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Studying Membrane Biogenesis with a Luciferase-Based Reporter Gene Assay

To study the coordination of different lipid synthesis pathways during membrane biogenesis it is useful to work with an experimental system where membrane ...

Harvard

St. George's University of London

&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;&#x8102;&#x80AA;&#x3001; &#x82CD;&#x8747;&#x548C;&#x68D5;&#x6988;&#x9178;&#x916F;&#x3002;

Cell biology. Fats, flies, and palmitate.

Biologie cellulaire. Graisses, les mouches et le palmitate

Zellbiologie. Fette, Fliegen und Palmitat.

Biologia delle cellule. Grassi, mosche e palmitato.

&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;&#x8102;&#x80AA;&#x3001;&#x30CF;&#x30A8;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC29;, &#xD30C;&#xB9AC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBB3C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Biolog&#xED;a Celular. Grasas, moscas, y palmitato

&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5DF2;&#x7814;&#x7A76; endosomal &#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3002;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E0B;&#x6C1A;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x95EA;&#x70C1;&#x5FAE;&#x7403;&#x3002;&#x5FAE;&#x7403;&#x88AB;&#x5360;&#x7528;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5B58;&#x50A8;&#x5728;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x95EA;&#x70C1;&#x7684;&#x6C1A; &beta; &#x7C92;&#x5B50;&#x5438;&#x6536;&#x4EA7;&#x751F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x95EA;&#x70C1;&#x8BA1;&#x6570;&#x5668;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x77ED;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x6C1A; &beta; &#x7C92;&#x5B50;&#x548C;&#x51E0;&#x4F55;&#x539F;&#x56E0;&#xFF0C;&#x95EA;&#x70C1;&#x5FAE;&#x7403;&#x68C0;&#x6D4B;&#x53EA;&#x6709;&#x51E0;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E00;&#x6C1A;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5185;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6216;&#x5728;&#x8DDD;&#x79BB;&#x5927;&#x7EA6; 600 nm&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B75;&#x5316;&#x6E29;&#x5EA6;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x9176;&#x6807;&#x4EEA;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x95EA;&#x70C1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94;&#x6291;&#x5236;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x51FA;&#x53E3;&#x660E;&#x663E;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x8BE5;&#x8BC1;&#x660E; endosomal &#x8840;&#x8102;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8D29;&#x5356;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x65B0;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x5B9E;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x7531; endosomal &#x8102;&#x8D28;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

A scintillation proximity assay has been developed to study the endosomal trafficking of radiolabeled cholesterol in living cells. Mouse macrophages were cultured in the presence of tritiated cholesterol and scintillant microspheres. Microspheres were taken up by phagocytosis and stored in phagolysosomes. Absorption of tritium beta particles by the scintillant produces light signals that can be measured in standard scintillation counters. Because of the short range of tritium beta particles and for geometric reasons, scintillant microspheres detect only that fraction of tritiated cholesterol localized inside phagolysosomes or within a distance of approximately 600 nm. By incubating cultures in a temperature-controlled microplate reader, the kinetics of phagocytosis and cholesterol transport could be analyzed in near-real time. Scintillation signals were significantly increased in response to inhibitors of lysosomal cholesterol export. This method should prove a useful new tool for the study of endosomal trafficking of lipids and other molecules.

Real-time analysis of endosomal lipid transport by live cell scintillation proximity assay.

