Per preparare una sospensione unicellulare di midollo osseo da calvaria di topo, al microscopio da dissezione, staccare accuratamente la dura madre dal cranio isolato utilizzando una pinza smussata. Porre la calvaria in una pirofila contenente PBS tenuta in ghiaccio e utilizzare una pipetta da un millilitro per sciacquarla, assicurandosi della rimozione dei residui di sangue dalla sua superficie. Trasferite la calvaria in un nuovo piatto contenente abbastanza PBS fresco freddo sufficiente per immergerlo.
Usa le forbici sterili per tagliare la calvaria in frammenti di circa tre millimetri per tre millimetri in PBS freddo. Usando un ago calibro 18, praticare un foro sul fondo di una provetta da microcentrifuga da 500 microlitri. Inserire questa provetta in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri contenente 20 microlitri di PBS freddo.
Quindi trasferire i frammenti di calvaria nella provetta da 500 microlitri. Centrifugare il setup a 10.000 g per 30 secondi a quattro gradi Celsius. Risospendere le cellule del midollo osseo calvaria raccolte in 500 microlitri di tampone di lisi dei globuli rossi e incubare a temperatura ambiente per 30 secondi.
Trasferire la sospensione in una provetta da centrifuga da 15 millilitri contenente quattro millilitri di PBS freddo. Centrifugare a 400 g per sei minuti a quattro gradi Celsius. Lavare ancora una volta con cinque millilitri di PBS freddo.
Infine, risospendere il palato cellulare in un tampone appropriato.
