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Intranuclear Microinjection of DNA into Dissociated Adult Mammalian Neurons

Primary neuronal cell cultures are valuable tools to study protein function since they represent a more biologically relevant system compared to ...

National Institutes of Health (NIH)

&#x77AC;&#x53D8;&#x7126;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x7A0B; &#xFF08;&#x79F0;&#x4E3A; neuroeffector &#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x6216; NCTs&#xFF09; &#x9F20;&#x6807;&#x5206;&#x79BB;&#x8F93;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4ECE;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x9759;&#x8109;&#x66F2;&#x5F20;&#x884C;&#x4E8B; postjunctional P2X &#x53D7;&#x4F53;&#x5728; ATP &#x4E0B;&#x6BD2;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x8C03;&#x67E5;&#x6765;&#x6E90;&#x548C;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x5728; NCTs.&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x9F20;&#x6807;&#x8F93;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x5DF2;&#x52A0;&#x8F7D;&#x7ECF;&#x6307;&#x793A;&#x5668;&#x4FC4;&#x52D2;&#x5188;&#x5DDE;&#x7EFF; 488 BAPTA-1 AM &#x548C;&#x67E5;&#x770B;&#x4E0E;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1; (10 microM&#xFF09; &#x4E0B;&#x8DCC;&#x7684;&#x632F;&#x5E45; NCTs 45 + /-6%&#x3002;&#x5706;&#x5F27;&#x5076;&#x6C2E;&#x9178;&#x51CF;&#x7F13; NCTs (&#x4ECE; 200 + /-10 ms-800 + /-100 ms &#x65F6;&#x95F4;&#x8BFE;&#x7A0B;&#xFF09; &#x4E2D;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x5496;&#x5561;&#x56E0; &#xFF08;3 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09; &#x81F4;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x5C40;&#x90E8;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8; &#xFF08;&#x706B;&#x82B1;&#xFF09;&#x3002;&#x65E2;&#x4E0D; T &#x578B;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242; NiCl2 (50 microM&#xFF09; &#x6216; mibefradil &#x76D0;&#x9178; (10 microM&#xFF09; &#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x7684;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x63A5;&#x5934;&#x7535;&#x4F4D; (2 + /-5%) &#x548C;-3 + /-10%&#x6216; NCTs &#xFF08;-20 + /-36%&#xFF09; &#x548C; 3 + /-13%&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7EA6;&#x6709; 20 %ncts &#x662F;&#x4E0E;&#x672C;&#x5730;&#x3001; &#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x62BD;&#x6410;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x5B58;&#x5728; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x76D0;&#x9178;&#x54CC;&#x5511;&#x55EA;&#x76F8;&#x5173;&#x8054; &#xFF08;100 nM&#xFF09;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; NCTs &#x53EF;&#x4EE5;&#x542F;&#x52A8;&#x5F53;&#x5730;&#x7684;&#x6536;&#x7F29;&#x3002;&#x6162; (+ /-0.4 microm s(-1))&#xFF0C;&#x81EA;&#x53D1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7ECF;&#x6CE2;&#x5076;&#x5C14;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; 5.8&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5E97;&#x6700;&#x521D;&#x653E;&#x5927;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x87AF;&#x5408; P2X &#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FDB;&#x5165;&#x7684;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F53;&#x5730;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x7ECF;&#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x3002;

&#x6765;&#x6E90;&#x548C;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x7ECF; neuroeffector &#x9F20;&#x6807;&#x8F93;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

The detection of focal Ca(2+) transients (called neuroeffector Ca(2+) transients, or NCTs) in smooth muscle of the mouse isolated vas deferens has been used to detect the packeted release of ATP from nerve terminal varicosities acting at postjunctional P2X receptors. The present study investigates the sources and sequestration of Ca(2+) in NCTs. Smooth muscle cells in whole mouse deferens were loaded with the Ca(2+) indicator Oregon Green 488 BAPTA-1 AM and viewed with a confocal microscope. Ryanodine (10 microM) decreased the amplitude of NCTs by 45 +/- 6 %. Cyclopiazonic acid slowed the recovery of NCTs (from a time course of 200 +/- 10 ms to 800 +/- 100 ms). Caffeine (3 mM) induced spontaneous focal smooth muscle Ca(2+) transients (sparks). Neither of the T-type Ca(2+) channel blockers NiCl2 (50 microM) or mibefradil dihydrochloride (10 microM) affected the amplitude of excitatory junction potentials (2 +/- 5 % and -3 +/- 10 %) or NCTs (-20 +/- 36 % and 3 +/- 13 %). In about 20 % of cells, NCTs were associated with a local, subcellular twitch that remained in the presence of the alpha1-adrenoceptor antagonist prazosin (100 nM), showing that NCTs can initiate local contractions. Slow (5.8 +/- 0.4 microm s(-1)), spontaneous smooth muscle Ca(2+) waves were occasionally observed. Thus, Ca(2+) stores initially amplify and then sequester the Ca(2+) that enters through P2X receptors and there is no amplification by local voltage-gated Ca(2+) channels.

The sources and sequestration of Ca(2+) contributing to neuroeffector Ca(2+) transients in the mouse vas deferens.

La d&#xE9;tection de focale Ca (2 +) transitoires (appel&#xE9; neuroeffecteurs Ca (2 +) transitoires ou NSTI) dans le muscle lisse des d&#xE9;f&#xE9;rent de souris vas isol&#xE9;s a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour d&#xE9;tecter la lib&#xE9;ration en paquets d&#x26;#39;ATP &#xE0; partir varicosit&#xE9;s terminales nerveuses qui agissent au P2X postjonctionnelle r&#xE9;cepteurs. La pr&#xE9;sente &#xE9;tude examine les sources et la s&#xE9;questration de Ca (2 +) dans le NCTS. Les cellules musculaires lisses dans d&#xE9;f&#xE9;rent de souris enti&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; charg&#xE9;s avec le Ca (2 +) indicateur de l&#x26;#39;Oregon Green 488 BAPTA-une heures et visualis&#xE9;es avec un microscope confocal. Ryanodine (10 microM) a diminu&#xE9; l&#x26;#39;amplitude du NSTI par 45 + / - 6%. L&#x26;#39;acide cyclopiazonique ralenti la reprise du NSTI (&#xE0; partir d&#x26;#39;une &#xE9;volution dans le temps de 200 + / - 10 ms &#xE0; 800 + / - 100 ms). La caf&#xE9;ine (3 mM) induit spontan&#xE9;e focale du muscle lisse Ca (2 +) transitoires (&#xE9;tincelles). Ni de la Ca de type T (2 +) bloqueurs des canaux NiCl2 (50 microM) ou dichlorhydrate de mib&#xE9;fradil (10 microM) affect&#xE9;s l&#x26;#39;amplitude des potentiels de jonction excitateurs (2 + / - 5% et -3 + / - 10%) ou NSTI (-20 + / - 36% et 3 + / - 13%). Dans environ 20% des cellules, le NSTI ont &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle locale, contraction subcellulaire qui restait dans la pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;antagoniste alpha1 prazosine-adr&#xE9;nergiques (100 nM), montrant que le NSTI peut initier des contractions locales. Lent (5,8 + / - 0,4 microm&#xE8;tre s (-1)), spontan&#xE9;e du muscle lisse Ca (2 +) ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s occasionnellement vagues. Ainsi, Ca (2 +) stocke d&#x26;#39;abord amplifier puis s&#xE9;questrer le Ca (2 +) qui p&#xE9;n&#xE8;tre &#xE0; travers les r&#xE9;cepteurs P2X et il n&#x26;#39;y a pas d&#x26;#39;amplification par les autorit&#xE9;s locales voltage-d&#xE9;pendants Ca (2 +) des canaux.

Les sources et la s&#xE9;questration de Ca (2 +) Contribuer &#xE0; neuroeffecteurs Ca (2 +) Transitoires dans canal d&#xE9;f&#xE9;rent de souris

Die Quellen und Sequestrierung von Ca (2 +) einen Beitrag zur Neuroeffektor Ca (2 +) in den Transienten Maus Samenleiter.

La rilevazione di focale Ca(2+) transitori (chiamato neuroeffector Ca(2+) transitori o NCTs) nel muscolo liscio dei vasi deferenti mouse isolato &egrave; stata usata per rilevare il rilascio di ATP pacchetti da terminale varicosit&agrave; nervose, agendo a postjunctional P2X recettori. Il presente studio indaga le fonti e il sequestro di Ca(2+) nelle cellule muscolari lisce NCTs. nel deferens del mouse intero sono stati caricati con l&#39;indicatore di Ca(2+) Oregon Green 488 BAPTA-1 AM e hanno visto con un microscopio confocale. Rianodinico (10 microM) diminuito l&#39;ampiezza del NCTs da 45 + /-6%. Acido Cyclopiazonic rallentato la ripresa del NCTs (da un corso a tempo di 200 + /-10 ms a 800 + 100 ms). Caffeina (3 mM) indotta da spontanea focale muscolo liscio Ca(2+) transitori (scintille). N&eacute; il Ca(2+) T-tipo canale bloccanti NiCl2 (50 microM) o mibefradil diidrocloruro (10 microM) colpite l&#39;ampiezza dei potenziali eccitatori junction (2 + /-5%) e -3 + /-10% o NCTs (-20 + 36%) e 3 + 13%. In circa il 20% delle cellule, NCTs sono stati associati con una contrazione locale, sottocellulari che rimase in presenza del prazosin antagonista alfa1-adrenorecettori (100 nM), mostrando che il NCTs possono iniziare le contrazioni locali. Lento (5,8 + /-0.4 microm s(-1)), muscolo liscio spontaneo Ca(2+) onde occasionalmente sono state osservate. Cos&igrave;, Ca(2+) negozi inizialmente amplificano e poi sequestrano il Ca(2+) che entra attraverso i recettori P2X e non non c&#39;&egrave; nessuna amplificazione da canali locali del Ca(2+) di tensione-gated.

Le fonti e il sequestro di Ca(2+) che contribuiscono a neuroeffector Ca(2+) transitori nei deferenti del mouse.

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x8F38;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x904E;&#x6E21;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#xFF08;&#x795E;&#x7D4C;&#x52B9;&#x679C;&#x5668;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x904E;&#x6E21;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;NCTS&#x3068;&#x3082;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#xFF09;postjunctional P2X&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x7AEF;&#x672B;varicosities&#x304B;&#x3089;ATP&#x306E;packeted&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;NCTS&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;Ca&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8F38;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AA;&#x30EC;&#x30B4;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;488 BAPTA-1&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x305F;AM&#x3068;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x898B;&#x308B;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;10&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x304C;45&#x3067;NCTS&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;+ /  -  6&#xFF05;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D4;&#x30A2;&#x30BE;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;NCTS&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x9045;&#x3089;&#x305B;&#x305F;&#xFF08;200&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;+ /  -  10&#x30DF;&#x30EA;&#x79D2;&#x301C;800 + /  -  100&#x30DF;&#x30EA;&#x79D2;&#xFF09;&#x3002;&#x30AB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;3 mM&#xFF09;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;&#x706B;&#x82B1;&#xFF09;&#x3002; T&#x578B;Ca&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x3082;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;NiCl2&#xFF08;50&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;mibefradil&#x4E8C;&#x5869;&#x9178;&#x5869;&#xFF08;10&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x306F;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x96FB;&#x4F4D;&#xFF08;2 + /  -  5&#xFF05;&#x3001;-3 + /  -  10&#xFF05;&#xFF09;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x308A;&#x3001;NCTS &#xFF08;-20 + /  -  36&#xFF05;&#x3001;3 + /  -  13&#xFF05;&#xFF09;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D04;20&#xFF05;&#x3067;&#x3001;NCTS NCTS&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x3B1;1-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BE;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;100nM&#xFF09;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x5730;&#x65B9;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3068;&#x200B;&#x200B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x9045;&#x3044;&#xFF08;5.8 + /  -  0.4&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#xFF08;-1&#xFF09;&#xFF09;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6CE2;&#x304C;&#x6642;&#x6298;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x304C;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x3001;P2X&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5165;&#x308A;&#x3001;&#x5730;&#x5143;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5168;&#x304F;&#x5897;&#x5E45;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x9694;&#x96E2;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8F38;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x52B9;&#x679C;&#x5668;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x904E;&#x6E21;&#x73FE;&#x8C61;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306E;Ca&#x6E90;&#x3068;&#x9694;&#x96E2;&#xFF08;2 +&#xFF09;

Postjunctional P2X &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; varicosities&#xC5D0;&#xC11C; ATP&#xC758; packeted &#xBC84;&#xC804;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xCD08;&#xC810; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; (neuroeffector Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; NCTs &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD568;) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC808;&#xC5F0; vas deferens&#xC758; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC804;&#xCCB4; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; deferens&#xC5D0;&#xC11C; NCTs. &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; ca(2+)&#xC758; &#xC624; &#xB808; &#xACE4; &#xADF8;&#xB9B0; 488 BAPTA-1 Ca(2+) &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB41C; &#xC624;&#xC804; &#xBC0F; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF8;. Ryanodine (10 microM) 45 &plusmn; 6%&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Ncts&#xC758; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. Cyclopiazonic &#xC0B0; (10ms 100ms + 800 + 200 &#xC2DC;&#xAC04; &#xACFC;&#xC815;)&#xC5D0;&#xC11C; Ncts&#xC758; &#xD68C;&#xBCF5; &#xB454;&#xD654;. &#xCE74;&#xD398;&#xC778; (3mm) &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xCD08;&#xC810; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; (&#xC2A4;&#xD30C;&#xD06C;) &#xC720;&#xBC1C;. T &#xD615; ca(2+)&#xC758; &#xC5B4;&#xB290; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; NiCl2 (50 microM) &#xB610;&#xB294; mibefradil dihydrochloride (10 microM) &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; &#xC811;&#xD569; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;-3 &plusmn; 10% &#xBC0F; &plusmn; 5% (2) &#xB610;&#xB294; NCTs (-20 &plusmn; 36%)&#xC640; 13% &plusmn; 3&#xC758; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC57D; 20%, NCTs &#xB85C;&#xCEEC; subcellular &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; alpha1-adrenoceptor &#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; prazosin &#xC874;&#xC7AC; &#xC720;&#xC9C0;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; (100 nM), &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; NCTs &#xB85C;&#xCEEC; &#xC218; &#xCD95;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; (5.8 &plusmn; 0.4 microm s(-1)), &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; Ca(2+) &#xD30C;&#xB3C4; &#xAC00;&#xB054; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Ca(2+) &#xC0C1;&#xC810;&#xACFC; &#xCC98;&#xC74C; &#xC99D;&#xD3ED; P2X &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC785;&#xB825; &#xD558;&#xBA74; ca(2+)&#xB97C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xD604;&#xC9C0; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xBB34; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC740;.