Un test de proximit&#xE9; &#xE0; scintillation a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour &#xE9;tudier le trafic endosomal du cholest&#xE9;rol radiomarqu&#xE9; dans les cellules vivantes. Macrophages de souris ont &#xE9;t&#xE9; cultiv&#xE9;es en pr&#xE9;sence de cholest&#xE9;rol triti&#xE9; et scintillant microsph&#xE8;res. Des microsph&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; prises par la phagocytose et stock&#xE9;es dans phagolysosomes. L&#x26;#39;absorption de particules b&#xEA;ta du tritium par le scintillant produit des signaux de lumi&#xE8;re qui peuvent &#xEA;tre mesur&#xE9;es dans les compteurs &#xE0; scintillation standard. En raison de la courte port&#xE9;e des particules b&#xEA;ta du tritium et pour des raisons g&#xE9;om&#xE9;triques, scintillant microsph&#xE8;res d&#xE9;tecter uniquement la fraction de cholest&#xE9;rol triti&#xE9; localis&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur phagolysosomes ou &#xE0; une distance d&#x26;#39;environ 600 nm. En incubant les cultures dans un lecteur de microplaques &#xE0; temp&#xE9;rature contr&#xF4;l&#xE9;e, la cin&#xE9;tique de la phagocytose et le transport du cholest&#xE9;rol pourraient &#xEA;tre analys&#xE9;es en quasi-temps r&#xE9;el. Signaux de scintillation ont &#xE9;t&#xE9; significativement augment&#xE9; en r&#xE9;ponse &#xE0; des inhibiteurs de l&#x26;#39;exportation du cholest&#xE9;rol lysosomale. Cette m&#xE9;thode devrait se r&#xE9;v&#xE9;ler un outil utile pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de la traite des endosomes de lipides et d&#x26;#39;autres mol&#xE9;cules.

Analyse en temps r&#xE9;el de transport des lipides endosomal par test sur des cellules de proximit&#xE9; en direct &#xE0; scintillation

Echtzeit-Analyse von endosomalen Lipid-Transport von lebenden Zellen Scintillation Proximity Assay.

Un dosaggio di prossimit&agrave; di scintillazione &egrave; stato sviluppato per studiare il traffico endosomal di colesterolo radiomarcato in cellule viventi. Macrofagi di topo sono stati coltivati in presenza di trizio colesterolo e scintillant microsfere. Microsfere sono stati prese da fagocitosi e memorizzate in phagolysosomes. Assorbimento di particelle beta trizio dal scintillant produce segnali luminosi che possono essere misurati in standard contatori di scintillazione. A causa di corto raggio delle particelle beta trizio e per motivi geometrici, microsfere di scintillant rileva solo quella frazione di trizio colesterolo localizzata all&#39;interno di phagolysosomes o entro una distanza di circa 600 nm. Incubando culture in un lettore di micropiastre a temperatura controllata, la cinetica di trasporto fagocitosi e colesterolo potrebbe essere analizzata in tempo quasi reale. Scintillazione segnali erano significativamente aumentati in risposta agli inibitori di esportazione lisosomiale di colesterolo. Questo metodo dovrebbe rivelarsi un nuovo strumento utile per lo studio della endosomal tratta di lipidi e altre molecole.

Analisi in tempo reale del trasporto dei lipidi endosomal da vivere analisi delle cellule di prossimit&agrave; di scintillazione.

&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x751F;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A2;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x98DF;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x683C;&#x7D0D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x3B2;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5438;&#x53CE;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3081;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x3068;&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x7406;&#x7531;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x77ED;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A2;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D04;600nm&#x306E;&#x8DDD;&#x96E2;&#x5185;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x98DF;&#x3068;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x307B;&#x307C;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x89E3;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8102;&#x8CEA;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x5206;&#x6790;

&#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; endosomal &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; tritiated &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC0F; scintillant microspheres &#xC874;&#xC7AC; &#xACBD;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4;. Microspheres &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC44;&#xD0DD; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; phagolysosomes&#xC5D0; &#xC800;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Scintillant&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0BC;&#xC911; &#xC218;&#xC18C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xD761;&#xC218;&#xB294; &#xD45C;&#xC900; &#xC12C;&#xAD11; &#xCE74;&#xC6B4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9E7;&#xC740; &#xBC94;&#xC704; &#xD2B8; &#xB9AC;&#xD2AC; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC785;&#xC790; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD558;&#xD559;&#xC801; &#xC774;&#xC720;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; scintillant microspheres &#xAC10;&#xC9C0; tritiated &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; phagolysosomes &#xB0B4;&#xBD80; &#xB610;&#xB294; &#xC57D; 600 &#xAC70;&#xB9AC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC77C;&#xBD80;&#xB9CC; nm. &#xC628;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBBF8; &#xD310; &#xB3C5;&#xC790;&#xC758; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xBC30;&#xC591; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC804;&#xC1A1; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC70;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC12C;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638; lysosomal &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC218;&#xCD9C;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; endosomal &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC99D;&#xBA85; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Endosomal &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC218;&#xC1A1;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBD84;&#xC11D; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;.

