Per iniziare, avvia il software di analisi dei dati su un computer desktop. Fare clic su file, quindi su browser e scegliere seleziona cartella per aprire la cartella contenente i dati di imaging acquisiti. Seleziona più righe relative alle immagini scelte, inclusi i controlli non infetti ed escludendo le immagini supersaturate.
Annotare l'ID dell'immagine in un quaderno di laboratorio insieme alle informazioni registrate durante una seconda sessione di imaging. Fare clic su carica come gruppo per assemblare le immagini selezionate. Ora fai clic sull'icona di salvataggio per salvare la nuova immagine della sequenza in una nuova cartella per la rianalisi dei dati grezzi, se necessario.
Quindi, fai clic su opzioni seguite da display e seleziona il fattore di binning per identificare il binning utilizzato per ogni immagine. Il fattore di binning acquisito verrà visualizzato nella parte superiore di ogni immagine della sequenza. Per correggere tutti i fattori di binning allo stesso valore, fare doppio clic sull'immagine da regolare.
Nella finestra dell'amico degli strumenti, fai clic sull'opzione di regolazione dell'immagine, quindi scegli il fattore di binning appropriato. Fare doppio clic sull'immagine dei mouse non infetti, quindi selezionare l'opzione conteggi nel campo dell'unità. Regolate la scala dei colori su un valore minimo di 600.
Scegliere le opzioni di radianza nel campo delle unità per visualizzare la radianza dell'immagine risultante. Con la finestra della sequenza attiva, scegliere l'opzione radianza nel campo delle unità. Disabilitare la singola casella nell'area dei limiti della scala dei colori per regolare la scala dei colori e la tabella dei colori nella tavolozza degli strumenti.
Contrassegnare la scala logaritmica e le caselle manuali, quindi impostare i numeri di scala massimi in base al controllo non infetto e l'area con il segnale più alto come massimo. Dopo aver impostato la stessa scala per tutte le immagini, fare doppio clic su ciascuna immagine, ingrandire la finestra e utilizzare l'opzione di esportazione grafica per esportare la visualizzazione dell'immagine in un formato immagine. Assegna un nome ai file in base al trattamento, seguito dall'ID del topo e dal punto temporale.
Fare doppio clic sull'immagine della sequenza. Nella finestra della tavolozza degli strumenti, fare clic sulla sezione dello strumento ROI, quindi premere l'icona quadrata. Disegna un rettangolo su tutto il mouse.
Fare clic sul bordo della ROI creata e copiare e incollare la stessa ROI per ogni mouse. Quindi, nomina i ROI da registrare. Quindi fare clic sull'icona di salvataggio nella sezione dello strumento ROI.
Selezionare la casella, applicare alla sequenza. Quindi applica le ROI salvate per tutte le immagini facendo clic su carica. Regola la posizione della ROI per ciascun mouse per adattarlo meglio all'area di misurazione.
Quando tutti i mouse sono stati etichettati, fai clic sull'opzione di misurazione del ROI. Dovrebbe apparire la tabella delle misurazioni del ROI. Imposta i tipi di misurazione su radianza, gli attributi dell'immagine su tutti i valori possibili e le dimensioni del ROI su centimetri.
Quindi fare clic sull'opzione Seleziona tutto seguita da Copia. Incolla i dati direttamente nel software di analisi delle tabelle. Organizzare le colonne di dati per ordinare correttamente i gruppi.
Quindi, codifica a colori i dati per gruppi nel foglio di calcolo. Disporre i valori del flusso totale in modo che corrispondano ai valori del flusso totale ventrale e dorsale dello stesso topo. Quindi sommali per ottenere la bioluminescenza di tutto il corpo di ciascun topo.
Calcola la media e la deviazione standard dei valori sommati per ciascun gruppo. Traccia i dati in un software statistico per generare grafici. Infine, crea un pannello con immagini bioluminescenti.
Posiziona ogni topo in colonne e i punti temporali in righe per costruire una matrice di efficacia del farmaco. Quando il metodo della bioluminescenza viene applicato per valutare gli agenti antiparassitari, viene costruita una matrice di efficacia del farmaco per confrontare i composti di prova, esemplificati qui dal posaconazolo, rispetto al trattamento farmacologico standard utilizzato per la malattia di Chagas, il benznidazolo a 100 milligrammi per chilogrammo somministrato una volta al giorno. In questo studio longitudinale, il decorso temporale dell'infezione è illustrato confrontando un gruppo non trattato con quelli trattati.
I risultati dimostrano una riduzione del carico di parassiti, come indicato da una ridotta bioluminescenza, o una recidiva mostrata da un aumento del carico di parassiti e conseguente rilevamento della luce, suggerendo un composto o un regime di trattamento inefficace. La luce quantificata è rappresentata dalla somma del flusso totale ventrale e dorsale in fotoni al secondo in funzione del tempo di infezione.