&#xC18C;&#xC2A4;&#xC640; Ca(2+) neuroeffector Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; vas deferens&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;.

La detecci&#xF3;n de foco de Ca (2 +) transitorios (llamado NEUROEFECTORA Ca (2 +), o transitorios NSIT) en el m&#xFA;sculo liso de los conductos deferentes deferente de rat&#xF3;n aislados se ha utilizado para detectar la liberaci&#xF3;n packeted de ATP a partir de varicosidades terminales nerviosas que act&#xFA;an en P2X postuni&#xF3;n receptores. El presente estudio investiga las fuentes y la absorci&#xF3;n de Ca (2 +) en NSIT. Las c&#xE9;lulas musculares lisas en deferentes de rat&#xF3;n enteros fueron cargados con el Ca (2 +) indicador de Oregon Green 488 BAPTA-1 AM y se ve con un microscopio confocal. Rianodina (10 microM) se redujo la amplitud de NSIT a 45 + / - 6%. &#xC1;cido ciclopiaz&#xF3;nico frenado la recuperaci&#xF3;n del NSTI (a partir de un curso de tiempo de 200 + / - 10 ms a 800 + / - 100 ms). La cafe&#xED;na (3 mM) inducida espont&#xE1;nea focal de m&#xFA;sculo liso de Ca (2 +) transitorios (chispas). Ninguno de los Ca tipo T (2 +) bloqueadores de los canales NiCl2 (50 microM) o diclorhidrato de mibefradil (10 microM) afect&#xF3; a la amplitud de los potenciales de uni&#xF3;n excitatorio (2 + / - 5% y -3 + / - 10%) o NCTS (-20 + / - 36% y 3 + / - 13%). En alrededor del 20% de las c&#xE9;lulas, NCTS se asociaron con un espasmo local, subcelular que permaneci&#xF3; en la presencia del antagonista de los alfa1 prazosina de los receptores adren&#xE9;rgicos (100 nm), que muestra que la NCTS puede iniciar las contracciones locales. Lento (5.8 + / - 0,4 micras s (-1)), espont&#xE1;neo del m&#xFA;sculo liso de Ca (2 +) se observaron olas de vez en cuando. As&#xED;, Ca (2 +) almacena inicialmente amplificar y luego secuestrar el Ca (2 +) que entra a trav&#xE9;s de receptores P2X y no hay amplificaci&#xF3;n por local de voltaje de Ca (2 +) canales.

Las fuentes y el secuestro de Ca (2 +) Contribuir a la NEUROEFECTORA Ca (2 +) Transitorios en el conducto deferente de rat&#xF3;n

GPR35 &#x662F;&#x6700;&#x8FD1;&quot;de-orphanized&quot;&#x5728;&#x514B;&#x9686;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x8868;&#x8FBE;&#x5D4C;&#x5408;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D; &alpha;-&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x9499;&#x6D4B;&#x91CF; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x72AC;&#x5C3F;&#x55B9;&#x5549;&#x9178;&#x3001; &#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x624E;&#x666E;&#x53F8;&#x7279;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x5408;&#x6210;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176;&#xFF0C;&#x6210;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4E3A; GPR35&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x4EE5;&#x672C;&#x673A;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8868;&#x8FBE;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x548C;&#x6548;&#x5E94;&#x5668; GPR35 &#x7684;&#x8026;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x793A; GPR35 &#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x5E76;&#x68C0;&#x67E5;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; N &#x578B; (Ca(V)2.2) &#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x8868;&#x793A; GPR35 &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x516C;&#x5F00;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8865;&#x54C1;&#x53D7;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x72AC;&#x5C3F;&#x55B9;&#x5549;&#x9178;&#x6216;&#x624E;&#x666E;&#x53F8;&#x7279;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9C81;&#x68D2;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9499;&#x5F53;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x7279;&#x6027;&#x7684; Gbetagamma &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x3002;GPR35 &#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x548C;&#x4E24;&#x79CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F71;&#x54CD;&#x53D7;&#x963B;&#x6CE2;&#x6C0F;&#x6746;&#x83CC;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x6307;&#x793A; G(i/o) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;&#x624E;&#x666E;&#x53F8;&#x7279;&#x8868;&#x793A; GPR35a&#xFF0C;GPR35&#xFF0C;&#x77ED;&#x63A5;&#x5934;&#x5907;&#x9009;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x662F;&#x66F4;&#x6709;&#x529B; (EC(50) = 1 microM&#xFF09; &#x72AC;&#x6BD4;&#x9178; (58 microM&#xFF09; &#x4F46;&#x4E86; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 60%&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x9499;&#x5F53;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#xFF09; &#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; GPR35b&#xFF0C;&#x6709;&#x989D;&#x5916;&#x7684; 31 &#x6B8B;&#x7559; N &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6709;&#x591A;&#x5927;&#x7684;&#x53EF;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;GPR35a &#x548C; GPR35b &#x4F3C;&#x4E4E;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A; GPR35 &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x53CA;&#x7A81;&#x89E6;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7; GPR35&#xFF0C;&#x5B64;&#x513F;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x6FC0;&#x6D3B; N &#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

GPR35 is a G protein-coupled receptor recently "de-orphanized" using high-throughput intracellular calcium measurements in clonal cell lines expressing a chimeric G-protein alpha-subunit. From these screens, kynurenic acid, an endogenous metabolite of tryptophan, and zaprinast, a synthetic inhibitor of cyclic guanosine monophosphate-specific phosphodiesterase, emerged as potential agonists for GPR35. To investigate the coupling of GPR35 to natively expressed neuronal signaling pathways and effectors, we heterologously expressed GPR35 in rat sympathetic neurons and examined the modulation of N-type (Ca(V)2.2) calcium channels. In neurons expressing GPR35, calcium channels were inhibited in the absence of overt agonists, indicating a tonic receptor activity. Application of kynurenic acid or zaprinast resulted in robust voltage-dependent calcium current inhibition characteristic of Gbetagamma-mediated modulation. Both agonist-independent and -dependent effects of GPR35 were blocked by Bordetella pertussis toxin pretreatment indicating the involvement of G(i/o) proteins. In neurons expressing GPR35a, a short splice variant of GPR35, zaprinast was more potent (EC(50) = 1 microM) than kynurenic acid (58 microM) but had a similar efficacy (approximately 60% maximal calcium current inhibition). Expression of GPR35b, which has an additional 31 residues at the N terminus, produced similar results but with much greater variability. Both GPR35a and GPR35b appeared to have similar expression patterns when fused to fluorescent proteins. These results suggest a potential role for GPR35 in regulating neuronal excitability and synaptic release.

Inhibition of N-type calcium channels by activation of GPR35, an orphan receptor, heterologously expressed in rat sympathetic neurons.

GPR35 est une prot&#xE9;ine G-r&#xE9;cepteur coupl&#xE9; &#xE0; r&#xE9;cemment &#x26;quot;d&#xE9;-orphanized&#x26;quot; &#xE0; haut d&#xE9;bit en utilisant les mesures de calcium intracellulaire dans des lign&#xE9;es cellulaires clonales exprimant une chim&#xE8;re prot&#xE9;ine G sous-unit&#xE9; alpha. A partir de ces &#xE9;crans, de l&#x26;#39;acide kynur&#xE9;nique, un m&#xE9;tabolite endog&#xE8;ne de tryptophane, et zaprinast, un inhibiteur synth&#xE9;tique de la guanosine monophosphate cyclique phosphodiest&#xE9;rase sp&#xE9;cifique, a &#xE9;merg&#xE9; comme des agonistes potentiels pour GPR35. &#xC0; examiner le couplage de GPR35 &#xE0; natif exprim&#xE9;es neuronales voies de signalisation et des effecteurs, on h&#xE9;t&#xE9;rologue exprim&#xE9; dans les neurones du rat GPR35 sympathiques et examin&#xE9; la modulation de type N (Ca (V) 2,2) les canaux calciques. Dans exprimant GPR35 neurones, les canaux de calcium ont &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e en l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;agonistes manifestes, indiquant une activit&#xE9; de r&#xE9;cepteur tonique. Application de l&#x26;#39;acide kynur&#xE9;nique ou zaprinast entra&#xEE;n&#xE9; robuste d&#xE9;pendant de la tension caract&#xE9;ristique d&#x26;#39;inhibition de calcium actuel de Gbetagamma m&#xE9;di&#xE9;e par la modulation. Les deux agoniste-ind&#xE9;pendants-d&#xE9;pendants et les effets de GPR35 ont &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9;s par un pr&#xE9;traitement toxine de Bordetella pertussis indiquant l&#x26;#39;implication de G (i / o) des prot&#xE9;ines. Dans les neurones exprimant GPR35a, un variant d&#x26;#39;&#xE9;pissage &#xE0; court de GPR35, zaprinast &#xE9;tait plus puissant (CE (50) = 1 microM) que l&#x26;#39;acide kynur&#xE9;nique (58 microM), mais avait une efficacit&#xE9; similaire (environ 60% d&#x26;#39;inhibition de calcium courant maximal). Expression de GPR35b, qui a 31 autres r&#xE9;sidus &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale, produit des r&#xE9;sultats similaires mais avec une variabilit&#xE9; beaucoup plus grande. Les deux GPR35a et GPR35b semble avoir des profils d&#x26;#39;expression similaires lorsqu&#x26;#39;ils sont fusionn&#xE9;s &#xE0; des prot&#xE9;ines fluorescentes. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un r&#xF4;le potentiel de GPR35 dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;excitabilit&#xE9; neuronale et la lib&#xE9;ration synaptique.

L&#x26;#39;inhibition des canaux calciques de type N par l&#x26;#39;activation de GPR35, un r&#xE9;cepteur orphelin, exprim&#xE9;e de mani&#xE8;re h&#xE9;t&#xE9;rologue dans les neurones sympathiques de rat

GPR35 ist ein G-Protein-gekoppelter Rezeptor k&uuml;rzlich &quot;de-orphanized&quot; mit hohem Durchsatz intrazellul&auml;re Kalzium Messungen in klonalen Zelllinien, die Ausdruck einer Chim&auml;ren G-Protein Alpha-Untereinheit. Ausgehend von diesen Masken, Kynurenic S&auml;ure, entstand eine endogene Metabolit von Tryptophan und Zaprinast, ein synthetisches Inhibitor der zyklischen Guanosinmonophosphat-spezifischen Phosphodiesterase, als potenzielle Agonisten f&uuml;r GPR35. Um die Kupplung des GPR35 nativ exprimierten neuronale Signalwege und Effektoren zu untersuchen, wir heterologously GPR35 in Ratte sympathischen Neuronen exprimiert und untersucht die Beeinflussung der N-Typ (Ca(V)2.2)-Kalzium-Kan&auml;le. In Neuronen, die GPR35 zum Ausdruck zu bringen wurden Kalzium-Kan&auml;le ohne offenkundige Agonisten, angibt, eine Tonikum-Rezeptor-Aktivit&auml;t gehemmt. Anwendung der Kynurenic S&auml;ure oder Zaprinast f&uuml;hrte robuste Spannung-abh&auml;ngige Kalzium aktuelle Hemmung charakteristisch f&uuml;r Gbetagamma-vermittelten Modulation. Sowohl Agonisten-unabh&auml;ngige und -abh&auml;ngige Effekte des GPR35 wurden von Bordetella Pertussis-Toxin Vorbehandlung angibt, die Einbeziehung der G(i/o) Proteine blockiert. In Neuronen Ausdr&uuml;cken GPR35a, eine kurze Splei&szlig;-Variante des GPR35, wurde Zaprinast potenter (EC(50) = 1 MicroM) als Kynurenic S&auml;ure (58 MicroM) hatte aber eine &auml;hnliche Wirksamkeit (ca. 60 % maximale Kalzium aktuelle Hemmung). Ausdruck von GPR35b, die eine zus&auml;tzliche 31 R&uuml;ckst&auml;nde im N-Terminus, produzierte &auml;hnliche Ergebnisse, aber mit viel gr&ouml;&szlig;ere Variabilit&auml;t hat. Sowohl die GPR35a als auch die GPR35b schien &auml;hnlich Ausdrucksmuster wenn fluoreszierende Proteine verschmolzen haben. Diese Resultate schlagen eine m&ouml;gliche Rolle f&uuml;r GPR35 bei der Regulierung der neuronalen Erregbarkeit und synaptische Freigabe.

Hemmung der N-Typ-Kalzium-Kan&auml;le durch die Aktivierung des GPR35, ein verwaistes Rezeptor, heterologously in Ratte sympathischen Neuronen exprimiert.

GPR35 &egrave; un recettori accoppiati a proteine G recente &quot;de-orphanized&quot; utilizzando le misurazioni Calcio intracellulare di alto-rendimento in linee cellulari clonali esprimendo una subunit&agrave; alfa G-proteina chimerica. Da queste schermate, acido kynurenic, un metabolita endogeno di triptofano e zaprinast, un inibitore sintetico della fosfodiesterasi specifiche di guanosina monofosfato ciclico, &egrave; emerso come potenziali agonisti per GPR35. Per indagare l&#39;accoppiamento di GPR35 espresse in modo nativo le vie di segnalazione ed effettori, abbiamo heterologously espresso GPR35 in neuroni simpatico ratto ed esaminata la modulazione di tipo N (canali di calcio Ca(V)2.2). Nei neuroni che esprimono GPR35, canali di calcio sono state inibite in assenza di agonisti palese, che indica un&#39;attivit&agrave; del recettore tonico. Applicazione di acido kynurenic o zaprinast ha portato corrente caratteristica di modulazione Gbetagamma-mediato di inibizione robusto calcio voltaggio-dipendenti. Agonista-indipendente - dipendenti effetti sia di GPR35 sono stati bloccati dal pretrattamento di Bordetella pertussis tossina che indica il coinvolgimento di proteine G(i/o). Nei neuroni che esprimono GPR35a, una variante di splicing breve di GPR35, zaprinast era pi&ugrave; potente (EC(50) = 1 microM) rispetto a kynurenic acido (58 microM) ma aveva un&#39;efficacia simile (circa inibizione corrente di calcio massimo 60%). Espressione di GPR35b, che ha un ulteriore 31 residui al capolinea N, prodotti risultati simili ma con molto maggiore variabilit&agrave;. Sia GPR35a che GPR35b sembrava avere modelli di espressione simili quando si fuse con le proteine fluorescenti. Questi risultati suggeriscono un ruolo potenziale per GPR35 nella regolazione dell&#39;eccitabilit&agrave; neuronale e sinaptica rilascio.