Un ensayo de proximidad de centelleo se ha desarrollado para estudiar el tr&#xE1;fico endosomal de colesterol radiomarcado en c&#xE9;lulas vivas. Macr&#xF3;fagos de rat&#xF3;n se cultivaron en presencia de colesterol tritiada y microesferas centelleo. Las microesferas fueron tomadas por la fagocitosis y se almacena en fagolisosomas. La absorci&#xF3;n de part&#xED;culas beta de tritio por el centelleo produce se&#xF1;ales de luz que pueden ser medidos en contadores de centelleo est&#xE1;ndar. Debido a la corta distancia de las part&#xED;culas beta de tritio y por razones geom&#xE9;tricas, centelleo microesferas detectar s&#xF3;lo la fracci&#xF3;n de colesterol localizado en el interior tritiada fagolisosomas o dentro de una distancia de aproximadamente 600 nm. Mediante la incubaci&#xF3;n de las culturas en un lector de microplacas con control de temperatura, la cin&#xE9;tica de la fagocitosis y el transporte de colesterol podr&#xED;an ser analizados en tiempo casi real. Se&#xF1;ales de centelleo se incrementaron significativamente en respuesta a los inhibidores de la exportaci&#xF3;n de colesterol lisosomal. Este m&#xE9;todo debe probar una nueva herramienta &#xFA;til para el estudio del tr&#xE1;fico endosomal de los l&#xED;pidos y otras mol&#xE9;culas.

An&#xE1;lisis en tiempo real del transporte de l&#xED;pidos por endosomal ensayo de proximidad en vivo de la c&#xE9;lula de centelleo

&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x542B;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x916F;&#x90E8;&#x5206;&#x83B7;&#x5F97;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3002;&#x5728; endosomes &#x548C;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x916F;&#x88AB;&#x6C34;&#x89E3;&#x751F;&#x4EA7;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x548C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7684;&#x9178;&#x6027;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x916F;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x3002;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x75C5;&#x7406;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5982;&#x5728;&#x52A8;&#x8109;&#x7CA5;&#x6837;&#x786C;&#x5316;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x916F;&#x79EF;&#x7D2F;&#x5728;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x4E2D;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86; endosomal &#x548C;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x80C6;&#x753E;&#x9187;&#x916F;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7528;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x51C0;&#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x80C6;&#x753E;&#x9187;&#x916F;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x79FB;&#x4EA4;&#x819C;&#x3002;&#x5F53;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x8F83;&#x4F4E;&#x65F6;&#xFF0C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5438;&#x6536;&#x6709;&#x6548;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x80C6;&#x753E;&#x9187;&#x916F;&#x6C34;&#x89E3;&#x3002;&#x5F53;&#x53D7;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E2D;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6C34;&#x5E73;&#x63A5;&#x8FD1;&#x9971;&#x548C;&#x6216;&#x963B;&#x6B62;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x51FA;&#x53E3;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5728; endosomes re-esterified &#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x5C42;&#x9762;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5BF9;&#x52A8;&#x8109;&#x7CA5;&#x6837;&#x786C;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x4E2D;&#x80C6;&#x753E;&#x9187;&#x916F;&#x79EF;&#x7D2F;&#x6F5C;&#x5728;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;

Endosomal &#x80C6;&#x753E;&#x9187;&#x916F;&#x819C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Cells acquire cholesterol in part by endocytosis of cholesteryl ester containing lipoproteins. In endosomes and lysosomes cholesteryl ester is hydrolyzed by acidic cholesteryl ester hydrolase producing cholesterol and fatty acids. Under certain pathological conditions, however, such as in atherosclerosis, excessive levels of cholesteryl ester accumulate in lysosomes for reasons that are poorly understood. Here, we have studied endosomal and lysosomal cholesteryl ester metabolism in cultured mouse macrophages and with cell-free extracts. We show that net hydrolysis of cholesteryl ester is coupled to the transfer of cholesterol to membranes. When membrane cholesterol levels are low, absorption of cholesterol effectively drives cholesteryl ester hydrolysis. When cholesterol levels in acceptor membranes approach saturation or when cholesterol export is blocked, cholesterol is re-esterified in endosomes. These results reveal a new facet of cellular cholesterol homeostasis and provide a potential explanation for cholesteryl ester accumulation in lysosomes of atherosclerotic cells.

