Preparazione di coniugati anticorpo QDNB utilizzando il metodo di evaporazione dell'emulsione in un'unica fase

Per iniziare, aggiungi 100 microlitri di nanosfere QD preparate a 200 microlitri di tampone fosfato. Quindi aggiungere sei microlitri di EDC. Successivamente, incubare la miscela per 30 minuti a temperatura ambiente su un mixer rotante.

Centrifugare la miscela a 13,523 g per 10 minuti a temperatura ambiente ed eliminare il surnatante. Quindi, aggiungere 100 microlitri di tampone fosfato al precipitato. Coprire il tubo con il suo coperchio e immergerlo nel bagnomaria ad ultrasuoni operativo fino a quando il precipitato non è completamente disperso.

Disperdere 100 microgrammi di anticorpo in 200 microlitri di tampone fosfato e aggiungere la sospensione di nanosfere QD attivata alla soluzione anticorpale. Incubare la miscela a temperatura ambiente per 30 minuti con rotazione continua. Quindi rimuovere gli anticorpi in eccesso mediante centrifugazione a 6.010 g per cinque minuti a temperatura ambiente e scartare con cura il surnatante.

Per bloccare le nanosfere, aggiungere 200 microlitri di soluzione di caseina all'1% al residuo. Coprire il tubo con il suo coperchio e immergerlo nel bagnomaria ad ultrasuoni operativo fino a quando il residuo non è completamente disperso. Incubare la miscela a temperatura ambiente per due ore con rotazione continua.

Aggiungere 100 microlitri di soluzione conservante alla miscela e conservare a quattro gradi Celsius per un uso successivo.