Inibizione dei canali calcio N-tipo di attivazione di GPR35, un recettore orfano, heterologously espresso nei neuroni simpatico ratto.

GPR35&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306F; &#x26;quot;de-orphanized&#x26;quot;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3B1;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3001;&#x30AD;&#x30CC;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B6;&#x30D7;&#x30EA;&#x30CA;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x304B;&#x3089;&#x3001;GPR35&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GPR35&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;GPR35&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;N&#x578B;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2.2&#xFF09;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GPR35&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x58EE;&#x5264;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30CC;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B6;&#x30D7;&#x30EA;&#x30CA;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;Gbetagamma&#x5A92;&#x4ECB;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x6291;&#x5236;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GPR35&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3068;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;G&#xFF08;I / O&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; GPR35a&#x3001;GPR35&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30B6;&#x30D7;&#x30EA;&#x30CA;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x30AD;&#x30CC;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;58&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#xFF08;EC&#xFF08;50&#xFF09;= 1&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x529B;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#xFF08;&#x7D04;60&#xFF05;&#x6700;&#x5927;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x6291;&#x5236;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; N&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;31&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;GPR35b&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x3070;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; GPR35a&#x3068;GPR35b&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3082;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;GPR35&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7570;&#x7A2E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;GPR35&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;N&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;

Gpr35&#xC740; &#xCD5C;&#xADFC; &quot;de-orphanized&quot; &#xC18C; &#xD55C; chimeric G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC54C;&#xD30C;-&#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xD074;&#xB860; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;. &#xC774; &#xD654;&#xBA74;, kynurenic &#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;, zaprinast, &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; guanosine monophosphate &#xAD00;&#xB828; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC0DD; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C; gpr35&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; agonists &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC640; &#xC774;&#xD399;&#xD130; GPR35 &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC870;&#xC0AC;, &#xC6B0;&#xB9AC; heterologously GPR35 &#xC950; &#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; N &#xD0C0;&#xC785; (Ca(V)2.2) &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870; &#xAC80;&#xC0AC;. Gpr35&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xD1A0; &#xB2C9; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; agonists&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; kynurenic &#xC0B0; &#xB610;&#xB294; zaprinast&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; &#xD604;&#xC7AC; &#xC800;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; Gbetagamma &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. Gpr35&#xC758; &#xB450; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBC0F;-&#xC758;&#xC874; &#xD6A8;&#xACFC; G(i/o) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Bordetella &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GPR35a, GPR35&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC885; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; zaprinast&#xB294; &#xB354; &#xAC15;&#xB825; (EC(50) = 1 microM) kynurenic &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC0B0; (58 microM) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD6A8;&#xB2A5; (&#xC57D; 60% &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958; &#xC5B5;&#xC81C;) &#xD588;&#xB2E4;. &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD070; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xCD94;&#xAC00; 31 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xB41C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; N &#xC885;&#xC810;&#xC5D0;&#xB294; gpr35b&#xC758; &#xD45C;&#xD604;. GPR35a &#xBC0F; GPR35b &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC735;&#xD569; &#xB54C; &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD765;&#xBD84; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xBC29;&#xCD9C; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; gpr35&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;.

GPR35, &#xACE0;&#xC544; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; heterologously &#xC950; &#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; N-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC800;&#xD574;.

GPR35 es una prote&#xED;na G-receptor acoplado recientemente &#x26;quot;des-orphanized&#x26;quot; usando mediciones de alto rendimiento de calcio intracelular en l&#xED;neas celulares clonales que expresan un quim&#xE9;rico prote&#xED;na G subunidad alfa. Desde estas pantallas, el &#xE1;cido quinur&#xE9;nico, un metabolito end&#xF3;geno de triptofano y Zaprinast, un inhibidor sint&#xE9;tico de la guanosina monofosfato c&#xED;clico fosfodiesterasa espec&#xED;fica, surgi&#xF3; como agonistas potenciales para GPR35. Para investigar el acoplamiento de GPR35 a nativa expresadas v&#xED;as neuronales de se&#xF1;alizaci&#xF3;n y los efectores, que heter&#xF3;loga expresada GPR35 en las neuronas simp&#xE1;ticas de rata y se examinaron la modulaci&#xF3;n de tipo N (Ca (V) 2,2) canales de calcio. En las neuronas que expresan GPR35, los canales de calcio fueron inhibidas en ausencia de agonistas manifiestos, lo que indica una actividad del receptor t&#xF3;nico. Aplicaci&#xF3;n de &#xE1;cido quinur&#xE9;nico o Zaprinast result&#xF3; en robusto dependiente de la tensi&#xF3;n caracter&#xED;stica calcio inhibici&#xF3;n actual de Gbetagamma mediada por la modulaci&#xF3;n. Ambos independientes agonista y efectos dependientes de GPR35 fueron bloqueados por el pretratamiento toxina de Bordetella pertussis que indica la participaci&#xF3;n de G (I / O) de prote&#xED;nas. En las neuronas que expresan GPR35a, una variante de empalme corto de GPR35, Zaprinast era m&#xE1;s potente (CE (50) = 1 microM) que el &#xE1;cido quinur&#xE9;nico (58 microM), pero tuvo una eficacia similar (aproximadamente el 60% de inhibici&#xF3;n m&#xE1;xima de la corriente de calcio). Expresi&#xF3;n de GPR35b, que tiene un per&#xED;odo adicional de 31 residuos en el t&#xE9;rmino N, produjo resultados similares, pero con la variabilidad mucho mayor. Tanto GPR35a y GPR35b parec&#xED;a tener similares patrones de expresi&#xF3;n cuando se fusion&#xF3; con prote&#xED;nas fluorescentes. Estos resultados sugieren un posible papel de GPR35 en la regulaci&#xF3;n de la excitabilidad neuronal y la liberaci&#xF3;n sin&#xE1;ptica.

La inhibici&#xF3;n de los canales de calcio tipo N, por la activaci&#xF3;n de GPR35, un receptor hu&#xE9;rfano, heterologously expres&#xF3; en ratas las neuronas simp&#xE1;ticas

N arachidonoyl l-&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; (ARA-S)&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684; lipoamino &#x9178;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5BF9; N &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;ARA-S &#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4EA7;&#x751F; Ca2 + &#x7535;&#x6D41;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x66F2;&#x7EBF;&#x8D85;&#x6781;&#x5316;&#x8F6C;&#x53D8;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x53EF;&#x9006;&#x6269;&#x589E;&#x3002;ARA-S &#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x5236;&#x548C;&#x51FA;&#x73B0; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x72EC;&#x7ACB;&#x884C;&#x4E8B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E3A;&#x5960;&#x5B9A;&#x57FA;&#x7840;&#x8C03;&#x67E5; ARA-S &#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

N arachidonoyl L-&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5047;&#x5B9A; endocannabinoid &#x6539;&#x53D8; N &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

The effect of N-arachidonoyl l-serine (ARA-S), a recently discovered lipoamino acid found in the CNS, on N-type Ca2+ channels of rat sympathetic ganglion neurons was determined using whole cell patch clamp. Application of ARA-S produced a rapid and reversible augmentation of Ca2+ current that was voltage dependent and resulted from a hyperpolarizing shift in the activation curve. ARA-S did not influence G protein modulation of Ca2+ channels and appeared to act independently of G-protein-coupled receptors. These findings provide a foundation for investigating possible roles for ARA-S in nervous system function.

N-arachidonoyl L-serine, a putative endocannabinoid, alters the activation of N-type Ca2+ channels in sympathetic neurons.

L&#x26;#39;effet de la N-arachidonoyl L-s&#xE9;rine (ARA-S), un acide r&#xE9;cemment d&#xE9;couvert lipoamin&#xE9; trouve dans le SNC, le N-type de canaux Ca2 + de neurones de rat ganglionnaires sympathiques a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e en utilisant l&#x26;#39;ensemble de patch-clamp de cellules. Application de l&#x26;#39;ARA-S produit une augmentation rapide et r&#xE9;versible de courant Ca2 + qui &#xE9;tait d&#xE9;pendant de la tension et le r&#xE9;sultat d&#x26;#39;un changement dans hyperpolarisant la courbe d&#x26;#39;activation. ARA-S n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;influence sur la modulation des prot&#xE9;ines G de canaux Ca 2 + et semblait agir ind&#xE9;pendamment de G-r&#xE9;cepteurs coupl&#xE9;s aux prot&#xE9;ines. Ces r&#xE9;sultats fournissent une base pour enqu&#xEA;ter sur les r&#xF4;les possibles pour ARA-S en fonction du syst&#xE8;me nerveux.

N-arachidonoyl L-s&#xE9;rine, un endocannabino&#xEF;de putatif, alt&#xE8;re l&#x26;#39;activation de type N canaux Ca 2 + dans les neurones sympathiques

Die Wirkung von N-Arachidonoyl l-Serin (ARA-S), einer vor kurzem entdeckten Lipoamino-S&auml;ure im ZNS, N-Typ Ca2 + Kan&auml;le der Ratte sympathischen Ganglion Neuronen gefunden wurde mit der ganzen Zelle Patch Clamp ermittelt. Anwendung der ARA-S produziert eine rasche und reversibel Vermehrung des Ca2 + Strom, die Spannung abh&auml;ngige und resultierte aus einer hyperpolarizing Verschiebung in der Aktivierungs-Kurve war. ARA-S hatten keinen Einfluss auf G-Protein-Modulation der Ca2 +-Kan&auml;le und unabh&auml;ngig von G-Protein-gekoppelter Rezeptoren erschien. Diese Erkenntnisse bieten eine Grundlage f&uuml;r die Untersuchung von m&ouml;glichen Rollen f&uuml;r ARA-S im Nervensystem-Funktion.

N-Arachidonoyl L-Serin, ein mutma&szlig;liches Endocannabinoid, &auml;ndert die Aktivierung N-Typ Ca2 +-Kan&auml;le in den sympathischen Neuronen.

L&#39;effetto del N-arachidonoil l-serina (ARA-S), un acido lipoamino scoperto recentemente trovato nel sistema nervoso centrale, su canali tipo N Ca2 + dei neuroni del ganglio simpatico ratto &egrave; stata determinata utilizzando la patch clamp intera cellula. Applicazione di ARA-S ha prodotto un aumento rapido e reversibile di Ca2 + corrente che era tensione dipendente e provocato da un cambiamento hyperpolarizing la curva di attivazione. ARA-S non influenzare la modulazione della proteina G di canali del Ca2 + e apparve ad agire indipendentemente da recettori accoppiati a proteine G. Questi risultati forniscono una base per indagare possibili ruoli per ARA-S in funzione del sistema nervoso.

N-arachidonoil L-Serina, un endocannabinoide putativo, altera l&#39;attivazione dei canali tipo N Ca2 + nei neuroni simpatici.

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N-&#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30CE;&#x30A4;&#x30EB;L-&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AB;&#x30F3;&#x30CA;&#x30D3;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;N-&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

N-arachidonoyl l-&#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; (&#xC544; &#xB77C;-S), &#xC950; &#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; N &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; CNS&#xC5D0; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; lipoamino &#xC0B0;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC544; &#xB77C;-S &#xC751;&#xC6A9; Ca2 + &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC804;&#xC555; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xACE1;&#xC120;&#xC5D0;&#xC11C; hyperpolarizing &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; &#xD655;&#xB300; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC544; &#xB77C;-S G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544; &#xB77C;-S&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0C1; endocannabinoid L &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; N arachidonoyl N &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El efecto de la N-araquidonoil L-serina (ARA-S), un recientemente descubierto &#xE1;cido lipoamino encuentra en el SNC, el tipo N Ca2 + canales de neuronas de rata ganglio simp&#xE1;tico se determin&#xF3; utilizando la abrazadera conjunto parche celular. Aplicaci&#xF3;n de ARA-S producido un aumento r&#xE1;pido y reversible de la corriente de Ca2 + que era dependiente de la tensi&#xF3;n y el resultado de un cambio hiperpolarizaci&#xF3;n en la curva de la activaci&#xF3;n. ARA-S no influye en la modulaci&#xF3;n de la prote&#xED;na G del Ca2 + y los canales que parec&#xED;a actuar de forma independiente de los receptores acoplados a prote&#xED;na G-. Estos resultados proporcionan una base para la investigaci&#xF3;n de las posibles funciones de ARA-S en funci&#xF3;n del sistema nervioso.

N-araquidonoil L-serina, un endocannabinoide putativo, altera la activaci&#xF3;n de N-tipo de canales de Ca2 + en las neuronas simp&#xE1;ticas

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The ability to disrupt the function of a specific protein on a rapid time scale provides a powerful tool for biomedical research. Specific proteases provide a potential method to selectively cleave a chosen protein, but rapid control of protease activity is difficult.

Rapid modification of proteins using a rapamycin-inducible tobacco etch virus protease system.

La capacit&#xE9; de perturber le fonctionnement d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine sp&#xE9;cifique sur une &#xE9;chelle de temps rapide fournit un outil puissant pour la recherche biom&#xE9;dicale. Prot&#xE9;ases sp&#xE9;cifiques de fournir une m&#xE9;thode potentielle de mani&#xE8;re s&#xE9;lective cliver une prot&#xE9;ine choisie, mais le contr&#xF4;le rapide de l&#x26;#39;activit&#xE9; prot&#xE9;ase est difficile.

Modification rapide des prot&#xE9;ines utilisant une rapamycine-inductible tabac syst&#xE8;me Etch prot&#xE9;ase du virus

Die F&auml;higkeit, die Funktion eines bestimmten Proteins auf einer schnellen Zeitskala zu st&ouml;ren ist ein leistungsstarkes Tool f&uuml;r die biomedizinische Forschung. Spezifische Proteasen stellen eine m&ouml;gliche Methode um eine gew&auml;hlte Protein selektiv zu Zerspalten, schnelle Kontrolle der Protease-Aktivit&auml;t ist jedoch schwierig.

Schnelle &Auml;nderung der Proteine, die mit einen angiomiolipomas-inducible Tabak etch-Virus-Protease-System.