Modulation of endosomal cholesteryl ester metabolism by membrane cholesterol.

Les cellules d&#x26;#39;acqu&#xE9;rir le taux de cholest&#xE9;rol en partie par endocytose des esters de cholest&#xE9;rol des lipoprot&#xE9;ines contenant. Dans les endosomes et les lysosomes des esters de cholest&#xE9;rol est hydrolys&#xE9; par ester hydrolase acide cholest&#xE9;rol produire cholest&#xE9;rol et des acides gras. Dans certaines conditions pathologiques, cependant, comme dans l&#x26;#39;ath&#xE9;roscl&#xE9;rose, des niveaux excessifs de cholest&#xE9;rol est&#xE9;rifi&#xE9; s&#x26;#39;accumulent dans les lysosomes pour des raisons qui sont mal comprises. Ici, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; endosomal et lysosomal m&#xE9;tabolisme des esters de cholest&#xE9;rol dans les macrophages de souris en culture et avec des extraits acellulaires. On montre que l&#x26;#39;hydrolyse de l&#x26;#39;ester de cholest&#xE9;ryle nette est coupl&#xE9; &#xE0; la transmission du cholest&#xE9;rol aux membranes. Lorsque le taux de cholest&#xE9;rol membranaires sont faibles, l&#x26;#39;absorption du cholest&#xE9;rol entra&#xEE;ne efficacement l&#x26;#39;hydrolyse des esters de cholest&#xE9;rol. Lorsque le taux de cholest&#xE9;rol dans les membranes accepteurs approcher la saturation ou lorsque le taux de cholest&#xE9;rol &#xE0; l&#x26;#39;exportation est bloqu&#xE9;e, le cholest&#xE9;rol est r&#xE9;est&#xE9;rifi&#xE9;es dans les endosomes. Ces r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent une nouvelle facette de l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie du cholest&#xE9;rol cellulaire et de fournir une explication potentiel d&#x26;#39;accumulation des esters de cholest&#xE9;rol dans les lysosomes des cellules ath&#xE9;roscl&#xE9;reuses.

Modulation du m&#xE9;tabolisme du cholest&#xE9;rol par Ester endosomal cholest&#xE9;rol membranaire

Die Modulation der endosomalen Cholesterylester Stoffwechsel von Cholesterin Membran.

Le cellule acquisiscono colesterolo in parte tramite endocitosi di estere del colesterolo che contengono lipoproteine. In endosomes e lisosomi del colesterolo estere viene idrolizzato dalla acide del colesterolo estere idrolasi producendo acidi grassi e colesterolo. In determinate condizioni patologiche, tuttavia, come nell&#39;aterosclerosi, livelli eccessivi di colesterolo estere accumulano nei lisosomi per ragioni che sono scarsamente compreso. Qui, abbiamo studiato endosomal e metabolismo di ester lisosomiale del colesterolo in macrofagi di topo colto e con estratti senza cellula. Vi mostriamo quello netto idrolisi di colesterolo estere &egrave; accoppiato al trasferimento del colesterolo a membrane. Quando i livelli di colesterolo di membrana sono bassi, assorbimento di colesterolo spinge efficacemente idrolisi dell&#39;estere del colesterolo. Quando i livelli di colesterolo in membrane accettore approccio saturazione o quando viene bloccato l&#39;esportazione di colesterolo, il colesterolo &egrave; riesterificato nel endosomes. Questi risultati rivelano un nuovo aspetto della omeostasi del colesterolo cellulare e forniscono una spiegazione potenziale per accumulo di estere del colesterolo nei lisosomi delle cellule aterosclerotiche.

Modulazione del metabolismo endosomal del colesterolo estere colesterolo di membrana.

