Coltivazione e mantenimento in vitro di nematodi di pino con Botrytis cinerea

Per iniziare, trasferisci un tappo di coltura di botrytis cinerea dal bordo più esterno della colonia su una coclea sterile di destrosio di patate. Incubare la piastra a 25 gradi Celsius per sette-10 giorni, o fino a quando la colonia fungina non raggiunge il bordo della piastra. Coltura B cinerea in chicchi d'orzo biologici sterilizzati a vapore, idratati e certificati per sette-10 giorni.

O fino a quando la superficie del cereale non è completamente colonizzata. Quindi, inoculare la coltura di B cinerea con una sospensione di nematode di pino. Incubare il pallone al buio per sette-10 giorni, o fino a quando la colonia fungina non è completamente consumata e il nematode si arrampica sulle pareti del pallone.

Per isolare i nematodi del pino, sciacquare le pareti del pallone con acqua di rubinetto. Quindi versare il contenuto su un tovagliolo di carta, posto in un imbuto o vassoio Baermann, e immergere i nematodi in acqua. Dopo 24-48 ore, recuperare i nematodi utilizzando un setaccio a maglie da 38 micrometri.

Lavare i nematodi accumulati in un contenitore con acqua di rubinetto. Utilizzando questa metodologia, la popolazione di nematodi del pino è aumentata di 100 volte in un periodo di crescita di otto giorni.