La capacit&agrave; di interferire con la funzione di una proteina specifica su una scala temporale rapida fornisce un potente strumento per la ricerca biomedica. Proteasi specifiche forniscono un metodo potenziale per fendere selettivamente una proteina scelta, ma rapido controllo della attivit&agrave; proteasica &egrave; difficile.

Modifica rapida delle proteine usando un tabacco rapamicina-inducible etch sistema proteasi virus.

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Rapamycin&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2F4;&#xBC30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC218;&#xC815; &#xC5E3;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;.

La capacidad de alterar la funci&#xF3;n de una prote&#xED;na espec&#xED;fica en una escala de tiempo r&#xE1;pida proporciona una poderosa herramienta para la investigaci&#xF3;n biom&#xE9;dica. Proteasas espec&#xED;ficas proporcionar un m&#xE9;todo potencial para escindir selectivamente una prote&#xED;na elegido, pero el control r&#xE1;pido de la actividad de la proteasa es dif&#xED;cil.

Modificaci&#xF3;n r&#xE1;pida de prote&#xED;nas utilizando una rapamicina-inducible del Grabado del Tabaco del sistema de la proteasa del virus

&#x5916;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x6280;&#x672F;&#x3002;Post-mitotic &#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B80;&#x5355;&#x3001; &#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x8102;&#x8D28;&#x57FA;&#x4E8E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6709;&#x6548; DNA &#x8F6C;&#x67D3;&#x3002;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F80;&#x5F80;&#x53EA;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4F7F;&#x7528;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5927;&#x91CF;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5916;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x521D;&#x7EA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7B80;&#x6613;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8F6C;&#x5F55; mRNA &#x548C;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53; &trade; 2000&#x5E74;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x8102;&#x8D28;&#x8F6C;&#x67D3;&#x8BD5;&#x5242;&#x3002;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528; 96 &#x4E95;&#x6839;&#x636E;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282; (DRG) &#x7EC6;&#x80DE;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4F18;&#x5316;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x4E3A; 25%&#x3002;&#x5728;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x9888;&#x4E0A;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282; &#xFF08;&#x8D85;&#x5BFC;&#x9640;&#x87BA;) &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x9F20;&#x6807;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C;&#x6D77;&#x9A6C;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x4E5F;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x9AD8;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x8D85;&#x5BFC;&#x9640;&#x87BA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7ECF;&#x7535;&#x6D41;&#x4E0D;&#x662F; untransfected &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x975E;&#x5E38;&#x9002;&#x5408;&#x5728;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x6709;&#x5F88;&#x5927;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x5927;&#x9EBB;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (CB1R) &#x8868;&#x8FBE;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x7684;&#x5185;&#x5411;&#x6574;&#x6D41; K(+) &#x901A;&#x9053; (GIRK4) &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F; G &#x86CB;&#x767D; &alpha;-&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; &#xFF08;G(oA) G203T&#xFF09; &#x8868;&#x660E;&#x80FD;&#x8FBE;&#x5230;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5916;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x9002;&#x5408;&#x6700;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x662F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6709;&#x5F88;&#x591A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x8102;&#x8D28;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x521D;&#x7EA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x7B80;&#x5355;&#x3001; &#x9AD8;&#x6548;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Expression of heterologous proteins in adult mammalian neurons is a valuable technique for the study of neuronal function. The post-mitotic nature of mature neurons prevents effective DNA transfection using simple, cationic lipid-based methods. Adequate heterologous protein expression is often only achievable using complex techniques that, in many cases, are associated with substantial toxicity. Here, a simple method for high efficiency transfection of mammalian primary neurons using in vitro transcribed mRNA and the cationic lipid transfection reagent Lipofectamineâ„¢ 2000 is described. Optimal transfection conditions were established in adult mouse dissociated dorsal root ganglion (DRG) neurons using a 96-well based luciferase activity assay. Using these conditions, a transfection efficiency of 25% was achieved in DRG neurons transfected with EGFP mRNA. High transfection efficiencies were also obtained in dissociated rat superior cervical ganglion (SCG) neurons and mouse cortical and hippocampal cultures. Endogenous Ca(2+) currents in EGFP mRNA-transfected SCG neurons were not significantly different from untransfected neurons, which suggested that this technique is well suited for heterologous expression in patch clamp recording experiments. Functional expression of a cannabinoid receptor (CB1R), a G protein inwardly rectifying K(+) channel (GIRK4) and a dominant-negative G protein Î±-subunit mutant (G(oA) G203T) indicate that the levels of heterologous protein expression attainable using mRNA transfection are suitable for most functional protein studies. This study demonstrates that mRNA transfection is a straightforward and effective method for heterologous expression in neurons and is likely to have many applications in neuroscience research.

A Simple, Highly Efficient Method for Heterologous Expression in Mammalian Primary Neurons Using Cationic Lipid-mediated mRNA Transfection.

L&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines h&#xE9;t&#xE9;rologues dans les adultes neurones de mammif&#xE8;res est une technique int&#xE9;ressante pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de la fonction neuronale. La nature post-mitotique de neurones matures emp&#xEA;che la transfection d&#x26;#39;ADN efficace en utilisant de simples, cationiques &#xE0; base de lipides m&#xE9;thodes. Ad&#xE9;quate expression de la prot&#xE9;ine h&#xE9;t&#xE9;rologue est souvent seulement r&#xE9;alisable en utilisant des techniques complexes qui, dans de nombreux cas, sont associ&#xE9;es &#xE0; une toxicit&#xE9; importante. Ici, une m&#xE9;thode simple pour la transfection &#xE0; haut rendement de mammif&#xE8;res en utilisant des neurones primaires in vitro l&#x26;#39;ARNm transcrit et la Lipofectamine lipide cationique r&#xE9;actif de transfection &#x2122; 2000 est d&#xE9;crite. Conditions de transfection optimales ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tablies chez la souris adulte dissoci&#xE9; ganglion de la racine dorsale (DRG) neurones en utilisant un dosage de l&#x26;#39;activit&#xE9; de 96 puits &#xE0; base de lucif&#xE9;rase. En utilisant ces conditions, une efficacit&#xE9; de transfection de 25% a &#xE9;t&#xE9; atteint en DRG neurones transfect&#xE9;es avec l&#x26;#39;ARNm EGFP. Efficacit&#xE9;s de transfection &#xE9;lev&#xE9;es ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; obtenus dans dissoci&#xE9;s de rat cervical sup&#xE9;rieur ganglionnaires (CTB) neurones et les cultures de souris corticales et hippocampiques. Endog&#xE8;ne Ca (2 +) courants dans les neurones EGFP CTB ARNm-transfect&#xE9;es n&#x26;#39;&#xE9;taient pas significativement diff&#xE9;rents de neurones non transfect&#xE9;es, ce qui sugg&#xE8;re que cette technique est bien adapt&#xE9;e pour l&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue dans des exp&#xE9;riences de patch clamp enregistrement. Expression fonctionnelle d&#x26;#39;un r&#xE9;cepteur cannabino&#xEF;de (CB1R), une prot&#xE9;ine G &#xE0; rectification entrante K (+) canal (GIRK4) et une prot&#xE9;ine dominant n&#xE9;gatif G &#x3B1;-sous-unit&#xE9; mutante (G (oA) G203T) indiquent que les niveaux d&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines h&#xE9;t&#xE9;rologues r&#xE9;alisables en utilisant la transfection d&#x26;#39;ARNm sont adapt&#xE9;s pour les &#xE9;tudes de prot&#xE9;ines les plus fonctionnels. Cette &#xE9;tude d&#xE9;montre que la transfection d&#x26;#39;ARNm est une m&#xE9;thode simple et efficace pour l&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue dans les neurones et est susceptible d&#x26;#39;avoir de nombreuses applications dans la recherche en neurosciences.

Une m&#xE9;thode simple et tr&#xE8;s efficace pour l&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue dans des neurones primaires de mammif&#xE8;res &#xE0; l&#x26;#39;aide cationique transfection d&#x26;#39;ARNm des lipides induite par

Ausdruck von heterologen Proteinen in Erwachsenen S&auml;ugetier-Neuronen ist eine wertvolle Technik zur Erforschung der neuronalen Funktion. Die post-mitotic Art der Reife Neuronen verhindert effektiv mit einfache, kationische Lipid-basierte Methoden DNATransfection. Angemessene heterologe Proteinexpression ist oft nur mit komplexe Techniken, die in vielen F&auml;llen erhebliche Toxizit&auml;t zugeordnet sind. Hier transkribiert eine einfache Methode f&uuml;r hocheffiziente Transfection S&auml;ugetier-prim&auml;re Neuronen, die mithilfe von in-vitro-mRNA und die kationischen Lipid-Transfektionsreagenz beschriebenen Lipofectamine &trade; 2000. Optimale Transfektion Bedingungen wurden in adulten Maus dissoziiert Dorsal Root Ganglion (DRG) Neuronen mit einer 96-Well basierend Luciferase-Aktivit&auml;tstest gegr&uuml;ndet. Verwenden diese Bedingungen, eine Transfektionseffizienz von 25 % in DRG-Neuronen, die mit EGFP mRNA transfected erzielt. Hohe Transfektion Effizienz wurden auch in getrennten Ratte &uuml;berlegener zervikaler Ganglion (SCG) Neuronen und Maus kortikale und hippocampal Kulturen erzielt. Endogene Ca(2+) Str&ouml;mungen in EGFP mRNA-transfected SCG Neuronen waren nicht wesentlich anders als untransfected Neuronen, die vorgeschlagen hat, dass diese Technik gut geeignet f&uuml;r heterologe Expression in Patch-Clamp-Experimenten Aufnahme. Funktionaler Ausdruck ein Cannabinoid-Rezeptor (CB1R), ein G-Protein, das innerlich Rektifizieren K(+) Channel (GIRK4) und eine Dominant-negativen G Protein &alpha;-Untereinheit Mutante (G(oA) G203T) zufolge sind die heterologe Proteinexpression erreichbar mit mRNA Transfektion geeignet f&uuml;r die meisten Funktionsstudien Protein. Diese Studie zeigt, dass die mRNA Transfektion ist eine einfache und effektive Methode f&uuml;r heterologe Expression in Neuronen und d&uuml;rfte viele Anwendungen in der Neurologie Forschung haben.

Eine einfache, effiziente Methode f&uuml;r heterologe Expression in S&auml;ugetieren prim&auml;re Neuronen mit kationischen Lipid-mediated mRNA Transfektion.

Espressione di proteine eterologa nei neuroni dei mammiferi adulti &egrave; una tecnica preziosa per lo studio della funzione neuronale. La natura post-mitotic di neuroni maturi impedisce l&#39;efficace transfezione del DNA usando metodi basati su lipidi cationici, semplici. Espressione della proteina eterologa adeguata &egrave; spesso solo realizzabile utilizzando tecniche complesse che, in molti casi, sono associati con notevole tossicit&agrave;. Qui, un metodo semplice per la transfezione di alta efficienza di neuroni primari dei mammiferi utilizzando in vitro trascritti di mRNA e il reagente di transfezione di lipidi cationici che Lipofectamine &trade; 2000 &egrave; descritto. Transfezione ottimali condizioni sono state stabilite nel topo adulto dissociato spinali neuroni gangliari (DRG) mediante l&#39;analisi di un&#39;attivit&agrave; luciferase base 96-well. Utilizzando queste condizioni, un&#39;efficienza di trasfezione del 25% &egrave; stato raggiunto nei neuroni DRG transfected con EGFP mRNA. Efficienze di transfezione alta sono state ottenute anche in neuroni del ganglio cervicale superiore (SCG) dissociato ratto e topo corticale e hippocampal culture. Endogene Ca(2+) correnti nei neuroni SCG EGFP transfected mRNA non erano significativamente differenti dai neuroni untransfected, che ha suggerito che questa tecnica &egrave; adatta per l&#39;espressione eterologa in patch clamp esperimenti di registrazione. Espressione funzionale di un recettore dei cannabinoidi (CB1R), una proteina G interiormente che rettifica il canale K(+) (GIRK4) e un mutante di &alpha;-subunit&agrave; proteiche di dominante negativo G (G(oA) G203T) indicano che i livelli di espressione della proteina eterologa raggiungibile mediante trasfezione di mRNA sono adatti per gli studi della proteina pi&ugrave; funzionali. Questo studio dimostra che la transfezione di mRNA &egrave; un metodo semplice ed efficace per l&#39;espressione eterologa in neuroni e rischia di avere molte applicazioni in neuroscience research.

Un metodo semplice, altamente efficiente per l&#39;espressione eterologa in neuroni primari dei mammiferi utilizzando cationico lipido-mediated mRNA transfezione.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x6210;&#x4F53;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x5F8C;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x8102;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x200B;&#x200B;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;DNA&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x7570;&#x7A2E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x9054;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x305F;mRNA&#x3068;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x8102;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8A66;&#x85AC;&#x30EA;&#x30DD;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x2122;2000&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x200B;&#x200B;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x89E3;&#x96E2;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#xFF08;DRG&#xFF09;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;25&#xFF05;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;EGFP&#x306E;mRNA&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;DRG&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x3044;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x89E3;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E0A;&#x9838;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#xFF08;SCG&#xFF09;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3068;&#x6D77;&#x99AC;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; EGFP&#x306E;mRNA&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;SCG&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x304C;&#x3046;&#x307E;&#x304F;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x8A18;&#x9332;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30F3;&#x30CA;&#x30D3;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;CB1R&#xFF09;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5185;&#x5411;&#x304D;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;GIRK4&#xFF09;&#x3092;&#x6574;&#x6D41;&#x3057;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3B1;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;G&#xFF08;OA&#xFF09;G203T&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x9054;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;mRNA&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;mRNA&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x200B;&#x200B;&#x3067;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027;&#x8102;&#x8CEA;&#x5A92;&#x4ECB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;mRNA&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x4E00;&#x6B21;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306A;&#x3001;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;

&#xC131;&#xC778; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xD604; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; post-mitotic &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0;, &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; DNA transfection&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xD604;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xADF8; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; transfection &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; Mrna&#xC640; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC9C0;&#xC9C8; transfection &#xC2DC; &#xC57D; Lipofectamine &trade; 2000 &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; transfection &#xC870;&#xAC74; &#xC131;&#xC778; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD574;&#xB9AC; &#xC9C0; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; (DRG) &#xB274;&#xB7F0; 96-&#xC798; &#xB530;&#xB77C; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xCE58; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; transfection &#xD6A8;&#xC728; 25% EGFP Mrna&#xC640; &#xD398; DRG &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; transfection &#xD6A8;&#xC728; &#xB610;&#xD55C; &#xCC9C;&#xC5F0;&#xB41C; &#xC950; (SCG) &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; hippocampal &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0DD; Ca(2+) &#xC804;&#xB958; EGFP mRNA &#xD398; SCG &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DD; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAE30;&#xB85D;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xC81C;&#xC548; untransfected &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD588;&#xB2E4;. Cannabinoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (CB1R)&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD45C;&#xD604; K(+) &#xCC44;&#xB110; (GIRK4)&#xC640; &#xC74C;&#xC774; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &alpha; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (G(oA) G203T) &#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xD558;&#xB294; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xD604; mRNA transfection&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; mRNA transfection &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604; &#xC704;&#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xACFC;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC751;&#xC6A9;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC911;&#xC7AC; mRNA Transfection&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604; &#xC704;&#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;.

