Procedura chirurgica per la preparazione del modello murino ortotopico di glioblastoma

Per iniziare, preparare il topo per l'intervento chirurgico e posizionarlo sul telaio stereotassico. Quindi, solleva la pelle sul cranio e tieni le forbici tra l'occhio destro e l'orecchio per creare un'incisione. Tagliare verso il lato sinistro del cranio, seguendo i segni dell'incisione e rimuovere il lembo cutaneo rotondo risultante.

Con una lama di bisturi o una micro curette, grattare delicatamente la superficie del cranio per rimuovere il periostio. Utilizzare soluzione fisiologica e un aspirapolvere per mantenere l'area chirurgica pulita dai detriti. Grattare il periostio per garantire una migliore aderenza alla colla cianoacrilica e a un cemento dentale.

Quindi, usando una matita sterilizzata in autoclave, segna la posizione della finestra cranica. Tenere il trapano nella mano dominante e una siringa o una pinza nella mano non dominante. Applicare soluzione fisiologica fredda sul calvario per evitare il surriscaldamento e mantenere pulita la vista chirurgica.

Durante la perforazione, posizionare il vetrino sopra il cranio per confermare che si adatti esattamente alla finestra cranica. Una volta che è possibile premere il lembo del cranio, utilizzare una pinza per rimuovere con cautela il frammento dal campo operatorio. Se si verifica un'emorragia minore, utilizzare una spugna emostatica per l'applicazione topica di soluzione salina ghiacciata con una leggera pressione per aiutare a ridurre la perdita di sangue.

Prelevare le cellule di glioma C6 in coltura per l'impianto. Aspirare un microlitro di sospensione cellulare in una siringa da microlitri a tenuta di gas. Quindi, posizionare la siringa all'interno del telaio stereotassico.

Per impiantare le cellule per l'imaging a due fotoni, iniettare 0,5 microlitri di sospensione cellulare, a 0,8 millimetri di profondità nell'area cerebrale superficiale. Dopo l'iniezione, ritrarre l'ago ed uscire dal tessuto cerebrale. A questo punto, spostare la barra della testa e il vetrino di copertura dall'alcol a una soluzione salina e utilizzare una punta a vuoto o una pinza per far passare questi componenti al sito chirurgico.

Posizionare il vetrino coprivetro all'interno della finestra cranica e applicare una piccola quantità di colla cianoacrilica. Rimuovere eventuali fuoriuscite di colla sul vetrino coprioggetto con un applicatore con punta di cotone o grattandolo delicatamente con un bisturi. Fissare il vetrino di copertura nella finestra cranica e applicare la barra per la testa.

Mescolare il cemento dentale, posizionare la barra di testa e applicare il cemento sull'area circostante. Pulisci il cemento superfluo con la punta di una siringa, un bisturi o la punta del trapano. Dopo aver sigillato la finestra cranica, verificare la presenza di aree craniche esposte.