Per iniziare, ottenere organoidi gastrici umani in crescita attiva con diametri compresi tra 200 e 700 micrometri. Scongelare l'aliquota della matrice extracellulare, o ECM, sul ghiaccio per almeno 45 minuti. E preriscaldare le piastre di coltura cellulare a 37 gradi Celsius in un incubatore al 5% di anidride carbonica.
Dopo aver rimosso il terreno dai pozzetti della piastra di coltura, pipettare il PBS ghiacciato su ciascuna gocciolina ECM. E grattare il gel con il puntale della pipetta P-1000. Raccogliere il PBS con i frammenti ECM contenenti organoidi in una provetta conica da 15 millilitri.
Centrifugare la provetta a 200 G a quattro gradi Celsius per cinque minuti. Dopo aver aspirato il surnatante, aggiungere 350 microlitri di tripsina-EDTA allo 0,25% in ciascuna provetta e mescolare delicatamente. Incubare le provette a bagnomaria, temperate a 37 gradi Celsius per due-cinque minuti.
Aggiungere 600 microlitri di DMEM ghiacciato, integrato con penicillina e streptomicina in ogni provetta, e pipettare energicamente su e giù 40 volte. Centrifugare la provetta come dimostrato e risospendere la tavolozza cellulare in una ECM liquida ghiacciata. Per ogni campione, lastra 40 microlitri di ECM liquido contenente frammenti di organoidi in una sottile linea orizzontale lungo il diametro di un piatto con fondo di vetro da 35 millimetri.
Dopo 15-30 minuti di incubazione, aggiungere con cura due millilitri di mezzo di espansione dell'organoide alla piastra lungo il bordo della piastra senza disturbare il gel polimerizzato.