Expresi&#xF3;n de prote&#xED;nas heter&#xF3;logas en adultos neuronas de mam&#xED;feros es una t&#xE9;cnica valiosa para el estudio de la funci&#xF3;n neuronal. La naturaleza post-mit&#xF3;tica de las neuronas maduras evita que la transfecci&#xF3;n de ADN eficaz usando simples, basadas en l&#xED;pidos cati&#xF3;nicos m&#xE9;todos. Expresi&#xF3;n adecuada de prote&#xED;na heter&#xF3;loga es a menudo s&#xF3;lo puede lograrse utilizando t&#xE9;cnicas complejas que, en muchos casos, est&#xE1;n asociados con la toxicidad sustancial. Aqu&#xED;, un m&#xE9;todo simple para la transfecci&#xF3;n de alta eficiencia de mam&#xED;feros utilizando neuronas primarias en el ARNm transcrito in vitro y la transfecci&#xF3;n cati&#xF3;nico l&#xED;pidos Lipofectamine reactivo &#x2122; 2000 se describe. Las condiciones &#xF3;ptimas de transfecci&#xF3;n se establecieron en el rat&#xF3;n adulto disociado ganglio de la ra&#xED;z dorsal (DRG) neuronas usando un ensayo de luciferasa actividad 96-bien basado. Usando estas condiciones, una eficacia de transfecci&#xF3;n de 25% se consigui&#xF3; en DRG neuronas transfectadas con ARNm EGFP. Altas eficiencias de transfecci&#xF3;n se obtuvieron tambi&#xE9;n en disociadas de ratas superiores cervicales ganglionares (SCG), las neuronas corticales y las culturas del rat&#xF3;n y del hipocampo. End&#xF3;gena de Ca (2 +) corrientes en las neuronas EGFP SCG transfectadas ARNm-no fueron significativamente diferentes de las neuronas no transfectadas, lo que sugiere que esta t&#xE9;cnica es muy adecuado para la expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga en experimentos de parches de grabaci&#xF3;n con la pinza. La expresi&#xF3;n funcional de un receptor cannabinoide (CB1R), una prote&#xED;na G por dentro rectificaci&#xF3;n de K (+) canal (GIRK4) y una prote&#xED;na dominante negativo G &#x3B1;-subunidad mutante (G (OA) G203T) indican que los niveles de expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na heter&#xF3;loga posible utilizando la transfecci&#xF3;n ARNm son adecuados para estudios de prote&#xED;nas m&#xE1;s funcionales. Este estudio demuestra que la transfecci&#xF3;n de ARNm es un m&#xE9;todo sencillo y eficaz para la expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga en las neuronas y es probable que tenga muchas aplicaciones en la investigaci&#xF3;n de la neurociencia.

Un m&#xE9;todo simple, altamente eficiente para la expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga en mam&#xED;feros neuronas primarias, utilizando l&#xED;pidos cati&#xF3;nicos transfecci&#xF3;n mediada ARNm

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09; &#x76EE;&#x524D;&#x4F53;&#x5916;&#x75BE;&#x75C5;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x5C55;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5174;&#x594B;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x636E;&#x62A5;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x9B54;&#x9B3C;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x5DF2;&#x8C03;&#x7528;&#x8D28;&#x7591;&#x5176;&#x6548;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86; 7 &#x4E2A;&#x4EBA;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5E74;&#x9F84;&#x3001; &#x6027;&#x522B;&#x548C;&#x5065;&#x5EB7;&#x72B6;&#x51B5;&#xFF0C;&#x4ECE; 16 &#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5957;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x7EBF;&#x8DEF;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x548C;&#x7EC8;&#x672B;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x5316;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7EBF; 13 &#x5F15;&#x8D77;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4E09;&#x4E2A;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7EBF;&#x6297;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x65E9;&#x671F; neuralization &#x6551;&#x51FA;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x8868;&#x73B0;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709; 16 &#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x751F;&#x4EA7;&#x7EBF;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E25;&#x683C;&#x7684;&#x68C0;&#x9A8C;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5DEE;&#x522B;&#xFF0C;&#x5728;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6838;&#x578B;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x6F5C;&#x80FD;&#x6807;&#x5FD7;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x548C; esc &#x952E;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x96C6;&#x662F;&#x9C81;&#x68D2;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x8272;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x96C6;&#x3002;

Human induced pluripotent stem cells (iPSCs) present exciting opportunities for studying development and for in vitro disease modeling. However, reported variability in the behavior of iPSCs has called their utility into question. We established a test set of 16 iPSC lines from seven individuals of varying age, sex and health status, and extensively characterized the lines with respect to pluripotency and the ability to terminally differentiate. Under standardized procedures in two independent laboratories, 13 of the iPSC lines gave rise to functional motor neurons with a range of efficiencies similar to that of human embryonic stem cells (ESCs). Although three iPSC lines were resistant to neural differentiation, early neuralization rescued their performance. Therefore, all 16 iPSC lines passed a stringent test of differentiation capacity despite variations in karyotype and in the expression of early pluripotency markers and transgenes. This iPSC and ESC test set is a robust resource for those interested in the basic biology of stem cells and their applications.

A functionally characterized test set of human induced pluripotent stem cells.

L&#x26;#39;homme cellules souches pluripotentes induites (CISP) de pr&#xE9;senter des possibilit&#xE9;s int&#xE9;ressantes pour l&#x26;#39;&#xE9;tude du d&#xE9;veloppement et pour la mod&#xE9;lisation des maladies dans in vitro. Cependant, la variabilit&#xE9; signal&#xE9;e dans le comportement des CSPi a appel&#xE9; leur utilit&#xE9; en question. Nous avons &#xE9;tabli un ensemble de test de 16 lignes iPSC de sept personnes de diff&#xE9;rents statuts &#xE2;ge, le sexe et la sant&#xE9;, et largement caract&#xE9;ris&#xE9; les lignes &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;gard de la pluripotence et la capacit&#xE9; &#xE0; diff&#xE9;rencier en phase terminale. Conform&#xE9;ment aux proc&#xE9;dures normalis&#xE9;es dans deux laboratoires ind&#xE9;pendants, 13 des lignes iPSC ont donn&#xE9; lieu &#xE0; des motoneurones fonctionnels avec une gamme de gains d&#x26;#39;efficacit&#xE9; similaire &#xE0; celle de cellules souches embryonnaires humaines (CES). Bien que les trois lignes iPSC &#xE9;taient r&#xE9;sistants &#xE0; la diff&#xE9;renciation neurale, neuralisation d&#xE9;but sauv&#xE9; leur performance. Par cons&#xE9;quent, toutes les 16 lignes iPSC pass&#xE9; un test rigoureux de la capacit&#xE9; de diff&#xE9;renciation en d&#xE9;pit des variations dans le caryotype et dans l&#x26;#39;expression de marqueurs pr&#xE9;coces de pluripotence et des transg&#xE8;nes. Ce jeu de test et de l&#x26;#39;ESC iPSC est une ressource solide pour ceux qui s&#x26;#39;int&#xE9;ressent &#xE0; la biologie fondamentale des cellules souches et leurs applications.

Un ensemble de test caract&#xE9;ris&#xE9; fonctionnellement de l&#x26;#39;homme cellules souches pluripotentes induites

Menschliche induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) pr&auml;sentieren spannende M&ouml;glichkeiten f&uuml;r Entwicklung und Modellierung von in-vitro-Krankheit. Jedoch hat gemeldeten Variabilit&auml;t im Verhalten der iPSCs ihre N&uuml;tzlichkeit in Frage gestellt. Wir erstellen ein Testsatz 16 iPSC-Linien von sieben Personen mit unterschiedlichen Alter, Geschlecht und Gesundheit-Status, und ausgiebig charakterisiert die Linien in Bezug auf die Pluripotenz und die F&auml;higkeit, unheilbar zu unterscheiden. Unter standardisierten Verfahren in zwei unabh&auml;ngigen Laboren f&uuml;hrten 13 der iPSC Linien zu funktionalen Motoneuronen mit einer Reihe von Effizienz des humanen embryonalen Stammzellen (WSR) vergleichbar. Obwohl drei iPSC-Linien zu neuronale Differenzierung resistent waren, gerettet fr&uuml;hen Neuralization ihre Leistung. Daher kam alle 16 iPSC-Zeilen eine strenge Pr&uuml;fung der Differenzierung Kapazit&auml;t trotz Variationen im Karyotyp und Ausdruck der fr&uuml;hen Pluripotenz Marker und transgene. Diese iPSC und ESC-Pr&uuml;fger&auml;t ist eine robuste Ressource f&uuml;r die grundlegende Biologie der Stammzellen und ihre Anwendungen interessiert.

Eine funktional charakterisiert Testsatz menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen.

Cellule staminali umane pluripotenti indotte (iPSCs) presentano interessanti opportunit&agrave; per studiare lo sviluppo e per la modellazione di malattia in vitro. Tuttavia, segnalati variabilit&agrave; nel comportamento delle iPSCs ha chiamato la loro utilit&agrave; in questione. Abbiamo stabilito una serie di test di 16 linee di iPSC da sette persone di diversa et&agrave;, sesso e salute dello stato e ampiamente caratterizzato le linee rispetto alla pluripotenza e la capacit&agrave; di differenziarsi terminalmente. Nell&#39;ambito di procedure standardizzate in due laboratori indipendenti, 13 delle linee iPSC diede origine a motoneuroni funzionali con una gamma di efficienze simile a quello delle cellule staminali embrionali umane (CES). Anche se tre linee iPSC erano resistenti alla differenziazione neurale, primi neuralization salvato le loro prestazioni. Pertanto, tutte le 16 linee iPSC passato a rigorosi test di capacit&agrave; di differenziazione nonostante variazioni nel cariotipo e nell&#39;espressione dei primi marcatori di pluripotenza e transgeni. Questo iPSC ed ESC test set &egrave; una risorsa affidabile per coloro interessati nella biologia delle cellule staminali e le loro applicazioni.

Un set di test funzionale caratterizzato di cellule staminali umane pluripotenti indotte.

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3068;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;iPSCs&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306E;&#x3070;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x304C;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x547C;&#x3073;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5E74;&#x9F62;&#x3001;&#x6027;&#x5225;&#x3001;&#x5065;&#x5EB7;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;7&#x4EBA;&#x304B;&#x3089;16 IPSC&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x5E83;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x3078;&#x306E;&#x656C;&#x610F;&#x3068;&#x6700;&#x7D42;&#x5206;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x884C;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30DC;&#x3067;&#x6A19;&#x6E96;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;IPSC&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;13&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;ESC&#x306F;&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x5316;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 3 IPSC&#x7DDA;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6027;&#x80FD;&#x3092;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;16 IPSC&#x306E;&#x884C;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x578B;&#x3067;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x80FD;&#x306E;&#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x5408;&#x683C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;IPSC&#x3068;ESC&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x8208;&#x5473;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x4EBA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#xB7;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#xB7;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;

&#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs) &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xCCB4; &#xC678; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Ipscs&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xB77C;&#xACE0; &#xBD88;&#xB800;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; 16 iPSC &#xB77C;&#xC778; 7 &#xAC1C;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5F0;&#xB839;, &#xC131;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xAC74;&#xAC15; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC124;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; pluripotency&#xC640; &#xB9D0;&#xAE30; &#xCC28;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xB77C;&#xC778; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;&#xC758; &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xB41C; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0;&#xC11C; 13 iPSC &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (ESCs)&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. 3 IPSC &#xB77C;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xCD08;&#xAE30; neuralization &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD9C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; 16 iPSC &#xB77C;&#xC778; karyotype &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30; pluripotency &#xB9C8;&#xCEE4; &#xBC0F; transgenes&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xACFC;. &#xC774; Ipsc&#xC640; esc &#xD0A4; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xADF8; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB294; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC9D1;&#xD569;.

Las c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) presentan oportunidades interesantes para el estudio del desarrollo y en el modelado de las enfermedades in vitro. Sin embargo, inform&#xF3; de la variabilidad en el comportamiento de iPSCs ha llamado a su utilidad en tela de juicio. Hemos establecido un equipo de prueba de 16 l&#xED;neas de IPSC de siete individuos de diferente condici&#xF3;n de edad, el sexo y la salud, y ampliamente caracterizado las l&#xED;neas con respecto a la pluripotencia y la capacidad de diferenciarse en fase terminal. Conforme a los procedimientos estandarizados en dos laboratorios independientes, 13 de las l&#xED;neas de IPSC dieron origen a las neuronas motoras funcionales, con un rango de eficiencia similar a la de las c&#xE9;lulas madre embrionarias (CME). A pesar de tres l&#xED;neas de IPSC eran resistentes a la diferenciaci&#xF3;n neural, neuralization principios rescat&#xF3; su desempe&#xF1;o. Por lo tanto, las 16 l&#xED;neas IPSC pasar una prueba rigurosa de la capacidad de diferenciaci&#xF3;n a pesar de las variaciones en el cariotipo y en la expresi&#xF3;n de marcadores de pluripotencia primeros y transgenes. Este conjunto de pruebas de IPSC y el ESC es un recurso s&#xF3;lido para los interesados &#x200B;&#x200B;en la biolog&#xED;a b&#xE1;sica de c&#xE9;lulas madre y sus aplicaciones.

