Per iniziare, prendere un micro vetrino con fondo in vetro a 18 pozzetti, aggiungere 150 microlitri di idrossido di sodio in ciascun pozzetto della camera e incubare per un'ora a temperatura ambiente. Quindi rimuovere la soluzione di idrossido di sodio e lavare i pozzetti da tre a cinque volte con acqua deionizzata, seguita da tre lavaggi con tampone contenente 10 millimolari di cloruro di calcio. Quindi, aggiungi 15 microlitri di SUV appena preparati nei pozzetti contenenti 150 microlitri di tampone con 10 millimolari di cloruro di calcio.
Dopo 30 minuti di incubazione a temperatura ambiente, lavare gli SLB almeno sette volte con un tampone che non contenga cloruro di calcio. Per la funzionalizzazione degli SLB biotinilati con streptavidina, aggiungere una soluzione di streptavidina. Quindi lavare gli SLB almeno cinque volte con un tampone per rimuovere la streptavidina in eccesso.
Successivamente, aggiungere b-disiLID a una concentrazione finale di un micromolare nel pozzetto. Dopo 30 minuti di incubazione a temperatura ambiente, lavare le proteine in eccesso con il tampone almeno cinque volte. Quindi aggiungere mOrange-Nano a una concentrazione finale di 200 nano molari.
Coprire il campione con un foglio di alluminio e tenerlo al buio. Successivamente, posizionare il microvetrino sotto il microscopio a fluorescenza. Imposta il laser a 552 nanometri per visualizzare mOrange-Nano.
La microscopia a fluorescenza ha rivelato mOrange-Nano patterned sulle SLB funzionalizzate con b-disiLID. Dopo la fotoattivazione, c'è un rapido aumento del segnale di fluorescenza nel canale arancione all'interno della regione di interesse. La fluorescenza di mOrange-Nano aumenta dopo ogni attivazione fotografica, si satura in 120 secondi e poi diminuisce ai livelli di sfondo nei successivi 120 secondi.
