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Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

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Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

University of California, Los Angeles

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (CTL) &#x54CD;&#x5E94;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x6D88;&#x9664;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6700;&#x7EC8;&#x5931;&#x8D25;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x5236;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x52A0;&#x5F3A;&#x548C;&#x6062;&#x590D;&#x7279;&#x5B9A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; CTL &#x53CD;&#x5E94;&#x5141;&#x8BB8;&#x957F;&#x671F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x5236;&#x6B62;&#x6216;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6E05;&#x9664;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BFB;&#x6C42;&#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x661F;&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6837;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5206;&#x5316;&#x5C06;&#x6740;&#x6B7B;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6210;&#x719F; CTL&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6267;&#x884C;&#x6B64;&#x64CD;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x5B50;&#x514B;&#x9686;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR) &#x4ECE; CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x538B;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x3002;&#x6B64; TCR &#x7136;&#x540E;&#x7528;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x7684;&#x661F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x661F;&#x7136;&#x540E;&#x5F15;&#x5165;&#x542B;&#x4EBA;&#x80CE;&#x809D;&#x3001; &#x80CE;&#x513F;&#x80F8;&#x817A;&#x548C;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x9F20;&#x6807;&#xFF0C;&#x83B7;&#x51C6;&#x4EE5;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; CD8 + CTL&#x3002;&#x9F20;&#x6807;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x3001; &#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; CTL&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x661F;&#x4E0E;&#x514B;&#x9686; TCR &#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#x5141;&#x8BB8;&#x9002;&#x5F53;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x591A;&#x4E2A;&#x89E3;&#x5256;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x6A21;&#x4EFF;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x4EC0;&#x4E48;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; &#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; TCR &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x5177;&#x6709;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x6548;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x5B9A; TCR &#x4EE5;&#x53CA;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x8FBE;&#x975E;&#x7279;&#x5B9A;&#x63A7;&#x5236; TCR &#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; TCR &#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x5B9A; CTL &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x4F53;&#x5185;&#x529F;&#x80FD;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x591A;&#x5668;&#x5B98;&#x4E2D;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5728;&#x6CBB;&#x7597;&#x6162;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x53D1;&#x5C55;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

&#x4F53;&#x5185;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6297;&#x539F;&#x5177;&#x4F53; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5316;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

The HIV-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) response is a critical component in controlling viral replication in vivo, but ultimately fails in its ability to eradicate the virus. Our intent in these studies is to develop ways to enhance and restore the HIV-specific CTL response to allow long-term viral suppression or viral clearance. In our approach, we sought to genetically manipulate human hematopoietic stem cells (HSCs) such that they differentiate into mature CTL that will kill HIV infected cells. To perform this, we molecularly cloned an HIV-specific T cell receptor (TCR) from CD8+ T cells that specifically targets an epitope of the HIV-1 Gag protein. This TCR was then used to genetically transduce HSCs. These HSCs were then introduced into a humanized mouse containing human fetal liver, fetal thymus, and hematopoietic progenitor cells, and were allowed to differentiate into mature human CD8+ CTL. We found human, HIV-specific CTL in multiple tissues in the mouse. Thus, genetic modification of human HSCs with a cloned TCR allows proper differentiation of the cells to occur in vivo, and these cells migrate to multiple anatomic sites, mimicking what is seen in humans. To determine if the presence of the transgenic, HIV-specific TCR has an effect on suppressing HIV replication, we infected with HIV-1 mice expressing the transgenic HIV-specific TCR and, separately, mice expressing a non-specific control TCR. We observed significant suppression of HIV replication in multiple organs in the mice expressing the HIV-specific TCR as compared to control, indicating that the presence of genetically modified HIV-specific CTL can form a functional antiviral response in vivo. These results strongly suggest that stem cell based gene therapy may be a feasible approach in the treatment of chronic viral infections and provide a foundation towards the development of this type of strategy.

In vivo suppression of HIV by antigen specific T cells derived from engineered hematopoietic stem cells.

