Per iniziare, recupera la fiala criogenica con le cellule dell'azoto liquido e scongelala in un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius per due minuti. Dopo aver trasferito le cellule scongelate in una provetta da 15 millilitri, aggiungere gradualmente 10 millilitri di terreno preriscaldato e centrifugare la provetta. Scartare il surnatante e risospendere le cellule in un millilitro di DPBS integrato contenente FBS e cloruro di calcio.
Quindi, mescolare un millilitro di sospensione cellulare con 50 microlitri ciascuno del cocktail di rimozione delle cellule morte e del cocktail di selezione della biotina in una provetta a fondo tondo di polistirene da cinque millilitri e incubare. Dopo il vortex, aggiungere 100 microlitri di perle di destrano alla sospensione cellulare e mescolare delicatamente due volte con la pipetta. Quindi aggiungere 1,3 millilitri di DPBS integrato alla miscela e incubare con un magnete per tre minuti a temperatura ambiente.
Capovolgere il magnete e il tubo per versare la sospensione di cellule vive in un nuovo tubo conico da 15 millilitri. Pellettare le celle in una centrifuga. Dopo aver rimosso la maggior parte del surnatante, risospendere le cellule in un millilitro di DPBS contenente lo 0,04% di albumina sierica bovina.
