Preparare gli stampi per l'inclusione creando fogli di stagnola cilindrici per ogni campione. Riempire gli stampi con la temperatura di taglio ottimale o con il composto OCT. Quindi preparare due barili isolanti.
Riempi la botte piccola con isopentano e la botte grande con azoto liquido. Posizionare il fusto piccolo all'interno di quello più grande 10 minuti prima della dissezione muscolare. Inizia preparando il topo per la dissezione.
Taglia la pelle sulla faccia del topo per esporre il muscolo massetere. Rimuovere le ghiandole parotidi per esporre completamente la parte posteriore del muscolo massetere. Sezionare il muscolo massetere dal suo attacco anteriore fino al suo attacco posteriore sulla mandibola.
Quindi immergere il tessuto muscolare nell'OCT, tenendolo perpendicolare al composto. Trasferire lo stampo nell'isopentano pre-raffreddato utilizzando un portaaghi. Attendere 40 secondi fino a quando l'OCT diventa bianco e fisso.
Conservare i campioni di muscolo freschi congelati in piastre a 24 pozzetti etichettate. Sezionare i campioni immediatamente a 20 gradi Celsius o conservarli a 80 gradi Celsius per un uso a lungo termine. Quindi, tagliare la pelle dalla caviglia al ginocchio e rimuovere la fascia per esporre il muscolo tibiale anteriore.
Usa la punta della pinza per microdissezione per isolare il tendine del tibiale anteriore e fallo scorrere fino al ginocchio per rompere le fibre che si attaccano alla tibia. Taglia il tendine alla caviglia. La colorazione HE e sirius red ha rivelato che dopo la lesione da congelamento, il muscolo tibiale anteriore ha mostrato una rigenerazione completa dopo 14 giorni con una morfologia simile al controllo intatto.
Al contrario, il muscolo massetere mostrava una ridotta rigenerazione delle miofibre e un'eccessiva deposizione di matrice extracellulare dopo 14 giorni di lesione da congelamento. La colorazione immunoistologica per Pax7 dopo 14 giorni dalla lesione ha mostrato nuclei densamente popolati ma senza cellule satelliti muscolari proporzionalmente aumentate. Un gran numero di miofibre localizzate centralmente è stato rilevato nel muscolo tibiale anteriore a 14 giorni dopo l'infortunio, mentre il contorno delle miofibre era appena percettibile nel muscolo massetere nell'area lesa.
Invece, è stata osservata l'infiltrazione di FAP PDGFRalfa-positivi.