Una prueba caracterizado funcionalmente Conjunto de las C&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas

&#x7A81;&#x8D77;&#x662F;&#x5728;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x9002;&#x5F53;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x8FDE;&#x63A5;&#xFF0C;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x52A8;&#x6001;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4EA7;&#x7269;&#x88AB;&#x5F52;&#x4E8E;&#x4E2D;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94;&#x751F;&#x957F;&#x9525; Ca2 + &#x6C34;&#x5E73;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86; Ca2 + &#x900F;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178; (KA) &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x75DB;&#x89C9;&#x50CF;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282; (DRG) &#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8981;&#x67E5;&#x660E; KA &#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x57FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x654F;&#x9510;&#x5730;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9A;&#x91CF;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E0E;&#x8131;&#x79BB;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x548C;&#x810A;&#x9AD3;&#x80CC;&#x89D2;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x793A;&#x66F4;&#x591A; GluK1&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F; GluK1b &#x9999;&#x6599;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x80CC;&#x89D2;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x80CC;&#x89D2;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x793A;&#x66F4;&#x591A; GluK2&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F; GluK2a&#xFF0C;&#x6BD4;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;RNA &#x7F16;&#x8F91;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8868;&#x660E;&#x5927;&#x591A;&#x6570; GluK1 &#x548C; GluK2 DRG mRNA &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x662F;&#x672A;&#x7ECF;&#x7F16;&#x8F91;&#x3002;&#x4E0B;&#x9762;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5219; KA &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5BF9;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x548C;&#x80CC;&#x89D2;&#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x6210;&#x50CF; Ca2 + &#x77AC;&#x53D8;&#x900F;&#x9732;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x5728;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x3002;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x88AB;&#x90E8;&#x5206;&#x6216;&#x5B8C;&#x5168;&#x5835;&#x585E; Joro &#x8718;&#x86DB;&#x6BD2;&#x7D20; (JSTX) &#x62EE;&#x6297;&#x5242; Ca2 +-&#x900F; AMPA &#x548C; KA &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;DRG/&#x80CC;&#x89D2;&#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0E; KA 18 &#x5C0F;&#x65F6;&#x6CBB;&#x7597;&#x6291;&#x5236;&#x8F74;&#x7A81;&#x540C;&#x65F6;&#x8FC5;&#x901F;&#x8131;&#x654F;&#x7684; KA &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; SYM 2081&#xFF0C;&#x7ADE;&#x4E89;/KA AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297; CNQX&#xFF0C;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C; JSTX &#x6216; philanthotoxin &#x589E;&#x5F3A;&#x7A81;&#x8D77;&#x5E76;&#x963B;&#x6B62;&#x5BF9;&#x7A81;&#x8D77;&#x7684; KA &#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Ca2 + &#x901A;&#x8FC7; KA &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7A81;&#x8D77;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;

&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x9499;&#x900F;&#x53D7;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x75DB;&#x89C9;&#x50CF;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;

Neurite outgrowth is a fundamental step in establishing proper neuronal connections in the developing central nervous system. Dynamic control of outgrowth has been attributed to changes in growth cone Ca2+ levels in response to extracellular cues. Here we have investigated a possible role for Ca2+ permeable kainate (KA) receptors in regulating neurite outgrowth of nociceptive-like dorsal root ganglion (DRG) neurons. To identify KA receptor subunits likely to be involved, we used quantitative RT-PCR on acutely dissociated DRG and dorsal horn neurons. DRG neurons expressed more GluK1, particularly the GluK1b spice variant, than dorsal horn neurons. Conversely, dorsal horn neurons expressed more GluK2, particularly GluK2a, than DRG neurons. Further, an RNA editing assay indicated that the majority of GluK1 and GluK2 mRNA transcripts in DRG were unedited. Imaging Ca2+ transients following application of a KA receptor agonist to DRG and dorsal horn co-cultures revealed increases in intracellular Ca2+ in the growth cones of DRG neurons. In the majority of cases, this increase in Ca2+ was partly or completely blocked by Joro spider toxin (JSTX), an antagonist for Ca2+-permeable AMPA and KA receptors. Treatment of DRG/dorsal horn co-cultures with KA for 18 hours suppressed neurite outgrowth while application of the rapidly desensitizing KA receptor agonist SYM 2081, the competitive AMPA/KA receptor antagonist, CNQX, and JSTX or philanthotoxin enhanced neurite outgrowth and prevented KA effects on neurite outgrowth. Thus, Ca2+ entry through KA receptors at the growth cone of DRG neurons may be an important regulator of neurite outgrowth.

Modulation of neurite outgrowth by activation of calcium-permeable kainate receptors expressed by rat nociceptive-like dorsal root ganglion neurons.

La croissance des neurites est une &eacute;tape fondamentale dans l&#39;&eacute;tablissement des connexions neuronales appropri&eacute;es dans le d&eacute;veloppement du syst&egrave;me nerveux central. Contr&ocirc;le dynamique de la croissance a &eacute;t&eacute; attribu&eacute; aux changements de taux de croissance c&ocirc;ne Ca2 + en r&eacute;ponse &agrave; des signaux extracellulaires. Ici nous avons &eacute;tudi&eacute; le r&ocirc;le possible de ka&iuml;nate perm&eacute;able (KA) r&eacute;cepteurs de Ca2 + dans la r&eacute;gulation de la croissance des neurites des neurones du ganglion (DRG) comme nociceptifs spinaux. Afin d&#39;identifier les KA des sous-unit&eacute;s de r&eacute;cepteurs susceptibles d&#39;intervenir, que nous avons utilis&eacute; la RT-PCR quantitative sur aigu&euml; dissoci&eacute; PMSI et des neurones de la corne dorsale. Les neurones DRG exprim&eacute; plus GluK1, en particulier la variante d&#39;&eacute;pices GluK1b, que les neurones de la corne dorsale. &Agrave; l&#39;inverse, les neurones de la corne dorsale exprim&eacute; plus GluK2, en particulier les GluK2a, que les neurones de la DRG. En outre, un ARN dosage d&#39;&eacute;dition a indiqu&eacute; que la majorit&eacute; des GluK1 et GluK2 transcription ARNm en DRG est in&eacute;dites. Transitoires de Ca2 + demande suivante d&#39;un agoniste des r&eacute;cepteurs KA au PMSI et de la corne dorsale co-cultures r&eacute;v&egrave;le augmentations de Ca2 + intracellulaire dans les c&ocirc;nes de croissance des neurones DRG. Dans la majorit&eacute; des cas, cette augmentation de Ca2 + a &eacute;t&eacute; partiellement ou compl&egrave;tement bloqu&eacute;e par la toxine araign&eacute;e Joro (JSTX), un antagoniste du Ca2 +-les r&eacute;cepteurs AMPA et KA perm&eacute;ables. Traitement des co-cultures de corne dorsale DRG avec KA pendant 18 heures supprim&eacute;es tandis que l&#39;application de l&#39;agoniste des r&eacute;cepteurs KA rapidement d&eacute;sensibilisant SYM 2081, l&#39;antagoniste des r&eacute;cepteurs AMPA/KA concurrentiel, CNQX, la croissance des neurites et JSTX ou philanthotoxine am&eacute;lior&eacute; la croissance des neurites et emp&ecirc;ch&eacute; les effets sur la croissance des neurites KA. Entr&eacute;e de Ca2 + par les r&eacute;cepteurs KA dans le c&ocirc;ne de croissance des neurones DRG peut donc un r&eacute;gulateur important de la croissance des neurites.

Modulation de la croissance des neurites par activation des r&eacute;cepteurs ka&iuml;nate perm&eacute;able au calcium exprim&eacute;es par les neurones des ganglions spinaux nociceptives comme du rat.

Neurit Auswuchs ist ein grundlegender Schritt bei der Schaffung neuronaler Verbindungen in Entwicklungsl&auml;ndern ZNS. Dynamische Kontrolle der Auswuchs wurden &Auml;nderungen im Konus Ca2 + Wachstumsraten als Reaktion auf extrazellul&auml;re Signale zugeordnet. Hier haben wir eine m&ouml;gliche Rolle f&uuml;r Ca2 + durchl&auml;ssigen Kainate (KA)-Rezeptoren bei der Regulierung der Neurit Auswuchs der nozizeptiven-wie Dorsal Root Ganglion (DRG) Neuronen untersucht. Ermittlung der KA dissoziiert Rezeptor-Untereinheiten, die voraussichtlich beteiligt, wir quantitativen RT-PCR auf akut verwendet werden DRG und Hinterhorn Neuronen. DRG-Neuronen ausgedr&uuml;ckt mehr GluK1, insbesondere die GluK1b-Gew&uuml;rz-Variante, als Hinterhorn Neuronen. Umgekehrt ausgedr&uuml;ckt Hinterhorn Neuronen mehr GluK2, insbesondere GluK2a, als DRG-Neuronen. Des weiteren eine RNA, die Bearbeitung der Probe darauf hingewiesen, dass die Mehrheit der GluK1 und GluK2 mRNA Transkripte in DRG waren unbearbeitet. Imaging Ca2 + Transienten ergab folgende Anwendung eine KA-Rezeptor-Agonisten auf DRG und Hinterhorn Co-cultures Anstieg der intrazellul&auml;ren Ca2 + in den Wachstum-Gipfeln des DRG-Neuronen. In den meisten F&auml;llen, dieser Anstieg der Ca2 + teilweise oder vollst&auml;ndig blockierte Joro-Spinne-Toxin (JSTX), ein Antagonist f&uuml;r Ca2 +-durchl&auml;ssigen AMPA und KA-Rezeptoren. Behandlung der DRG/dorsalen Horn-Co-cultures mit KA 18 Stunden unterdr&uuml;ckt Neurit Auswuchs w&auml;hrend der Anwendung von der rasch desensibilisierende KA-Rezeptor-Agonisten SYM 2081, die wettbewerbsf&auml;hige AMPA/KA-Rezeptor-Antagonisten, CNQX, und JSTX oder Philanthotoxin Neurit Auswuchs und verhindert KA Auswirkungen auf Neurit Auswuchs. Daher m&ouml;glicherweise Ca2 + Eintrag durch KA-Rezeptoren an den Wachstumskegel der DRG-Neuronen ein wichtiger Regulator der Neurit Auswuchs.

Modulation der Neurit Auswuchs Aktivierung von Kalzium-durchl&auml;ssigen Kainate Rezeptoren durch Ratte nozizeptiven-wie Dorsal Root Ganglion Neuronen ausgedr&uuml;ckt.

Dei neuriti escrescenza &egrave; un passo fondamentale nella creazione di adeguate connessioni neuronali in sviluppo del sistema nervoso centrale. Controllo dinamico della escrescenza &egrave; stata attribuita ai cambiamenti nei livelli di crescita cono Ca2 + in risposta a segnali extracellulari. Qui abbiamo studiato un possibile ruolo per Ca2 + recettori Kainato permeabile (KA) nella regolazione escrescenza dei neuriti dei neuroni del ganglio (DRG) nocicettivo-come spinali. Per identificare KA subunit&agrave; del recettore suscettibili di essere coinvolti, che abbiamo utilizzato RT-PCR quantitativa su acutamente dissociato DRG e dei neuroni del corno dorsale. I neuroni DRG espresso pi&ugrave; GluK1, particolarmente la variante GluK1b spezie, pi&ugrave; neuroni del corno dorsale. Al contrario, i neuroni del corno dorsale espresso pi&ugrave; GluK2, specialmente GluK2a, che i neuroni DRG. Ulteriormente, un RNA editing dosaggio indicato che la maggior parte di GluK1 e GluK2 trascritti di mRNA in DRG erano inediti. Imaging transitori di Ca2 + nell&#39;applicazione di un agonista del recettore KA DRG e corno dorsale co-cultures rivelato aumenti di Ca2 + intracellulare nei coni di crescita dei neuroni DRG. Nella maggioranza dei casi, questo aumento di Ca2 + &egrave; stato parzialmente o completamente bloccato da Joro tossina spider (JSTX), un antagonista per Ca2 +-i recettori AMPA e KA permeabili. Trattamento di co-cultures DRG/dorsale del corno con KA per 18 ore soppresse escrescenza dei neuriti durante l&#39;applicazione della rapida desensibilizzazione agonista del recettore KA SYM 2081, il competitivo antagonista del recettore AMPA/KA, CNQX, e JSTX o philanthotoxin enhanced escrescenza dei neuriti e prevenire effetti KA sulla crescita dei neuriti. Cos&igrave;, entrata Ca2 + attraverso i recettori KA presso il cono di crescita dei neuroni DRG pu&ograve; essere un importante regolatore della crescita dei neuriti.

Modulazione di escrescenza dei neuriti dall&#39;attivazione dei recettori Kainato calcio-permeabile espressi dai neuroni di ratto nocicettivo-come radice dorsale del ganglio.

