Per iniziare, rivestire la membrana della piattaforma di coltura cellulare riconfigurabile assemblata con cinque microgrammi per centimetro quadrato di fibronectina per un'ora a temperatura ambiente per migliorare l'adesione cellulare. Quindi, utilizzando una pipetta p200, aspirare la soluzione di rivestimento. Posiziona lo stencil di modellazione nel pozzetto del modulo principale.
Aggiungere il supporto cellulare al pozzetto e al canale inferiore del dispositivo. Semina le cellule endoteliali della vena ombelicale umana nel pozzetto. Mettere il dispositivo in una capsula di Petri.
Aggiungere un tappo conico per tubo da 15 millilitri contenente acqua deionizzata alla piastra di Petri per mantenere l'umidità locale. Trasferire la configurazione della capsula di Petri nell'incubatrice. Per coltivare le cellule sotto flusso, procedere alla riconfigurazione della piattaforma da pozzetto aperto alla modalità microfluidica.
Per fare ciò, riempire i serbatoi e le provette con terreni di crescita delle cellule endoteliali. Posizionare l'alloggiamento inferiore sul tavolino del campione. Inserire il modulo centrale a pozzetto aperto nell'alloggiamento inferiore, quindi rimuovere lo stencil, aspirare il terreno cellulare dal pozzetto del modulo e posizionare il modulo di flusso nel pozzetto.
Quindi, posizionare l'alloggiamento superiore per sigillare il modulo di flusso nel pozzetto del modulo centrale. Collegare i puntali di erogazione in ingresso e in uscita alle porte del modulo di flusso. Avviare la pompa peristaltica per introdurre il flusso di fluido nel sistema.
Arrestare la pompa quando viene raggiunto il tempo desiderato per l'esposizione al flusso. Rimuovere i puntali di erogazione in ingresso e in uscita, quindi rimuovere l'alloggiamento superiore. Rimuovere delicatamente il modulo di flusso dal pozzetto utilizzando una pinzetta.
Infine, aggiungere 100 microlitri di terreno cellulare al pozzetto prima di eseguire il test desiderato. Le cellule coltivate sotto flusso, allineate lungo la direzione del flusso, mentre le cellule coltivate senza flusso sono rimaste orientate in modo casuale. L'esposizione delle cellule allo stress puro ha provocato la sovraregolazione del fattore 2 simile a Kruppel e dell'ossido nitrico sintasi endoteliale, che svolgono ruoli critici nei vasi sanguigni sani.
