Inizia iniettando cellule di glioma C6 nelle aree cerebrali superficiali dei topi per creare un modello murino di glioblastoma. Quindi fissa una barra per la testa nella finestra cranica e lascia che i topi si riprendano. Successivamente, iniettare nanoparticelle marcate con fluorescenza per via endovenosa nel topo per eseguire l'imaging di due fotoni nel cervello.
Accendere immediatamente il laser Ti:zaffiro e l'interruttore principale del sistema. Quindi avvia il software di visualizzazione della prateria. Ora immobilizza il topo sotto il microscopio a due fotoni su un tavolino personalizzato.
Posiziona l'animale in posizione prona su un tappetino riscaldato e fissalo con il nastro adesivo senza restringere il torace. Aggiungi una goccia d'acqua alla finestra cranica e regola la messa a fuoco. Per monitorare la frequenza cardiaca e l'ossigenazione del sangue dell'animale, posizionare il sensore sulla zampa posteriore.
Regolare la posizione della testa. Utilizzando il filtro RFP, individuare il campo di imaging desiderato. Una volta determinato l'orientamento del campione e il campo da visualizzare, passare dalla modalità a campo largo alla modalità microscopia a scansione ottica.
Assicurarsi che il laser Ti:zaffiro sia bloccato a 920 nanometri e aprire tutti gli otturatori. Regolare le tensioni PMT a gasp da 500 a 600 volt. Premere l'immagine dal vivo nel software per avviare l'imaging.
Dopo aver ottenuto un'immagine nitida, utilizzare il software e il tavolino motorizzato per impostare la parte superiore e inferiore di una pila di immagini nel software. Aumenta lentamente i pockel o il guadagno PMT per compensare l'oscurità a profondità crescenti. Impostate un percorso di salvataggio e avviate la serie Z.
Una volta completata la pila, utilizzare la riproduzione per verificarne la qualità. Una volta terminata l'imaging, spostare l'animale in una gabbia di recupero. Esci dalla vista Prairie, assicurati che tutti i dati siano salvati e trasferiti, quindi spegni il computer e tutto l'hardware.
Un numero limitato di particelle ha subito uno stravaso e sono visibili in prossimità delle cellule tumorali 10 minuti dopo la somministrazione di nanoparticelle. Tuttavia, 24 ore dopo la somministrazione di nanoparticelle, un'abbondanza di particelle è visibile nel glioblastoma, suggerendo uno stravaso.
