Autore in primo piano: Importanza del sorting di singole cellule nell'isolamento di popolazioni purificate di cellule staminali mesenchimali

Questo protocollo descrive in dettaglio un metodo cruciale per caratterizzare e purificare accuratamente le cellule staminali mesenchimali umane su un'unica piattaforma, consentendo applicazioni efficienti a valle come il trapianto di cellule staminali. È particolarmente significativo per i laboratori clinici che migliorano i saggi molecolari e citogenetici attraverso una precisa selezione di singole cellule di cellule staminali ingegnerizzate o naturali. I metodi comunemente usati per isolare le popolazioni di cellule staminali purificate si riferiscono a tecniche come la separazione immunomagnetica, il gradiente di densità o la selezione microfluidica delle cellule.

Una tecnica come l'ordinamento dell'indice consente di collegarlo alla profilazione dell'RNA di una singola cellula in grado di estrarre informazioni trascrittomiche di ogni cellula selezionata. Le sfide principali riguardano il mantenimento della qualità del campione, l'ottimizzazione delle condizioni di coltura cellulare, compresa la densità cellulare e la vitalità durante e dopo la selezione. Inoltre, verrebbe presa in considerazione anche la scelta di ugelli di dimensioni adeguate per lo strumento e la garanzia di un accesso tempestivo agli smistatori.

Questo protocollo illustra un preciso pannello di colorazione per l'immunofenotipizzazione e lo smistamento della popolazione cellulare desiderata. Garantisce la qualità standardizzata del campione, la vitalità cellulare ottimale, la densità per l'ordinamento della popolazione cellulare e definisce i parametri sperimentali di selezione sul software FACSDiva. Questo metodo consente una selezione diretta e un'immunofenotipizzazione di popolazioni di cellule staminali che esprimono biomarcatori specifici.

Questa semplice piattaforma consente una selezione efficiente in base alla popolazione target, aiutando e ottenendo campioni purificati per le successive applicazioni a valle.