Per iniziare, posiziona i semi di Arabidopsis thaliana Col-0 sterilizzati in superficie su un piatto contenente il terreno di germinazione dei semi. Dopo due giorni di stratificazione a freddo, spostate la piastra in una stanza di coltivazione impostata a 21 gradi Celsius con un fotoperiodo diurno lungo e il 50% di umidità. Trasferisci le piantine di una settimana in una scatola di coltura con un terreno di coltura per piante.
Far crescere la coltura di Agrobacterium tumefaciens in terreno LB fino a raggiungere una densità ottica a 600 nanometri di 0,9 a 1. Utilizzando un ago montato su una siringa da insulina, iniettare circa 50 microlitri di coltura batterica alla base del gambo infiorescente primario di una piantina di Arabidopsis di un mese. Grattare il tessuto sulla superficie dello stelo primario con la siringa.
Dopo due o quattro settimane, asportare le radici pelose emergenti e coltivarle su una piastra di Petri con il terreno di crescita delle radici pelose integrato con antibiotici per sopprimere la crescita agrobatterica. Coltiva la radice pelosa a 24 gradi Celsius al buio. Dopo una o due settimane, individualizzare le radici pelose sul piatto con un terreno di crescita delle radici pelose e trasferire le linee radicali pelose selezionate in un terreno fresco ogni quattro o cinque settimane.
Trasferire le radici pelose in una piastra con un mezzo di rigenerazione per indurre la formazione di calli e la coltura a 21 gradi Celsius in un fotoperiodo di lunga giornata. Una volta che i germogli emergono dal callo, tagliare i germogli e trasferirli in un mezzo di allungamento dei germogli per due o tre settimane per favorire la crescita e l'allungamento. Quindi trasferire i germogli allungati nel mezzo di induzione della radice.
Infine, trasferisci la pianta radicata nel terreno per eseguire la selezione transgenica. In A. thaliana, i calli gialli sono stati indotti entro 14 giorni in tutte le linee radicali pelose testate. I primi primordii del germoglio, visibili come macchie verde scuro, sono emersi entro tre settimane dal trasferimento nel mezzo di rigenerazione.
Dopo quattro settimane, i germogli coprivano le radici pelose nel 90% delle linee, con alcuni casi che mostravano la formazione di radici avventizie. Tuttavia, una linea non si è rigenerata nemmeno dopo tre mesi. Rispetto al tipo selvatico, i rigeneranti radicali pelosi di A.thaliana hanno mostrato un fenotipo nano con apparati radicali densi, foglie rugose e tempi di fioritura alterati.