&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x306F;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x526F;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310; ca 2 + &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x69D8;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0; (DRG) &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; ca 2 + &#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;KA&#xFF09; &#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;KA &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;DRG &#x3068;&#x810A;&#x9AC4;&#x5F8C;&#x89D2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x79C1;&#x9054;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684; RT-PCR &#x3092;&#x92ED;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x89E3;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3088;&#x308A; GluK1&#x3001;GluK1b &#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30B9; &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x7279;&#x306B;&#x810A;&#x9AC4;&#x5F8C;&#x89D2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x810A;&#x9AC4;&#x5F8C;&#x89D2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x3082;&#x3063;&#x3068; GluK2&#x3001;&#x7279;&#x306B; GluK2a&#x3001;DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x7DE8;&#x96C6;&#x3001;RNA &#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; GluK1 &#x3068; GluK2 &#x306E;&#x5927;&#x534A; DRG &#x306E; mrna &#x304C;&#x7DE8;&#x96C6;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Ca 2 + &#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; KA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; DRG &#x3068;&#x810A;&#x9AC4;&#x5F8C;&#x89D2;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x306B;&#x6B21;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310; DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; ca 2 + &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;ca 2 + &#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; Joro &#x30AF;&#x30E2;&#x6BD2; &#xFF08;JSTX&#xFF09; &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B; ca 2 + &#x62EE;&#x6297;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;-&#x900F;&#x904E;&#x6027; AMPA &#x3068; KA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3002;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x30DB;&#x30FC;&#x30F3; DRG/&#x80CC;&#x5074;&#x7CFB; KA &#x3067;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081; 18 &#x6642;&#x9593;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; KA &#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; SYM 2081&#x3001;CNQX&#x3001;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B; KA/AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x3001;JSTX &#x307E;&#x305F;&#x306F; philanthotoxin &#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; KA &#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;ca 2 + &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; KA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310; DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x6574;&#x88C5;&#x7F6E;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x69D8;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x900F;&#x904E;&#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3002;

Neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; Ca2 + &#xB808;&#xBCA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; nociceptive &#xAC19;&#xC740; &#xB290; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; (DRG) &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; Ca2 + &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; kainate (&#xCE74;) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;. &#xCE74;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; subunits &#xCC38;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xD558;&#xAC8C; &#xC591;&#xC801; RT-PCR&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xAC8C; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; DRG&#xC640; &#xB4F1; &#xCABD; &#xBFD4; &#xB274;&#xB7F0; &#xC5F0;&#xACB0;. DRG &#xC2E0;&#xACBD; &#xB354; GluK1, &#xD2B9;&#xD788; GluK1b &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC885; &#xB4F1; &#xCABD; &#xBFD4; &#xB274;&#xB7F0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD45C;&#xD604;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xB4F1; &#xCABD; &#xBFD4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB354; GluK2, &#xD2B9;&#xD788; GluK2a, DRG &#xB274;&#xB7F0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD45C;&#xD604;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD3B8;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; RNA &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; GluK1 &#xBC0F; Gluk2&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; DRG&#xC5D0; mRNA &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D; &#xD3B8;&#xC9D1; &#xD588;&#xB2E4;. Ca2 + &#xACFC;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; DRG&#xC640; &#xB4F1; &#xCABD; &#xBFD4; co-cultures KA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0;&#xC11C; DRG &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xCF58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca2 + &#xC99D;&#xAC00; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 +&#xC758;&#xC774; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xCC28;&#xB2E8; Joro &#xAC70;&#xBBF8; &#xB3C5; &#xC18C; (JSTX), Ca2 +&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;-&#xD22C;&#xACFC;&#xC131; AMPA &#xBC0F; KA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;. 18 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xCE74;&#xC640; DRG/&#xB4F1; &#xCABD; &#xBFD4; co-cultures&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC751;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE38; &#xD56D;&#xC740; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; desensitizing KA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC81C; SYM 2081, &#xACBD;&#xC7C1; AMPA/KA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC801;, CNQX, neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xC5B5;&#xC555; &#xD558; &#xACE0; JSTX &#xB610;&#xB294; philanthotoxin neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xCE74; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC29;&#xC9C0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9; DRG &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC5D0; KA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC950; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; nociceptive &#xB290; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xCE7C;&#xC298; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; kainate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;.

Neurita consecuencia es un paso fundamental en el establecimiento de las conexiones neuronales apropiadas en el desarrollo del sistema nervioso central. Control din&aacute;mico de la consecuencia ha sido atribuida a cambios en los niveles Ca2 + cono de crecimiento en respuesta a se&ntilde;ales extracelulares. Aqu&iacute; hemos investigado un posible papel de Ca2 + receptores de kainato permeable (KA) en la regulaci&oacute;n de neurita consecuencia de neuronas del ganglio (DRG) de ra&iacute;z dorsal de nociceptivos-como. Para identificar KA subunidades del receptor capaces de involucrarse, que utilizamos la RT-PCR cuantitativa en agudo disociaron DRG y las neuronas del cuerno dorsal. Las neuronas DRG expresan m&aacute;s GluK1, particularmente la variante de la especia GluK1b, que las neuronas del cuerno dorsal. Por el contrario, las neuronas del cuerno dorsal expresan m&aacute;s GluK2, particularmente GluK2a, que las neuronas DRG. Adem&aacute;s, un RNA edici&oacute;n an&aacute;lisis indicaron que la mayor&iacute;a de GluK1 y GluK2 transcripciones de mRNA en DRG fueron in&eacute;ditas. Oscilaciones de Ca2 + de la proyecci&oacute;n de imagen siguiente aplicaci&oacute;n de un agonista del receptor KA DRG y co-cultivos de cuerno dorsal revel&oacute; aumento de Ca2 + intracelular en los conos de crecimiento de las neuronas DRG. En la mayor&iacute;a de los casos, este aumento de Ca2 + fue en parte o totalmente bloqueado por Joro toxina de ara&ntilde;a (JSTX), un antagonista de Ca2 +-receptores AMPA y KA permeables. Tratamiento de DRG dorsal Co-cultivos de cuerno con KA durante 18 horas suprimidas neurita consecuencia mientras que la aplicaci&oacute;n del desensibilizaci&oacute;n r&aacute;pidamente agonista del receptor de KA SYM 2081, el antagonista competitivo de los receptores AMPA/KA, CNQX, y JSTX o philanthotoxin mayor consecuencia neurita y prevenir efectos KA en consecuencia neurita. As&iacute;, el Ca2 + entrada a trav&eacute;s de receptores KA en el cono de crecimiento de las neuronas DRG puede ser un importante regulador de neurita consecuencia.

Modulaci&oacute;n de neurita consecuencia por la activaci&oacute;n de receptores de kainato permeable al calcio expresados por neuronas de ganglio de ra&iacute;z dorsal de nociceptivos como rata.

Prejunctional &#x70DF;&#x78B1;&#x578B;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; (nAChRs) &#x653E;&#x5927;&#x4EA4;&#x611F;&#x8282;&#x540E;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x548C; intraterminal &#x7ECF;&#x5546;&#x5E97;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x8FF9;&#x8C61;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x54EA;&#x4E2A; nAChR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8DEF;&#x53E3;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5FEB;&#x901F;&#x672C;&#x5730;&#x4F20;&#x9012; (picospritzing) &#x7684; nAChR &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; epibatidine &#x88AB;&#x7ED3;&#x5408;&#x80DE;&#x5185;&#x6025;&#x5267;&#x7535;&#x6781;&#x8BB0;&#x5F55;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4ECE;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x8F93;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x7684;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x548C;&#x5916;&#x5730;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x53D1;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x672C;&#x5730;&#x5E94;&#x7528;&#x7684; epibatidine &#xFF08;1 &micro; M&#xFF09; &#x5236;&#x4F5C; &#39;&#x81F4; epibatidine depolarisations&#39; (Eid)&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x5F62;&#x72B6;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x81EA;&#x53D1;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x63A5;&#x5934;&#x7535;&#x4F4D; (SEJPs) &#x548C;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684; nAChR &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x53CA;&#x560C;&#x8131;&#x654F;&#x6FC0;&#x52A8; &alpha;&#x3001; &beta;-&#x4E9A;&#x7532;&#x57FA; ATP &#x5DF2;&#x5E9F;&#x9664;&#x3002;Eid &#x632F;&#x5E45;&#x5206;&#x5E03;&#x662F;&#x53EA;&#x662F;&#x7565;&#x6709;&#x8F6C;&#x5411;&#x4F4E;&#x632F;&#x5E45;&#x7531;&#x91D1;&#x73AF;&#x86C7;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; &alpha;7 nAChR &#x62EE;&#x6297;&#x5242; &alpha;-&#x6BD2;&#x7D20;&#x548C; methyllcaconitine&#x3001; &#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; Na(+) &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x6CB3;&#x8C5A;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6216;&#x963B;&#x585E;&#x4E0E; Cd(2+) &#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x7ECF;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x964D;&#x4F4E;&#x80DE;&#x5916;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; Eid &#x6B21;&#x6570;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 69%&#xFF0C;&#x4F46;&#x66F4;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11; (41%) &#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x4E0E;&#x9891;&#x7387;&#x7684; Eid &#x7684; 36%&#x3002;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x5DF2;&#x5BF9;&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x53D1;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3001; &#x914D;&#x5BF9;&#x8109;&#x51B2;&#x4FBF;&#x5229;&#x5316;&#x3001; SEJP &#x9891;&#x7387;&#x3001; &#x632F;&#x5E45; SEJP &#x6216; SEJP &#x632F;&#x5E45;&#x5206;&#x5E03;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4EA4;&#x611F;&#x8282;&#x540E;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x4E0A;&#x975E; &alpha;7 nAChRs &#x8BF1;&#x5BFC;&#x9AD8;&#x632F;&#x5E45;&#x7F1D;&#x9699;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x8868; multipacketed &#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7531; intraterminal Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x7531;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x76F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7; nAChR &#x89E6;&#x53D1;&#x540C;&#x6B65;&#x3002;&#x6B64; nAChR &#x8BF1;&#x5BFC;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x6216;&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x53D1;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x836F;&#x7406;&#x5B66;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

&#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECE;&#x9F20;&#x6807;&#x8F93;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x70DF;&#x78B1;&#x578B;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Prejunctional nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) amplify postganglionic sympathetic neurotransmission, and there are indications that intraterminal Ca(2+) stores might be involved. However, the mechanisms by which nAChR activation stimulates neurotransmitter release at such junctions is unknown. Rapid local delivery (picospritzing) of the nAChR agonist epibatidine was combined with intracellular sharp microelectrode recording to monitor spontaneous and field-stimulation-evoked neurotransmitter release from sympathetic nerve terminals in the mouse isolated vas deferens. Locally applied epibatidine (1 ÂµM) produced 'epibatidine-induced depolarisations' (EIDs) that were similar in shape to spontaneous excitatory junction potentials (SEJPs) and were abolished by nonselective nAChR antagonists and the purinergic desensitizing agonist Î±,Î²-methylene ATP. The amplitude distribution of EIDs was only slightly shifted towards lower amplitudes by the selective Î±7 nAChR antagonists Î±-bungarotoxin and methyllcaconitine, the voltage-gated Na(+) channel blocker tetrodotoxin or by blocking voltage-gated Ca(2+) channels with Cd(2+). Lowering the extracellular Ca(2+) concentration reduced the frequency of EIDs by 69%, but more surprisingly, the Ca(2+)-induced Ca(2+) release blocker ryanodine greatly decreased the amplitude (by 41%) and the frequency of EIDs by 36%. Ryanodine had no effect on electrically-evoked neurotransmitter release, paired-pulse facilitation, SEJP frequency, SEJP amplitude or SEJP amplitude distribution. These results show that activation of non-Î±7 nAChRs on sympathetic postganglionic nerve terminals induces high-amplitude junctional potentials that are argued to represent multipacketed neurotransmitter release synchronized by intraterminal Ca(2+)-induced Ca(2+) release, triggered by Ca(2+) influx directly through the nAChR. This nAChR-induced neurotransmitter release can be targeted pharmacologically without affecting spontaneous or electrically-evoked neurotransmitter release.

Mechanisms involved in nicotinic acetylcholine receptor-induced neurotransmitter release from sympathetic nerve terminals in the mouse vas deferens.

Pr&#xE9;jonctionnel r&#xE9;cepteurs nicotiniques de l&#x26;#39;ac&#xE9;tylcholine (nAChR) amplifient postganglionnaire neurotransmission sympathique, et il ya des indications que intraterminal Ca (2 +) magasins pourraient &#xEA;tre impliqu&#xE9;s. Cependant, les m&#xE9;canismes par lesquels l&#x26;#39;activation nAChR stimule la lib&#xE9;ration des neurotransmetteurs au niveau des jonctions n&#x26;#39;est pas connu. Rapide de distribution locale (picospritzing) de l&#x26;#39;agoniste &#xE9;pibatidine nAChR a &#xE9;t&#xE9; combin&#xE9;e avec l&#x26;#39;enregistrement micro&#xE9;lectrode intracellulaire forte pour contr&#xF4;ler la lib&#xE9;ration du neurotransmetteur spontan&#xE9;e et sur le terrain-la stimulation-&#xE9;voqu&#xE9; par les terminaisons nerveuses sympathiques dans les d&#xE9;f&#xE9;rent de souris vas isol&#xE9;s. &#xC9;pibatidine appliqu&#xE9;e localement (1 uM) produit des &#xE9;pibatidine induites d&#xE9;polarisations &#xBB;(MIE) qui &#xE9;taient de forme similaire &#xE0; spontan&#xE9;es potentiels de jonction excitateurs (SEJPs) et ont &#xE9;t&#xE9; abolies par les antagonistes non s&#xE9;lectifs et le nAChR alpha agoniste purinergique d&#xE9;sensibilisant, &#x3B2;-m&#xE9;thyl&#xE8;ne ATP. La distribution d&#x26;#39;amplitude des MIE a &#xE9;t&#xE9; l&#xE9;g&#xE8;rement d&#xE9;plac&#xE9;e vers faibles amplitudes des antagonistes s&#xE9;lectifs a7 nAChR &#x3B1;-bungarotoxine et methyllcaconitine, Na voltage-d&#xE9;pendant (+) de blocage du canal t&#xE9;trodotoxine ou en bloquant voltage-d&#xE9;pendants Ca 2 +) canaux avec CD ( 2 +). L&#x26;#39;abaissement de la Ca extracellulaire (2 +) la concentration r&#xE9;duit la fr&#xE9;quence des maladies infectieuses &#xE9;mergentes de 69%, mais de fa&#xE7;on plus surprenante, le Ca (2 +)-induite par le Ca (2 +) bloquant la lib&#xE9;ration ryanodine grandement diminu&#xE9; l&#x26;#39;amplitude (de 41%) et la fr&#xE9;quence les maladies infectieuses &#xE9;mergentes de 36%. Ryanodine n&#x26;#39;a eu aucun effet sur la lib&#xE9;ration du neurotransmetteur &#xE9;lectrique &#xE9;voqu&#xE9;, jumel&#xE9; &#xE0; impulsions facilitation, la fr&#xE9;quence SEJP, SEJP amplitude ou la distribution d&#x26;#39;amplitude SEJP. Ces r&#xE9;sultats montrent que l&#x26;#39;activation de la non-a7 nAChR sur sympathiques terminaisons nerveuses postganglionnaires induit de grande amplitude des potentiels de jonction qui sont argument&#xE9;es pour repr&#xE9;senter la lib&#xE9;ration des neurotransmetteurs multipacketed synchronis&#xE9; par intraterminal Ca (2 +)-induite par le Ca (2 +) la lib&#xE9;ration, d&#xE9;clench&#xE9;e par le Ca ( 2 +) afflux directement &#xE0; travers le nAChR. Cette lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs nAChR-induite peut &#xEA;tre cibl&#xE9;e pharmacologiquement sans affecter la lib&#xE9;ration du neurotransmetteur spontan&#xE9;e ou &#xE9;lectrique &#xE9;voqu&#xE9;e.

