Preparazione, montaggio e imaging di larve di pesce zebra per studi sullo sviluppo cardiaco

Per iniziare, accendi lo stereomicroscopio per registrare lo sviluppo delle larve di zebrafish tra zero e sette giorni dopo la fecondazione. Preparare lo 0,8% di agarosio a basso punto di fusione con 150 milligrammi per litro di tricaina. Una volta che l'agarosio si è raffreddato a temperatura ambiente, utilizzando una pipetta di trasferimento, spostare il pesce zebra anestetizzato sull'agarosio.

Utilizzando un'altra pipetta di trasferimento, montare il pesce con agarosio in un tubo di etilene propilene fluorurato. Collegare il tubo con la larva di zebrafish montata al tavolino di campionamento del microscopio a foglio luminoso motorizzato a sei assi. Immergere la provetta nella camera del campione riempita con acqua E3.

Ruota le larve di zebrafish dal lato ventrale per una migliore visualizzazione del cuore. Collegare lo stadio di campionamento motorizzato alla stazione di lavoro. E configura tutti i parametri necessari, inclusa la modalità di movimento desiderata.

Stabilire una connessione tra la telecamera CMOS e la workstation. Impostare la dimensione del passo su 1 micrometro, il numero totale di fotogrammi su 300 e il tempo di esposizione su 5 millisecondi. Quindi, definire l'area di interesse desiderata.

Accendere il laser e avviare l'imaging al microscopio delle larve al microscopio a foglio luminoso. Registra 300 fotogrammi come sequenza di immagini 2D per coprire da tre a cinque cicli cardiaci delle larve. Registrare un'altra sequenza di immagini della nuova fetta del campione fino a coprire l'intero cuore.