandosi che ogni set di magneti sia composto da 36 magneti cilindrici disposti in una griglia 6 x 6. Per preparare un dispositivo di coltura cellulare, utilizzare un perforatore per creare un foro rettangolare di 1 x 1 centimetro nella piastra di silicone spessa 2 millimetri. Taglia la piastra in silicone attorno al foro per creare uno stampo rotondo con il foro al centro.
Per la sterilizzazione, posizionare gli stampi nel pulitore ad ultrasuoni. Sterilizzare gli stampi con acqua pura per 10 minuti. Quindi, sostituire l'acqua con etanolo al 75% per 10 minuti.
Asciugare gli stampi in una scatola sterilizzatrice a 65 gradi Celsius per 60 minuti. Quindi, fissare lo stampo in silicone sterilizzato a un vetrino rotondo da 25 millimetri e premere delicatamente lo stampo in modo che il silicone aderisca al vetro. Posizionare i set di magneti su una piastra a 6 pozzetti e posizionare il dispositivo di coltura cellulare sopra il set di magneti.
Per preparare una soluzione iniettabile di Gd-DTPA da 30 millimolari, mescolare 30 microlitri di Gd-DTPA con 470 microlitri di terreno di coltura cellulare completo. Per creare i modelli cellulari, centrifugare la sospensione di HUVEC a 200 G per 5 minuti. E risospendere il pellet in un mezzo contenente Gd-DTPA.
Dopo il conteggio delle cellule, regolare la densità cellulare a circa 2 volte 10 a 5 cellule per millilitro utilizzando un terreno contenente Gd-DTPA. Mescolare delicatamente la sospensione cellulare e aggiungere 200 microlitri alla cavità dello stampo per coltura cellulare per creare una superficie liquida piena di tesa. Incubare la piastra per 3-6 ore fino a quando le cellule non aderiscono al substrato.
Dopo l'incubazione, sostituire il terreno contenente Gd-DTPA con un terreno di coltura completo e rimuovere il dispositivo di coltura cellulare dal set di magneti. Per preparare un dispositivo di coltura cellulare per il patterning cellulare a strisce, sostituire le spesse piastre in silicone del dispositivo con piastre sottili. Dopo aver modellato il primo tipo di cellule, come mostrato in precedenza, spostare il dispositivo di coltura cellulare di 1 millimetro dai magneti sottostanti verso destra.
Applicare la stessa procedura di creazione di serie al secondo tipo di celle. E sposta il terzo dispositivo di coltura cellulare di 1 millimetro dai magneti sottostanti verso destra. Ripetete il terzo tipo di celle come illustrato.
Dopo aver modellato tutti i tipi di cellule, lavare due volte i vetrini con 200 microlitri di PBS. Infine, sostituire il PBS con un terreno di coltura cellulare completo. I test di vitalità condotti sugli HUVEC trattati con Gd-DTPA per 12 ore non hanno mostrato alcuna diminuzione significativa della vitalità cellulare ad eccezione di 50 millimolari di Gd-DTPA, che ha comportato una differenza statistica, ma ha conservato un tasso di vita di circa il 90%Nel modello cellulare multi-tipo, è stato generato un modello cellulare tripartito di strisce affiancate e array di punti concentrici.
