Saggio di migrazione della ferita da graffio delle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) per lo studio dell'angiogenesi in vitro

Per iniziare, semina 100 microlitri di cellule HUVEC nei pozzetti di una piastra da 96 pozzetti. Posizionare la piastra in un incubatore per colture cellulari a 37 gradi Celsius sotto il 5% di anidride carbonica per sei ore per facilitare la sedimentazione cellulare. Successivamente, sostituire il terreno in ciascun pozzetto con 100 microlitri di terreno basale di crescita delle cellule endoteliali, contenente il 2% di FBS, e incubare nuovamente.

Il giorno seguente, posizionare la piastra in uno strumento per la creazione di avvolti da 96 pozzetti. Premere la leva del dispositivo per generare un graffio. Sollevare con cautela il coperchio dell'utensile per la creazione di ferite prima di rilasciare la leva per evitare doppi graffi.

Lavare i pozzetti due volte con 200 microlitri di terreno basale di crescita delle cellule endoteliali integrato con FBS. Dopo aver confermato la rimozione totale dei detriti, pipettare 100 microlitri delle soluzioni di stimolazione o controllo preparate in ciascun pozzetto. Utilizza un microscopio per l'imaging di cellule vive per acquisire immagini ogni ora per 24 ore.

Il controllo positivo ha mostrato una migrazione riuscita nell'area graffiata originale. I problemi tecnici sono stati visti come crescita cellulare irregolare, doppio graffio o onde nei bordi del graffio. Un aumento del 25% della distanza relativa della ferita è stato considerato ottimale.

Un'errata separazione dei controlli positivi e negativi indicava una bassa gamma dinamica.