Preparazione di un terreno liquido anaerobico in una damigiana per la coltura di microrganismi anaerobici ambientali in un bioreattore

Per preparare la configurazione di Damigiana, aprire la valvola di una sfera portagomma da 6.4 centimetri. Fissare due centimetri di lunghezza del tubo in silicone su entrambe le estremità della valvola a sfera del portagomma. Collegare un raccordo adattatore portatubo da 7.9 a 6.4 millimetri a un'estremità del gruppo.

Fissare l'altra estremità del gruppo al portagomma di una damigiana da otto litri. Utilizzare una fascetta per fissare il collegamento tra il portagomma della damigiana e il tubo e il collegamento tra il raccordo dell'adattatore del portagomma e il tubo. Misurare e aggiungere i componenti del supporto necessari alla Damigiana da otto litri.

Dopo aver regolato il pH richiesto, mescolare i componenti fino a ottenere omogeneità mescolando su una piastra calda e lasciare bollire il liquido per 30 minuti. Quindi, collegare una pipetta di vetro sterile da 10 millilitri a una configurazione del collettore di azoto gassoso. Aprire il collettore per sfiatare l'ossigeno e consentire all'azoto gassoso di defluire.

Dopo aver spento il fuoco, inserire il puntale della pipetta nel liquido e sciacquarlo con azoto gassoso per 30 minuti, moderatamente vigoroso, ma non traboccante. Quindi, tirare la punta della pipetta verso l'alto nello spazio di testa della Damigiana. Aggiungere due grammi di bicarbonato di sodio e 4,8 grammi di solfuro di sodio non idrato e attendere che resazurina diventi incolore.

Una volta che la resazurina è incolore, rimuovere la pipetta di vetro e tappare immediatamente la damigiana con un tappo numero 10. Attorcigliare un filo sopra il tappo e attorno al bordo della damigiana per fissare il tappo.