Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella meccanica tissutale come come le proprietà dei contatti cellulari cambiano nello spazio e nel tempo durante la morfogenesi tissutale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è debolmente invasiva ed è compatibile con l'imaging dal vivo come la microscopia a fogli di luce. Questa tecnica non richiede l'iniezione di perline nel tessuto.
Di solito usato come sonde demiere su cui ottenere froses, sono eccitato. A dimostrare il processo saranno Chardes, un ingegnere, e Raphael Clement, ricercatore del mio livello di terreno. Per iniziare, impostare un microscopio verticale per la microscopia a fogli di luce nella pianura orizzontale, quindi preparare il laser e l'ottica per fungere da pinzette ottiche.
Successivamente, espellere un micro-litro di perline fluorescenti da 500 nanometri in una cuvetta di vetro e aggiungere 10 millilitri di acqua distillata. Posizionare la cuvetta nel supporto della cuvetta sotto l'obiettivo e regolare la messa a fuoco dell'obiettivo in modo che l'obiettivo tocchi la superficie dell'acqua. Ora, apri il creatore QT dell'ambiente di sviluppo integrato che viene utilizzato per controllare il software di acquisizione.
Aprire il software di acquisizione, aprendo il microRheo. profilo e attivare la modalità di acquisizione dal vivo, selezionando dal vivo. Prima di accendere il laser, indossare occhiali di sicurezza, quindi regolare la potenza del laser su un watt e accendere il laser.
Il feed live dovrebbe ora mostrare una perla intrappolata al centro del laser. Se necessario, regolare la posizione della seconda lente del telescopio, per osservare il tallone a fuoco. Potrebbe anche essere necessario regolare l'angolo delle manovre del periscopio per centrare la perla nell'immagine.
Preparare la scheda di acquisizione dati e le connessioni di contenimento, come descritto nella figura tre del protocollo di testo allegato. Nell'interfaccia dell'otturatore ottico regolare il parametro time open sec, su 000.000, il parametro time closed sec su 000.000, il parametro mode su single e il parametro trigger su EXT. Una volta impostato, selezionare il pulsante abilita.
In QT Creator, aprite l'ot. profilo per aprire il progetto. Modificare il nome dell'input e dell'output in aogenerator.
cpp in modo che corrisponda alle schede MI utilizzate nella configurazione. Infine, compilare ed eseguire il software di pinzette ottiche. Nel software di acquisizione, selezionare il tempo di esposizione desiderato, il gioco, il tempo tra due immagini, il numero di immagini da acquisire e la potenza del laser.
Quindi, nel software di pinzette ottiche, impostare il parametro delle pinzette ottiche, mostrato qui, per tracciare un cerchio. Selezionare quindi la casella Parametri ai, la casella peso in avanti e premere il pulsante di pressione del record, quindi avviare l'acquisizione dell'immagine. Accendere le pinzette ottiche, selezionare il pulsante di generazione e consentire al tallone intrappolato di completare almeno due cerchi completi, quindi arrestare le pinzette ottiche, deselezionando il pulsante di generazione.
Infine, interrompere l'acquisizione dell'immagine. Si noti che nella cartella predefinita vengono creati un filmato tiff e un file di testo con tensioni galvanometriche. Apri Matlab, vai nella cartella di calibrazione ed esegui la posizione due script di tensione Lo script calcola la funzione di interpolazione, traducendo le tensioni del galvanometro in posizione di trappola ottica.
Successivamente, seguire il protocollo di testo di accompagnamento per impostare il filmato di calibrazione. Verificare se la mappa di interpolazione per le posizioni laser X e Y viene calcolata e visualizzata correttamente dallo script. Verificare la presenza di aree bianche nella mappa, che rappresentano i valori mancanti.
Se sono disponibili aree bianche significative, ripetere l'operazione con un nuovo filmato di calibrazione. Il filmato di calibrazione mostrato qui rappresenta un filmato con dati adeguati. Usando un luccio, o un pennello umido, seleziona circa 10 embrioni nella fase desiderata e allineali.
Quindi usa una penna di marcatura a diamante per tagliare un pezzo dello scivolo di vetro, a 10 per 20 per un milometro. Aggiungere la colla su un lato del pezzo tagliato e lasciarlo asciugare per 20 secondi, quindi capovolgerlo e posizionarlo sulla linea di embrioni, attaccarlo al bordo dello scivolo. Quindi, installare la preparazione nel supporto del campione e posizionare il supporto nella cuvetta, quindi posizionare la cuvetta sullo stato piso-elettrico e riempirla con acqua.
Per iniziare, trova la posizione di interesse e sposta il punto centrale della giunzione bersaglio nella posizione della trappola laser, usando lo stadio pisano. Impostate i parametri della trappola per ottenere oscillazioni perpendicolari alla linea di contatto. Impostare anche le fasi come zero, le ampiezze in direzioni X e Y per avere un movimento perpendicolare alla linea di contatto, e impostare l'ampiezza su 0,1 volt.
Ora, avvia l'acquisizione, usando una frequenza fotogrammi veloce, ad esempio 10 fotogrammi al secondo. Una volta iniziata l'imaging, accendere le pinzette ottiche premendo il pulsante vai. Al termine dell'imaging, spegnere le pinzette e interrompere l'acquisizione dell'immagine.
Nella cartella specificata, ci sarà un filmato e un file di testo contenente le tensioni del galvanometro durante l'acquisizione. Aprite il filmato per osservare i fotogrammi raccolti. Dopo l'analisi del video, misurare la rigidità e la tensione nel campione di tessuto, aprendo il video in Matlab.
Qui, utilizzare la funzione di plottaggio, per tracciare la posizione dell'interfaccia in funzione della posizione dell'abbondanza. Quindi, utilizzare la cassetta degli attrezzi matlab easy fit free per eseguire una vestibilità lineare dei dati. L'inverso della pendenza dell'adattamento fornisce il rapporto medio della posizione dell'abbondanza sulla posizione dell'interfaccia.
Da queste informazioni, utilizzare le equazioni nel protocollo di testo di accompagnamento per determinare la rigidità e i valori di tensione. La trappola laser produce una deflessione sinusoidale del campione, che è perpendicolare all'interfaccia. qui mostrate come tre posizioni di interfaccia successive.
Questo può anche essere registrato come film per generare un climografo e vengono ulteriormente analizzati per determinare la posizione dell'interfaccia con risoluzione dei sub-pixel. Qui, il periodo era di cinque secondi. Nel regime delle piccole deformazioni, la trappola e le posizioni dell'interfaccia sono proporzionali.
L'ampiezza della deflessione dell'interfaccia rispetto a quella della trappola dà accesso alla tensione o alla rigidità dell'interfaccia. Ecco le basi di un esperimento di pull and release. Quando la trappola ottica è accesa, a circa un micrometro di distanza dal punto medio dell'interfaccia tra due celle, l'interfaccia devia verso la posizione della trappola.
La trappola viene quindi spenta dopo la quantità di tempo desiderata. Il grafico risultante può essere paragonato a modelli logici reali ipotizzati, come un modello simile a Maxwell. Non dimenticare che lavorare con il laser a infrarossi può essere estremamente pericoloso e precauzioni come indossare occhiali protettivi, avrebbero sempre dovuto essere prese quando si esegue questa procedura.
Qui, con l'utente più frequente da pinzette tinkle per quelle dell'embrione, il metodo può essere utilizzato anche per altri sistemi madre come il