&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x3092;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3059;&#x308B;&#x9178;&#x6027;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x75C5;&#x7684;&#x72B6;&#x614B;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;&#x6027;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x7406;&#x7531;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x819C;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x4F4E;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5438;&#x53CE;&#x304C;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x819C;&#x4E2D;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x98FD;&#x548C;&#x306B;&#x8FD1;&#x3065;&#x304F;&#x3084;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x518D;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;&#x6027;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC140; endocytosis&#xC758; cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC744; &#xCDE8;&#xB4DD;. Endosomes&#xC640; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xACFC; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0; &#xC131; cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xD574; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xD2B9;&#xC815; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C;,&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;&#xC5D0; cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCD95;&#xC801; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC5D0; &#xC798;&#xBABB; &#xC778;&#xC2DD; &#xB418;&#xB294; &#xC774;&#xC720;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; endosomal&#xACFC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC140; &#xBB34;&#xB8CC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; lysosomal cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC21C;&#xAC00; &#xC218; &#xBD84;&#xD574; &#xBCF4;&#xC5EC; cholesteryl&#xC758; &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xC591;&#xB3C4;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569;. &#xB9C9; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xCE58;&#xAC00; &#xB0AE;&#xC740; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC758; &#xD761;&#xC218;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974;&#xAC00; &#xC218; &#xBD84;&#xD574; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;. &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD3EC;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xC218;&#xCD9C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB54C; &#xC811;&#xADFC;, &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC740; endosomes&#xC5D0;&#xC11C; re-esterified. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC77C; &#xBA74;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD; &#xD654;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC5D0; cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C9; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; endosomal cholesteryl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; &#xB300;&#xC0AC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;.

C&#xE9;lulas adquirir colesterol en parte por la endocitosis de &#xE9;ster de colesterilo que contiene lipoprote&#xED;nas. En endosomas y lisosomas &#xE9;ster de colesterilo se hidroliza por hidrolasa &#xE1;cida del &#xE9;ster de colesterilo producir colesterol y &#xE1;cidos grasos. Bajo ciertas condiciones patol&#xF3;gicas, sin embargo, como en la aterosclerosis, los niveles excesivos de &#xE9;ster de colesterilo se acumulan en los lisosomas, por razones que no se entienden bien. En este sentido, hemos estudiado el metabolismo del colesterol &#xE9;ster endosomal lisosomales y en los macr&#xF3;fagos de rat&#xF3;n cultivadas y con extractos libres de c&#xE9;lulas. Se demuestra que la hidr&#xF3;lisis neta de &#xE9;ster de colesterilo se acopla a la transferencia de colesterol a las membranas. Cuando los niveles de colesterol en la membrana son bajas, la absorci&#xF3;n de colesterol efectivamente impulsa la hidr&#xF3;lisis &#xE9;steres de colesterol. Cuando los niveles de colesterol en las membranas aceptor acercan a la saturaci&#xF3;n o cuando exportaci&#xF3;n colesterol est&#xE1; bloqueado, el colesterol es reesterificados en endosomas. Estos resultados revelan una nueva faceta de la homeostasis del colesterol celular y proporciona una posible explicaci&#xF3;n para la acumulaci&#xF3;n de &#xE9;steres de colesterol en los lisosomas de las c&#xE9;lulas ateroscler&#xF3;ticas.

La modulaci&#xF3;n del metabolismo endosomal &#xE9;steres de colesterol por el colesterol de la membrana

