Per iniziare, prendi il tubo dei GUV appena raccolti. Aggiungere la soluzione di streptavidina e lasciarla riposare per 30 minuti a temperatura ambiente. Quindi aggiungere un micromolare di b-disiLID alla soluzione GUV.
Copri il campione con un foglio di alluminio e tienilo al buio. Pretrattare un micro vetrino con 18 pozzetti di camera inferiore in vetro con 150 microlitri di soluzione BSA per 10 minuti. Quindi rimuovere la soluzione BSA e lavare i pozzetti tre volte con 150 microlitri di acqua.
Successivamente, aggiungere 145 microlitri di 200 nanomolari mOrange-nano in tampone nel pozzetto. Aggiungere alla soluzione cinque microlitri di GUV decorati con un b-disiLID. Coprire il campione con un foglio di alluminio e attendere circa 15 minuti affinché le vescicole si depositino.
Successivamente, posizionare il microvetrino sotto il microscopio confocale. Eccitare il campione a 552 nanometri per la visualizzazione mOrange. E a 638 nanometri per il DID nelle membrane del GUV.
I GUV mOrange-nano non sono riusciti a mostrare fluorescenza al buio. L'intensità di mOrange quantificata sulla membrana GUV ha mostrato un reclutamento proteico rapido ed efficace con piena reversibilità.
