Estrazione del liquido di lavaggio intercellulare dall'apoplasto di grano per l'analisi degli enzimi correlati alla parete cellulare

Per iniziare, sciacquare due volte i pezzi di foglia di grano in acqua distillata per rimuovere qualsiasi contaminazione citosolica dalle estremità tagliate. Inserire i pezzi di foglia in un tubo di vetro a pareti spesse contenente un tampone di estrazione. Utilizzando una pompa a getto d'acqua, applicare un'infiltrazione sottovuoto per cinque minuti per impregnare le foglie con il tampone di estrazione.

Togliete i pezzi di foglia dal tubo di vetro e asciugateli con un tovagliolo di carta. Inserire i pezzi di foglie essiccate verticalmente in una provetta da centrifuga pre-raffreddata dotata di un disco forato. Centrifugare le foglie a 500 g per 10 minuti a 4 gradi Celsius.

Utilizzando una pipetta da 100 microlitri, trasferire il surnatante in una provetta per microcentrifuga da 1,5 millilitri pre-raffreddata. Conservare il surnatante raccolto a meno 20 gradi Celsius fino al momento dell'uso.