La r&eacute;ponse de lymphocytes T cytotoxiques (CTL) sp&eacute;cifiques au VIH est un &eacute;l&eacute;ment essentiel dans le contr&ocirc;le de la r&eacute;plication virale in vivo, mais &eacute;choue finalement dans sa capacit&eacute; &agrave; &eacute;radiquer le virus. Notre intention dans ces &eacute;tudes est de d&eacute;velopper des moyens d&#39;am&eacute;liorer et de restaurer la r&eacute;ponse CTL sp&eacute;cifiques au VIH afin de permettre la suppression virale &agrave; long terme ou la clairance virale. Dans notre approche, nous avons cherch&eacute; &agrave; manipuler g&eacute;n&eacute;tiquement des cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques (CSH) humaines telles qu&#39;elles se diff&eacute;rencient en CTL mature qui va tuer les cellules infect&eacute;es par le VIH. Pour effectuer cela, nous avons clon&eacute; mol&eacute;culairement un sp&eacute;cifiques au VIH T cell receptor (TCR) de cellules T CD8 + qui cible sp&eacute;cifiquement un &eacute;pitope de la prot&eacute;ine Gag du VIH-1. Ce TCR fut ensuite utilis&eacute; pour transmettre g&eacute;n&eacute;tiquement autorenouveler. Ces autorenouveler ont ensuite &eacute;t&eacute; pr&eacute;sent&eacute;s dans une souris humanis&eacute;e contenant du foie foetal humain, thymus foetal et des cellules prog&eacute;nitrices h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques et ont &eacute;t&eacute; autoris&eacute;s &agrave; se diff&eacute;rencier en maturit&eacute; humaine CD8 + CTL. Nous avons trouv&eacute; CTL humaine, le VIH-sp&eacute;cifiques dans de nombreux tissus chez la souris. Ainsi, la modification g&eacute;n&eacute;tique des CSH humaine avec un TCR clon&eacute; permet une diff&eacute;renciation ad&eacute;quate des cellules &agrave; se produire in vivo, et ces cellules migrent vers plusieurs sites anatomiques, imitant ce qu&#39;on voit chez les humains. Pour d&eacute;terminer si la pr&eacute;sence du TCR transg&eacute;nique, sp&eacute;cifiques au VIH a un effet sur la suppression de la r&eacute;plication du VIH, nous infect&eacute;s par le VIH-1 de souris exprimant le TCR transg&eacute;nique de VIH-sp&eacute;cifiques et, s&eacute;par&eacute;ment, des souris exprimant un contr&ocirc;le non-sp&eacute;cifiques TCR. Nous avons observ&eacute; une suppression significative de r&eacute;plication du VIH dans plusieurs organes chez les souris exprimant le TCR sp&eacute;cifiques au VIH par rapport &agrave; la commande, indiquant que la pr&eacute;sence d&#39;organismes g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute; CTL sp&eacute;cifiques au VIH peut former une r&eacute;ponse antivirale fonctionnelle in vivo. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent fortement que la th&eacute;rapie g&eacute;nique cellules souches bas&eacute; peut &ecirc;tre une approche envisageable dans le traitement des infections virales chroniques et fournissent une base pour le d&eacute;veloppement de ce type de strat&eacute;gie.

Suppression in vivo du VIH par les cellules T sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne d&eacute;riv&eacute; d&#39;ing&eacute;nierie des cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques.

