Lisi dei globuli rossi in campioni tumorali digeriti per il sequenziamento dell'RNA a singola cellula

Per iniziare, ottenere il campione tumorale filtrato e digerito. Centrifugare il campione a 450 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Aspirare il terreno senza disturbare il pellet e risospendere il pellet nel tampone di lisi ACK per rimuovere i globuli rossi e registrare il volume utilizzato.

Ripetere le fasi di centrifugazione e lisi fino a quando il pellet del campione non ha un colore rosso visibile dopo la centrifugazione. Quindi risospendere il pellet di campione in un terreno fresco. Mescolare 10 microlitri ciascuno di tripano e blu e le cellule dissociate in una provetta da 1,5 millilitri.

Caricare 10 microlitri su ciascun lato di un emocitometro. per contare le celle. Registrare la concentrazione delle cellule.

Percentuale di vitalità della conta totale delle cellule vive e volume finale dei terreni dopo il conteggio.