&#x819C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x51E0;&#x4E2A;&#x51E0;&#x5341;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5FC5;&#x987B;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x97F3;&#x4E50;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5927;&#x7EA6; 100 &#x8840;&#x8102;&#x5728;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7814;&#x7A76;&#x53CC;&#x5C42;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x4E86;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8865;&#x5145;&#x819C;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x7C92;&#x5B50;&#x88AB;&#x706B;&#x7130;&#x541E;&#x6CA1;&#x5728;&#x652F;&#x7528;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x3002;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E73;&#x80F6;&#x73E0;&#x541E;&#x566C;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5408;&#x6210;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x78F7;&#x8102;&#x6570;&#x989D;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x8868;&#x9762;&#x79EF;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x7531;&#x591A;&#x79CD;&#x8102;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;&#x3001; &#x9176; 3-&#x7F9F;&#x57FA;-3-methylglutaryl CoA &#x8FD8;&#x539F;&#x9176; 3-&#x7F9F;&#x57FA;-3-methylglutaryl CoA &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#xFF09;&#xFF0C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x6240;&#x9700;&#x589E;&#x52A0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x966A;&#x540C;&#x3002;&#x541E;&#x566C;&#x89E6;&#x53D1;&#x4E24;&#x8102;&#x6E90;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x753E;&#x9187;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;-1a (&#x56FA;&#x9187;-1a) &#x548C;&#x56FA;&#x9187; 2 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x56FA;&#x9187;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6C34;&#x89E3;&#xFF0C;&#x6B63;&#x503C;&#x5176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x79EF;&#x6781; N &#x603B;&#x7AD9;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x7684;&#x5916;&#x89C2;&#x548C;&#x4E09;&#x6298;&#x56FA;&#x9187;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E0E;&#x57F9;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56FA;&#x9187;-1a &#x548C;&#x56FA;&#x9187; 2 &#x6240;&#x6307;&#x51FA;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6709;&#x997F;&#x6B7B;&#x7684;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x4E0D;&#x9971;&#x548C;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x56FA;&#x9187;-1a &#x548C;&#x56FA;&#x9187;-2 &#x88AB;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8102;&#x8D28;&#x5265;&#x593A;&#x3002;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x56FA;&#x9187;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D; Insig1 &#x7684;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x6216;&#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x56FA;&#x9187;&#x88C2;&#x89E3;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x541E;&#x566C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x8102;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x5DF2;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x91CD;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x7684;&#x819C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x786E;&#x5B9A;&#x56FA;&#x9187;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E3A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7814;&#x7A76;&#x819C;&#x7A33;&#x6001;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

&#x56FA;&#x9187;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x819C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

In the process of membrane biogenesis several dozen proteins must operate in precise concert to generate approximately 100 lipids at appropriate concentrations. To study the regulation of bilayer assembly in a cell cycle-independent manner, we have exploited the fact that phagocytes replenish membranes expended during particle engulfment in a rapid phase of lipid synthesis. In response to phagocytosis of latex beads, human embryonic kidney 293 cells synthesized cholesterol and phospholipids at amounts equivalent to the surface area of the internalized particles. Lipid synthesis was accompanied by increased transcription of several lipogenic proteins, including the low-density lipoprotein receptor, enzymes required for cholesterol synthesis (3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA synthase, 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase), and fatty acid synthase. Phagocytosis triggered the proteolytic activation of two lipogenic transcription factors, sterol regulatory element binding protein-1a (SREBP-1a) and SREBP-2. Proteolysis of SREBPs coincided with the appearance of their transcriptionally active N termini in the nucleus and 3-fold activation of an SREBP-specific reporter gene. In previous studies with cultured cells, proteolytic activation of SREBP-1a and SREBP-2 has been observed in response to selective starvation of cells for cholesterol and unsaturated fatty acids. However, under the current conditions, SREBP-1a and SREBP-2 are induced without lipid deprivation. SREBP activation is inhibited by high levels of the SREBP-interacting proteins Insig1 or the cytosolic domain of SREBP cleavage-activating protein. Upon overexpression of these proteins, phagocytosis-induced transcription and lipid synthesis were blocked. These results identify SREBPs as essential regulators of membrane biogenesis and provide a useful system for further studies on membrane homeostasis.

Transcriptional regulation of phagocytosis-induced membrane biogenesis by sterol regulatory element binding proteins.