Die HIV-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten (CTL)-Reaktion ist eine wichtige Komponente bei der Kontrolle der Virusreplikation in-vivo, aber scheitert letztlich in ihrer F&auml;higkeit, den Virus zu beseitigen. Unsere Absicht in diesen Studien ist die Entwicklung von M&ouml;glichkeiten zur Verbesserung und Wiederherstellung die HIV-spezifische CTL-Antwort, um langfristige virale Unterdr&uuml;ckung oder virale Lagerluft zu erm&ouml;glichen. Wir wollten in unserem Ansatz genetisch menschlichen hematopoietic Stammzellen (HSCs) so manipulieren, dass sie in Reife CTL zu unterscheiden, die HIV-infizierten Zellen zu t&ouml;ten, wird. Um dies durchzuf&uuml;hren, geklont wir molekular eine HIV-spezifische T-Zell Rezeptor (TCR) von CD8 + T-Zellen, die richtet sich speziell an ein Epitop des Gag von HIV-1 Proteins. Diese TCR wurde dann verwendet, um genetisch HSCs zur&uuml;ckwirken. Diese HSCs wurden dann in eine humanisierte Maus mit menschlichen fetalen Leber, fetale Thymus und h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen eingef&uuml;hrt und durften in Reife menschliche CD8 + CTL zu unterscheiden. Wir fanden Menschen, HIV-spezifische CTL in mehreren Geweben in der Maus. So genetische Ver&auml;nderung der menschlichen HSCs mit einem geklonten TCR erm&ouml;glicht die richtige Differenzierung der Zellen auftreten in-vivo, und diese Zellen migrieren auf mehrere anatomische Standorte, imitiert, was beim Menschen gesehen wird. Um festzustellen, ob das Vorhandensein von transgenen, HIV-spezifische TCR eine Auswirkung auf die HIV-Replikation unterdr&uuml;ckt hat, infiziert wir mit HIV-1 M&auml;usen transgene HIV-spezifische TCR Ausdr&uuml;cken und separat, M&auml;use, die Ausdruck einer unspezifischen Steuerung TCR. Wir beobachteten erheblichen Unterdr&uuml;ckung der HIV-Replikation in mehreren Organen in die M&auml;use, die Ausdruck der HIV-spezifische TCR im Vergleich zur Kontrolle, darauf hinweist, dass das Vorhandensein von genetisch ver&auml;ndertem HIV-spezifische CTL eine funktionale antivirale Reaktion in-vivo bilden kann. Diese Ergebnisse empfehlen dringend, dass Stammzellen-basierte Gentherapie m&ouml;glicherweise einen machbaren Ansatz in der Behandlung von chronischen Virusinfektionen und eine Grundlage f&uuml;r die Entwicklung dieser Art von Strategie bieten.

In-vivo Unterdr&uuml;ckung von HIV Antigen spezifische T-Zellen abgeleitet entwickelt hematopoietic Stammzellen.

La risposta dei linfociti T citotossici (CTL) specifici per l&#39;HIV &egrave; una componente fondamentale nel controllo della replicazione virale in vivo, ma alla fine riesce nella sua capacit&agrave; di eliminare il virus. Il nostro intento in questi studi &egrave; quello di sviluppare modi per migliorare e ripristinare la risposta CTL specifici per l&#39;HIV per consentire la soppressione virale a lungo termine o clearance virale. Nel nostro approccio, abbiamo cercato di manipolare geneticamente umane cellule staminali ematopoietiche (HSCs) tale che si differenziano in CTL maturo che uccider&agrave; le cellule infetti da HIV. Per eseguire questo, abbiamo clonato molecolarmente un HIV-specifico recettore delle cellule T (TCR) da cellule T CD8 + che in particolare gli obiettivi di un epitopo della proteina HIV-1 Gag. Questo TCR &egrave; stato poi utilizzato per trasdurre geneticamente HSCs. Questi HSCs sono state poi introdotte in un topo umanizzato contenenti fegato fetale umano, timo fetale e cellule progenitrici ematopoietiche e sono stati autorizzati a differenziarsi in maturo umano CD8 + CTL. Abbiamo trovato umano, HIV-specifici CTL nei tessuti multipli nel topo. Cos&igrave;, modificazione genetica di HSCs umana con un TCR clonato permette la corretta differenziazione delle cellule a verificarsi in vivo, e queste cellule migrano a pi&ugrave; siti anatomici, imitando ci&ograve; che si vede negli esseri umani. Per determinare se la presenza del TCR transgenico, specifici di HIV ha un effetto su sopprimendo la replicazione dell&#39;HIV, abbiamo infettato con l&#39;HIV-1 topi che esprimono TCR transgenico specifici per l&#39;HIV e, separatamente, topi che esprimono un controllo non specifico TCR. Abbiamo osservato significativa soppressione della replicazione HIV nei diversi organi nei topi che esprimono TCR specifici per l&#39;HIV rispetto al controllo, che indica che la presenza di CTL specifici per l&#39;HIV geneticamente modificati pu&ograve; formare una risposta antivirale funzionale in vivo. Questi risultati suggeriscono fortemente che la terapia genica basata sulle cellule staminali pu&ograve; essere un approccio fattibile nel trattamento delle infezioni virali croniche e forniscono una base per lo sviluppo di questo tipo di strategia.

Soppressione in vivo dell&#39;HIV da cellule T specifiche antigene derivato da ingegnerizzato cellule staminali ematopoietiche.