M&#xE9;canismes impliqu&#xE9;s dans la lib&#xE9;ration neurotransmetteur ac&#xE9;tylcholine r&#xE9;cepteurs nicotiniques induite par les terminaisons nerveuses sympathiques dans canal d&#xE9;f&#xE9;rent de souris

Prejunctional nikotinische Acetylcholin-Rezeptoren (nAChRs) verst&auml;rken postganglionischen sympathisch Neurotransmission, und es gibt Anzeichen daf&uuml;r, dass intraterminal Ca(2+)-Gesch&auml;ften beteiligt sein k&ouml;nnte. Die Mechanismen, durch welche nAChR Aktivierung stimuliert die Neurotransmitter-Freisetzung an solchen Knotenpunkten, ist jedoch unbekannt. Schnelle lokale &Uuml;bermittlung (Picospritzing) von der nAChR Agonist Epibatidin zusammen mit der intrazellul&auml;ren scharfe Mikroelektrode Aufnahme um spontanen und Feld-Stimulierung hervorgerufen Neurotransmitter-Freisetzung aus sympathischen Nervenenden in Maus isoliert Vas Deferens zu &uuml;berwachen. Lokal angewandte Epibatidin (1 &micro;M) produziert &#39;Epibatidin induziert Depolarisations&#39; (EIDs), die waren &auml;hnlich in Form von spontanen exzitatorischen Kreuzung Potentiale (SEJPs) und wurden durch unselektive nAChR-Antagonisten und die Purinergic desensibilisierende Agonist &alpha;, &beta;-Methylen-ATP abgeschafft. Die Verteilung der Amplitude des EIDs wurde nur leicht in Richtung geringere Amplituden durch die selektive &alpha;7 nAChR Antagonisten &alpha;-Bungarotoxin und Methyllcaconitine, die Spannung-Gating Na(+) Kanal Blocker Tetrodotoxin oder Blockierung Spannung-Gating Ca(2+)-Kan&auml;le mit Cd(2+) verschoben. Senkung der extrazellul&auml;ren Ca(2+)-Konzentration reduziert die H&auml;ufigkeit des EIDs um 69 %, aber noch &uuml;berraschender die Ca(2+)-induzierte Ca(2+) Freigabe Blocker Ryanodin erheblich verringert, die Amplitude (um 41 %) und die Frequenz des EIDs um 36 %. Ryanodin hatte keine Auswirkung auf elektrisch hervorgerufen Neurotransmitter-Freisetzung, gepaart-Pulse Moderation, SEJP Frequenz, SEJP Amplitude oder SEJP Amplitude Verteilung. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Aktivierung der nicht-&alpha;7 nAChRs auf sympathische postganglionischen Nervenenden hoher Amplitude junktionale Potentiale induziert, die zur Darstellung von Multipacketed Neurotransmitter Version synchronisiert von intraterminal Ca(2+)-induzierte Ca(2+) Release, ausgel&ouml;st durch Ca(2+) Zustrom direkt &uuml;ber die nAChR argumentiert werden. Diese nAChR-induzierte Neurotransmitter-Version kann pharmakologisch ausgerichtet werden, ohne die spontane oder elektrisch hervorgerufen Neurotransmitter-Freisetzung.

Mechanismen nikotinische Acetylcholin-Rezeptor-induzierte Neurotransmitter-Freisetzung aus sympathischen Nervenenden in Maus Vas Deferens beteiligt.

Recettori acetilcolina nicotinici prejunctional (nAChRs) amplificano postgangliari neurotrasmissione simpatica, e ci sono indicazioni che potrebbero essere coinvolti intraterminal Ca(2+) negozi. Tuttavia, i meccanismi da cui nAChR attivazione stimola il rilascio di neurotrasmettitore a tali giunzioni &egrave; sconosciuto. Rapida consegna locale (picospritzing) dei nAChR agonista epibatidina &egrave; stato combinato con microelettrodo tagliente intracellulare di registrazione per monitorare rilascio spontaneo e campo-stimolazione-evocato neurotrasmettitore dai terminali del nervo simpatico in mouse isolato deferenti. Epibatidina localmente applicata (1 &micro;M) prodotto &#39;epibatidina-induced depolarisations&#39; (EID) che erano molto simili nella forma ai potenziali spontanea derivazione eccitatorio (SEJPs) e sono stati aboliti da antagonisti non selettivi nAChR e la desensibilizzazione purinergic agonista &alpha;, &beta;-metilene ATP. La distribuzione di ampiezza di Eid &egrave; stato solo leggermente spostata verso ampiezze inferiori la selettiva &alpha;7 nAChR antagonisti &alpha;-bungarotoxin e methyllcaconitine, la tetrodotossina di stampo tensione-gated Na(+) canale o bloccando la tensione-gated canali Ca(2+) con Cd(2+). Abbassando la concentrazione extracellulare di Ca(2+) ridotto la frequenza di Eid del 69%, ma pi&ugrave; sorprendentemente, la Ca(2+) Ca(2+)-induced release blocker rianodinico diminuito notevolmente l&#39;ampiezza (da 41%) e la frequenza di Eid del 36%. Rianodinico ha avuto alcun effetto sul rilascio del neurotrasmettitore evocato elettricamente, accoppiato-pulse agevolazione, SEJP frequenza, ampiezza SEJP o distribuzione di ampiezza SEJP. Questi risultati mostrano che attivazione del non-&alpha;7 nAChRs sui terminali nervose postgangliari simpatico induce la grande ampiezza giunzionali potenziali che sono sostenuti per rappresentare multipacketed rilascio di neurotrasmettitore sincronizzato da intraterminal Ca(2+) Ca(2+)-induced release, innescato da Ca(2+) afflusso direttamente attraverso i nAChR. Questo rilascio di neurotrasmettitore nAChR-indotta pu&ograve; essere mirato farmacologicamente senza influire sul rilascio di neurotrasmettitore spontaneo o evocato elettricamente.

Meccanismi coinvolti nella nicotinici acetilcolina indotta dal recettore del neurotrasmettitore rilascio dai terminali del nervo simpatico in mouse deferenti.

Prejunctional&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;nAChRs&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7BC0;&#x5F8C;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x3001;intraterminal&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x5E97;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x6307;&#x6458;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;nAChR&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x3067;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x306E;nAChR&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;epibatidine&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x914D;&#x4FE1;&#xFF08;picospritzing&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x8F38;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D42;&#x672B;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x523A;&#x6FC0;&#x8A98;&#x767A;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30FC;&#x30D7;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x96FB;&#x6975;&#x8A18;&#x9332;&#x3092;&#x4F75;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;epibatidine&#xFF08;1&#x3BC;M&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x96FB;&#x4F4D;&#xFF08;SEJPs&#xFF09;&#x306B;&#x5F62;&#x72B6;&#x304C;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F; &#x26;quot;epibatidine&#x8A98;&#x8D77;depolarisations &#x26;#39;&#xFF08;EID&#x3092;&#xFF09;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;nAChR&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3068;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E0D;&#x611F;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x3B1;&#x3001;&#x3B2;-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;ATP&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; EIDs&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x5206;&#x5E03;&#x304C;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x3B1;7nAChR&#x306E;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3B1;-&#x30D6;&#x30F3;&#x30AC;&#x30ED;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;methyllcaconitine&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Na&#xFF08;+&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x30C6;&#x30C8;&#x30ED;&#x30C9;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;CD&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x4F4E;&#x632F;&#x5E45;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#xFF08; 2 +&#xFF09;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;69&#xFF05;EIDs&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x304C;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x632F;&#x5E45;&#xFF08;41&#xFF05;&#xFF09;&#x3068;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x4F4E;&#x4E0B;36&#xFF05;EIDs&#x306E;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x306F;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x306B;&#x8A98;&#x767A;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x5BFE;&#x306E;&#x5186;&#x6ED1;&#x5316;&#x3001;SEJP&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3001;&#x632F;&#x5E45;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;SEJP SEJP&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x5F8C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D42;&#x672B;&#x4E0A;&#x306E;&#x975E;&#x3B1;7nAChRs&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;Ca&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;intraterminal&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x3001;&#xFF08;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x540C;&#x671F;multipacketed&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9AD8;&#x632F;&#x5E45;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x8868;&#x793A;2 +&#xFF09;nAChR&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D41;&#x5165;&#x3002;&#x3053;&#x306E;nAChR&#x306E;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x306B;&#x8A98;&#x767A;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x306B;&#x3001;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8F38;&#x7CBE;&#x7BA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D42;&#x672B;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x6027;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;

Prejunctional nicotinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (nAChRs) &#xC99D;&#xD3ED; postganglionic &#xACF5;&#xAC10; neurotransmission &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC9D5;&#xD6C4; intraterminal Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC5B4;&#xB5A4; Nachr&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC790;&#xADF9; &#xAC19;&#xC740; &#xC811;&#xD569;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. NAChR &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; epibatidine&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xB85C;&#xCEEC; &#xBC30;&#xB2EC; (picospritzing) &#xC808;&#xC5F0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; vas deferens&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xD544;&#xB4DC; &#xC790;&#xADF9; &#xAC16;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xAE30;&#xB85D; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC0E4; &#xD504; microelectrode&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB85C;&#xCEEC;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; epibatidine (1 &micro; M) &#xC0DD;&#xC0B0; &#39;epibatidine &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; depolarisations&#39; (Eid) &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; &#xC811;&#xD569; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; (SEJPs) &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;&#xC640; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; nAChR &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC640; purinergic desensitizing &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &alpha;, &beta; methylene ATP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Eid&#xC758; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &alpha;7 nAChR &#xAE38; &#xD56D; &#xADFC; &alpha;-bungarotoxin &#xBC0F; methyllcaconitine, Na(+) &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCC28;&#xB2E8;&#xAE30; &#xD14C;&#xD2B8;&#xB85C;&#xB3C4;&#xD1A1;&#xC2E0; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; cd(2+)&#xC640; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; &#xC57D;&#xAC04; &#xB0AE;&#xC740; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xC774;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 69%, Eid&#xC758; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xB0AE;&#xCD94;&#xBA74; &#xB354; &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, ca(2+)&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xCC28;&#xB2E8;&#xAE30; ryanodine &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; (41%)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBC0F; 36 %eid &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;. Ryanodine &#xD588;&#xB2E4; &#xC804;&#xAE30; evoked &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;, &#xC30D; &#xB9E5; &#xBC15; &#xCD09;&#xC9C4;, SEJP &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;, SEJP &#xC9C4;&#xD3ED; &#xB610;&#xB294; SEJP &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC10; postganglionic &#xC2E0;&#xACBD; &#xB2E8;&#xC790;&#xC5D0; &#xBE44; &alpha;7 Nachrs&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; multipacketed &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; nAChR &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E4;&#xD589; intraterminal Ca(2+) ca(2+)&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC790;&#xB8CC; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xC8FC;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xC811;&#xD569; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. NAChR &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC774; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801; &#xB610;&#xB294; &#xC804;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC16;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; pharmacologically &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; vas deferens&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xAC10; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; nicotinic &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;.

Presin&#xE1;pticos receptores nicot&#xED;nicos de acetilcolina (nAChR) amplifican la neurotransmisi&#xF3;n simp&#xE1;tica postganglionar, y hay indicios de que intraterminal Ca (2 +) tiendas podr&#xED;an estar implicados. Sin embargo, los mecanismos por los cuales la activaci&#xF3;n de nAChR estimula la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores en las uniones de este tipo es desconocido. Entrega r&#xE1;pida local (picospritzing) del agonista epibatidina nAChR se combin&#xF3; con registro intracelular microelectrodo fuerte para controlar la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores espont&#xE1;nea y el campo de la estimulaci&#xF3;n evoca-de las terminales nerviosas simp&#xE1;ticas en los deferens del vaso de rat&#xF3;n aislados. Epibatidina aplicadas a nivel local (1 M) produjo los epibatidina inducidos por despolarizaciones &#x26;#39;(EER) que eran similares en forma a la espont&#xE1;nea potenciales de uni&#xF3;n excitatorio (SEJPs) y fueron abolidos por los antagonistas no selectivos de nAChR y la alfa agonista purin&#xE9;rgico desensibilizante, &#x3B2;-metileno ATP. La distribuci&#xF3;n de la amplitud de la EID fue s&#xF3;lo ligeramente desplazado hacia una reducci&#xF3;n de las amplitudes de los antagonistas selectivos de nAChR a7 &#x3B1;-bungarotoxina y methyllcaconitine, el Na dependiente de voltaje (+) tetrodotoxina bloqueador de los canales o por el bloqueo de voltaje de Ca (2 +) con EC (canales 2 +). La reducci&#xF3;n de la extracelular de Ca (2 +) disminuci&#xF3;n de la concentraci&#xF3;n de la frecuencia de las EIE en un 69%, pero lo m&#xE1;s sorprendente, el Ca (2 +) inducida por Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n bloqueador de rianodina gran disminuci&#xF3;n de la amplitud (en un 41%) y la frecuencia de EIE en un 36%. Rianodina no tuvo efecto sobre la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores el&#xE9;ctricamente evocado, la facilitaci&#xF3;n del emparejado, el pulso, la frecuencia de SEJP, la amplitud o la distribuci&#xF3;n SEJP SEJP amplitud. Estos resultados muestran que la activaci&#xF3;n de la no-a7 nAChR en las terminaciones nerviosas simp&#xE1;ticas postganglionares induce gran amplitud potencial de uni&#xF3;n que se argumentaron para representar la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores multipacketed sincronizado por intraterminal Ca (2 +) inducida por Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n, provocada por Ca ( 2 +) afluencia directamente a trav&#xE9;s del nAChR. Esta liberaci&#xF3;n de neurotransmisores nAChR inducida farmacol&#xF3;gicamente puede ser objetivo sin afectar a la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores espont&#xE1;nea o evocada el&#xE9;ctricamente.

Mecanismos involucrados en la liberaci&#xF3;n del neurotransmisor acetilcolina nicot&#xED;nico del receptor inducida desde las terminales nerviosas simp&#xE1;ticas en el conducto deferente de rat&#xF3;n

Damian J. Williams

Laboratory of Molecular Physiology,
National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA),
Laboratory of Molecular Physiology, National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA)

National Institutes of Health (NIH)

Intranuclear Microinjection of DNA into Dissociated Adult Mammalian Neurons

Damian J. Williams

Laboratory of Molecular Physiology,National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA),Laboratory of Molecular Physiology, National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA)

National Institutes of Health (NIH)

Intranuclear Microinjection of DNA into Dissociated Adult Mammalian Neurons

Laboratory of Molecular Physiology,
National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA),
Laboratory of Molecular Physiology, National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIAAA)