Convalida della proliferazione e della migrazione cellulare delle cellule RSC96 stimolate da campo elettrico pulsato a nanosecondi (nsPEF)

Per iniziare, prendi le cellule RSC96 stimolate elettricamente e aggiungi 100 microlitri di cellule a ciascun pozzetto di una piastra di coltura cellulare a 96 pozzetti. Prelevare 10 microlitri di soluzione CCK8 dal kit e aggiungerla alla piastra di coltura cellulare a 96 pozzetti. Incubare la piastra in un incubatore ad anidride carbonica a 37 gradi Celsius per altri 30 minuti - 4 ore.

Seminare 3 volte 10 alla 5a cella in ciascun pozzetto di una piastra a sei pozzetti con un volume totale di 2 millilitri per pozzetto. Utilizzare la punta di una pipetta per tracciare una linea orizzontale sul fondo del pozzetto della coltura tenendo la punta verticalmente. Dopo aver rimosso i terreni di coltura, lavare le cellule con PBS due o tre volte.

Aggiungere 2 millilitri di terreno senza siero a ciascun pozzetto, quindi posizionare la piastra nell'incubatore a 37 gradi Celsius. Scatta foto con un ingrandimento quadruplo del microscopio invertito a 0 ore e 24 ore per osservare i cambiamenti nella migrazione cellulare. Il test CCK8 ha rivelato che le cellule RSC96 proliferano significativamente più velocemente nel gruppo dei 5 kilovolt per centimetro rispetto al controllo.

Al contrario, parametri più elevati hanno portato a tassi di proliferazione instabili rispetto ai gruppi di controllo e 5 kilovolt per centimetro. Il test di scratch ha rivelato che il tasso di migrazione delle celle RSC96 nel gruppo di 5 kilovolt per centimetro era significativamente più veloce di quello dei gruppi di controllo e 10 kilovolt per centimetro.