HIV &#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403; (CTL) &#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x6839;&#x7D76;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x610F;&#x56F3;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B; HIV &#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; CTL &#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;HIV &#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x306B;&#x6210;&#x719F;&#x306E; CTL &#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x3072;&#x3068;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (HSCs) &#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x7279;&#x306B; HIV-1 &#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B; HIV &#x7279;&#x7570; T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;TCR&#xFF09; cd8 &#x967D;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3002;&#x3053;&#x306E; TCR &#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048; HSCs &#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; HSCs [&#x3072;&#x3068;&#x80CE;&#x5150;&#x809D;&#x81D3;&#x3001;&#x80CE;&#x4ED4;&#x80F8;&#x817A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; cd 8 + CTL &#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A31;&#x53EF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x3001;HIV &#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; CTL &#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; HSCs &#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; TCR &#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x5206;&#x5316;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30D2;&#x30C8;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;&#x5B66;&#x7684;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3001;HIV &#x7279;&#x5B9A;&#x306E; TCR &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B; HIV &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; HIV &#x7279;&#x5B9A;&#x306E; TCR &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; HIV-1 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3084;&#x56FA;&#x6709;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; TCR &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x5225;&#x3005; &#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; HIV &#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; CTL &#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30B9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; HIV TCR &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x81D3;&#x5668;&#x3067;&#x306E; HIV &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642; 5 &#x6708;&#x5B9F;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6162;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x305F;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5F37;&#x304F;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3002;

In vivo &#x3067;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E; HIV &#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xAD00;&#xB828; cytotoxic T &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; (CTL) &#xC751;&#xB2F5; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xADFC;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC758;&#xB3C4; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC815;&#xB9AC; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; HIV &#xD2B9;&#xC815; CTL &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC778;&#xAC04; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSCs) &#xAC19;&#xC740; HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC8FD; &#xC77C; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4; &#xC131;&#xC219; CTL&#xC5D0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; HIV &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR) CD8 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; HIV 1 &#xAC1C; &#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; epitope&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C;. &#xC774; TCR &#xC720;&#xC804;&#xC790; HSCs transduce &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; HSCs &#xB2E4;&#xC74C; humanized &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC778;&#xAC04; &#xD0DC;&#xC544;&#xC758; &#xAC04;, &#xD0DC;&#xC544; thymus, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC870; &#xD608; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xB41C; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD8 + CTL&#xC5D0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;, HIV &#xD2B9;&#xC815; CTL&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; TCR&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Hscs&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xAC83;&#xC744; &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD574;&#xBD80;&#xD559; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD560;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xAD00;&#xB828; TCR&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xAC00; HIV &#xBCF5;&#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; HIV-1 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; HIV &#xAD00;&#xB828; TCR&#xC744; &#xD45C;&#xD604;&#xC640; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C;, &#xC950; &#xBE44; &#xD2B9;&#xC815; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; TCR&#xC744; &#xD45C;&#xD604;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; HIV &#xAD00;&#xB828; TCR &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xB41C; HIV &#xD2B9;&#xC815; CTL&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; in vivo &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC5D0; HIV &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB530;&#xB77C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB9CC;&#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC804;&#xB7B5;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

HIV &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC124;&#xACC4; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;.

