Preparazione del campione e della miscela master per la misurazione della lunghezza dei telomeri mediante PCR quantitativa multiplex monocromatica (MMqPCR)

Inizia aggiungendo campioni di DNA genomico estratti da cellule mononucleate del sangue periferico rispettivamente alle strisce PCR A, B e C. Quindi agitare l'aliquota di DNA controllata scongelata per 30 secondi. Dopo aver centrifugato brevemente la provetta, aspirare l'intero volume nella prima provetta nella striscia di provette PCR a curva standard.

Quindi, aggiungere 70 microlitri di acqua di grado PCR nella seconda attraverso otto provette della striscia PCR a curva standard. Quindi risospendere il DNA di controllo nella prima provetta e aspirare 70 microlitri nella seconda provetta. Attendere 30 secondi e risospendere la soluzione nella seconda provetta.

Raccogliere i reagenti della miscela master e lasciarli raggiungere la temperatura ambiente nella cappa per PCR. Quindi aggiungere un microlitro dell'aliquota verde cyber all'aliquota tampone. Agitare tutte le aliquote per 10 secondi e centrifugarle per cinque secondi.

Quindi aggiungere le quantità specificate di tutti i reagenti e i primer della miscela master nella provetta di betaina da cinque millilitri. Dopo aver estratto la DNA polimerasi da meno 20 gradi Celsius, agitarla per 10 secondi, quindi centrifugare per cinque secondi. Una volta centrifugato, aggiungere lentamente 128 microlitri al master mix.

Agitare la provetta da cinque millilitri per 30 secondi e poi metterla da parte.