Preparazione di terreno liquido anaerobico in flaconi di coltura per la coltivazione di microrganismi anaerobici ambientali

Per iniziare, misurare e aggiungere i componenti del supporto necessari a una bottiglia da 1 litro. Regolare il pH in base alla coltura microbica di interesse e miscelare i componenti fino a ottenere omogeneità facendo roteare il flacone. Scaldare il liquido fino all'ebollizione nel microonde per cinque o sei minuti, aprendo spesso il microonde e facendo roteare delicatamente la bottiglia utilizzando un guanto resistente al calore.

Quindi, collegare una pipetta di vetro sterile da 10 millilitri a un collettore di azoto gassoso. Aprire il collettore per sfiatare l'ossigeno e consentire all'azoto gassoso di defluire. Posizionare il puntale della pipetta nel liquido e regolare il flusso di gas in modo che le bolle siano moderatamente vigorose.

Sciacquare il liquido con azoto fino a quando la bottiglia non è più troppo calda per essere toccata. Mentre aspetti che il flacone si raffreddi, metti fuori 10 flaconi sterili da 100 millilitri di coltura. Una volta che il flacone del terreno raggiunge un calore sopportabile, tirare il puntale della pipetta verso l'alto nello spazio di testa del flacone.

Aggiungere 0,125 grammi di bicarbonato di sodio e 0,3 grammi di solfuro di sodio non idrato e attendere che resazurina diventi incolore. In attesa che resazurin cambi colore, collegare le cannule metalliche alla configurazione del collettore del gas. Regolare il flusso di azoto a una velocità moderata e posizionare le punte della cannula nei flaconi di coltura.

Una volta che la resazurina è incolore, aliquotare 50 millilitri di liquido in ogni flacone di coltura. Tappate ogni flacone con un tappo di gomma della stessa misura subito dopo aver rimosso le cannule. Quindi fissare il tappo con una guarnizione in alluminio.

Metti le bottiglie in un contenitore autoclavabile e riempi il contenitore con acqua del rubinetto fino a quando i livelli dell'acqua non corrispondono a quelli delle bottiglie. Autoclavare le bottiglie a 121 gradi Celsius per 30 minuti.