La respuesta de linfocitos de T citot&oacute;xicos (CTL) relacionadas con el VIH es un componente cr&iacute;tico en el control de la replicaci&oacute;n viral in vivo, pero en &uacute;ltima instancia falla en su capacidad para erradicar el virus. Nuestra intenci&oacute;n en estos estudios es desarrollar maneras para mejorar y restaurar la respuesta CTL relacionadas con el VIH para permitir la supresi&oacute;n viral a largo plazo o separaci&oacute;n viral. En nuestro enfoque, intentamos manipular gen&eacute;ticamente humanas c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas (HSCs) que se diferencian en CTL maduro que matar&aacute; las c&eacute;lulas infectados por el VIH. Para realizar esto, hemos clonado molecularmente un VIH T cell receptor (TCR) de c&eacute;lulas T CD8 + que se dirige espec&iacute;ficamente a un epitopo de la prote&iacute;na Gag del VIH-1. Este TCR entonces fue utilizado para transducir gen&eacute;ticamente HSCs. Estas HSCs entonces fueron introducidas en un rat&oacute;n humanizado que contienen h&iacute;gado fetal humano, timo fetal y c&eacute;lulas progenitoras hematopoy&eacute;ticas y pod&iacute;an diferenciarse en madurez humana CD8 + CTL. Encontramos CTL humano, relacionadas con el VIH en tejidos m&uacute;ltiples en el rat&oacute;n. As&iacute;, la modificaci&oacute;n gen&eacute;tica de HSCs humanas con un TCR clonado permite adecuada diferenciaci&oacute;n de las c&eacute;lulas que se produzcan en vivo, y estas c&eacute;lulas migran a m&uacute;ltiples sitios anat&oacute;micos, imitando lo que se ve en los seres humanos. Para determinar si la presencia del TCR transg&eacute;nico, relacionadas con el VIH tiene un efecto sobre la supresi&oacute;n de la replicaci&oacute;n del VIH, nos infectados con VIH-1 ratones expresando el transg&eacute;nico TCR relacionadas con el VIH y, por separado, los ratones que expresaban un control inespec&iacute;fica TCR. Observamos una supresi&oacute;n significativa de la replicaci&oacute;n del VIH en m&uacute;ltiples &oacute;rganos en los ratones que expresaban el TCR relacionadas con el VIH en comparaci&oacute;n con el control, indicando que la presencia de transg&eacute;nico CTL relacionadas con el VIH puede formar una respuesta antiviral funcional in vivo. Estos resultados sugieren fuertemente que la terapia g&eacute;nica de c&eacute;lulas madre basado puede ser un enfoque factible en el tratamiento de infecciones virales cr&oacute;nicas y proporcionar una base para el desarrollo de este tipo de estrategia.

Vivo en supresi&oacute;n de VIH por c&eacute;lulas T espec&iacute;ficas ant&iacute;geno, derivado de ingenier&iacute;a c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas.

We described earlier a dual-combination anti-HIV type 1 (HIV-1) lentiviral vector (LVsh5/C46) that downregulates CCR5 expression of transduced cells via RNAi and inhibits HIV-1 fusion via cell surface expression of cell membrane-anchored C46 antiviral peptide. This combinatorial approach has two points of inhibition for R5-tropic HIV-1 and is also active against X4-tropic HIV-1. Here, we utilize the humanized bone marrow, liver, thymus (BLT) mouse model to characterize the in vivo efficacy of LVsh5/C46 (Cal-1) vector to engineer cellular resistance to HIV-1 pathogenesis. Human CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells (HSPC) either nonmodified or transduced with LVsh5/C46 vector were transplanted to generate control and treatment groups, respectively. Control and experimental groups displayed similar engraftment and multilineage hematopoietic differentiation that included robust CD4+ T-cell development. Splenocytes isolated from the treatment group were resistant to both R5- and X4-tropic HIV-1 during ex vivo challenge experiments. Treatment group animals challenged with R5-tropic HIV-1 displayed significant protection of CD4+ T-cells and reduced viral load within peripheral blood and lymphoid tissues up to 14 weeks postinfection. Gene-marking and transgene expression were confirmed stable at 26 weeks post-transplantation. These data strongly support the use of LVsh5/C46 lentiviral vector in gene and cell therapeutic applications for inhibition of HIV-1 infection.

Engineering Cellular Resistance to HIV-1 Infection In Vivo Using a Dual Therapeutic Lentiviral Vector.

The human immunodeficiency virus (HIV)-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) response is critical in controlling HIV infection. Since the immune response does not eliminate HIV, it would be beneficial to develop ways to enhance the HIV-specific CTL response to allow long-term viral suppression or clearance. Here, we report the use of a protective chimeric antigen receptor (CAR) in a hematopoietic stem/progenitor cell (HSPC)-based approach to engineer HIV immunity. We determined that CAR-modified HSPCs differentiate into functional T cells as well as natural killer (NK) cells in vivo in humanized mice and these cells are resistant to HIV infection and suppress HIV replication. These results strongly suggest that stem cell-based gene therapy with a CAR may be feasible and effective in treating chronic HIV infection and other morbidities.

Valerie Rezek

David Geffen School of Medicine,
Division of Hematology and Oncology,
Division of Hematology and Oncology, David Geffen School of Medicine

University of California, Los Angeles

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

Valerie Rezek

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}David Geffen School of Medicine,Division of Hematology and Oncology,Division of Hematology and Oncology, David Geffen School of Medicine

University of California, Los Angeles

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

David Geffen School of Medicine,
Division of Hematology and Oncology,
Division of Hematology and Oncology, David Geffen School of Medicine