Per iniziare, trasferire 20 millilitri del campione di uva fermentata in una provetta sterile con tappo a vite da 50 millilitri. Quindi aggiungere 10 millilitri di acqua fredda nel tubo e vorticare per l'omogeneizzazione. Centrifugare il campione a 800 G per un minuto a quattro gradi Celsius.
Trasferire il surnatante in una nuova provetta da 50 millilitri e centrifugare a 3000 G per 20 minuti a quattro gradi Celsius. Dopo aver scartato il surnatante, risospendere il pellet in un millilitro di PBS. Trasferire la sospensione cellulare in una provetta con tappo a vite da due millilitri e centrifugare a 14.000 G per due minuti.
Ora risospendere il pellet in 978 microlitri di tampone fosfato di sodio a pH 7,4 e 122 microlitri di tampone DNA. Agitare il tubo e posizionarlo a quattro gradi Celsius per 45 minuti a un'ora. Trasferire un millilitro del campione in una provetta di soluzione di lisi e serrare il tappo.
Omogeneizzare il campione tre volte in un macinatore per 60 secondi ciascuna. Quindi centrifugare la provetta E della matrice lisante per un minuto a 16, 800 G.Trasferire il supernannt in una microprovetta pulita e aggiungere 250 microlitri di soluzione di precipitazione proteica alla provetta. Agitare il tubo 10 volte per mescolare il contenuto.
Centrifugare il campione per cinque minuti a 16.800 G e trasferire il surnatante in una provetta sterile da 15 millilitri. Quindi aggiungere un millilitro di sospensione della matrice di legame al surnatante e mescolare capovolgendo le provette per due minuti prima di metterle in rack per tre minuti. Dopo aver rimosso un millilitro del surnatante, risospendere la matrice nel surnatante rimanente.
Trasferire 600 microlitri della miscela in una provetta filtrante centrifuga e centrifugare. Quindi travasare il flusso e aggiungere 500 microlitri di soluzione di lavaggio nel tubo del filtro centrifuga. Rimuovere il filtro rotante e metterlo in una nuova provetta di raccolta per cinque minuti.
Dopo l'asciugatura, aggiungere 50 microlitri di acqua tiepida priva di DNAsi sulla membrana del filtro e mescolare delicatamente la matrice con un puntale per pipetta. Centrifugare a 14.500 g per un minuto per eluire il DNA. Caricare il campione su un gel di agarosio.
Infine, misura la concentrazione di DNA.
