Colorazione delle cellule del midollo osseo di topo con Hoechst per rilevare le cellule della popolazione laterale mediante citometria a flusso

Per iniziare, prelevare le cellule del midollo osseo dal topo e aggiungere cinque microgrammi per millilitro di Hoechst 33342 a due millilitri di sospensione cellulare. Preparare anche il tubo di controllo negativo. Incubare a bagnomaria a 37 gradi Celsius per 90 minuti agitando delicatamente ogni 30 minuti Dopo l'incubazione, raffreddare le cellule sul ghiaccio per cinque minuti, quindi centrifugare a 250 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius.

Risospendere le cellule in una soluzione fredda contenente la soluzione salina bilanciata di Hank con il 2% di FBS. Centrifugare nuovamente a quattro gradi Celsius per cinque minuti. Quindi, risospendere il pellet cellulare risultante in 500 microlitri di soluzione di corsa per campione.

Prima dell'analisi di citometria a flusso, integrare le cellule con due microgrammi per millilitro di ioduro di propidio e metterle su ghiaccio per circa cinque minuti.