Dans le processus de la biogen&#xE8;se des prot&#xE9;ines membranaires de plusieurs dizaines doivent fonctionner de concert pr&#xE9;cise pour g&#xE9;n&#xE9;rer environ 100 lipides &#xE0; des concentrations appropri&#xE9;es. Pour &#xE9;tudier la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;assemblage dans une bicouche du cycle cellulaire ind&#xE9;pendante mani&#xE8;re, nous avons exploit&#xE9; le fait que les phagocytes reconstituer membranes utilis&#xE9;es au cours de l&#x26;#39;engloutissement de particules dans une phase rapide de la synth&#xE8;se des lipides. En r&#xE9;ponse &#xE0; la phagocytose de billes de latex, de rein d&#x26;#39;embryon humain 293 cellules synth&#xE9;tis&#xE9; cholest&#xE9;rol et des phospholipides &#xE0; des quantit&#xE9;s &#xE9;quivalentes &#xE0; la surface des particules internalis&#xE9;es. La synth&#xE8;se des lipides a &#xE9;t&#xE9; accompagn&#xE9;e par une transcription accrue de plusieurs prot&#xE9;ines lipog&#xE9;niques, y compris le r&#xE9;cepteur des lipoprot&#xE9;ines de basse densit&#xE9;, les enzymes n&#xE9;cessaires &#xE0; la synth&#xE8;se du cholest&#xE9;rol (3-hydroxy-3-m&#xE9;thylglutaryl CoA synthase, 3-hydroxy-3-m&#xE9;thylglutaryl CoA r&#xE9;ductase), et d&#x26;#39;acide gras synthase. Phagocytose d&#xE9;clench&#xE9; l&#x26;#39;activation prot&#xE9;olytique de deux facteurs de transcription, des lipog&#xE9;niques &#xE9;l&#xE9;ment r&#xE9;gulateur des st&#xE9;rols liaison prot&#xE9;ine-1a (SREBP-1a) et SREBP-2. La prot&#xE9;olyse de la SREBPs a co&#xEF;ncid&#xE9; avec l&#x26;#39;apparition de leurs extr&#xE9;mit&#xE9;s N transcriptionnellement actives dans le noyau et 3 fois l&#x26;#39;activation d&#x26;#39;un g&#xE8;ne rapporteur SREBP-sp&#xE9;cifique. Dans des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures avec des cellules en culture, l&#x26;#39;activation prot&#xE9;olytique de SREBP-1a et SREBP-2 a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e en r&#xE9;ponse &#xE0; la famine s&#xE9;lective de cellules pour le cholest&#xE9;rol et les acides gras insatur&#xE9;s. Toutefois, dans les conditions actuelles, SREBP-1a et SREBP-2 sont induits sans privation des lipides. SREBP activation est inhib&#xE9;e par des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s des prot&#xE9;ines SREBP-interaction Insig1 ou le domaine cytosolique de SREBP clivage-activating protein. Sur la surexpression de ces prot&#xE9;ines, la phagocytose induite par la transcription et la synth&#xE8;se des lipides ont &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9;s. Ces r&#xE9;sultats mettent en &#xE9;vidence que SREBPs des r&#xE9;gulateurs essentiels de la biogen&#xE8;se des membranes et de fournir un syst&#xE8;me utile pour des &#xE9;tudes ult&#xE9;rieures sur l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie membranaire.

R&#xE9;gulation transcriptionnelle de biogen&#xE8;se des membranes phagocytose induite par des prot&#xE9;ines de liaison st&#xE9;rol &#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;gulation

In den Prozess der Membran Biogenese unterh&auml;lt mehrere Dutzend Proteine pr&auml;zise Konzert um ca. 100 Lipide bei geeigneten Konzentrationen zu generieren. Um die Regulierung der Bilayer Versammlung Zellzyklus-unabh&auml;ngig zu studieren, haben wir die Tatsache ausgenutzt, dass Fresszellen Membranen Gehgeschwindigkeit w&auml;hrend Partikel Engulfment in einer schnellen Phase der Lipid-Synthese wieder aufzuf&uuml;llen. In Reaktion auf die Phagozytose von Latex-Perlen synthetisiert menschlichen embryonalen Nierenzellen 293, Cholesterin und Phospholipide in der verinnerlichten Teilchen entspricht der Fl&auml;che bel&auml;uft. Lipid-Synthese wurde begleitet von erh&ouml;hter Transkription von mehreren Lipogenic Proteinen, einschlie&szlig;lich den Rezeptor low density Lipoprotein, Enzyme, die f&uuml;r die Cholesterin-Synthese (3-hydroxy-3-Methylglutaryl-CoA-Synthase, 3-hydroxy-3-Methylglutaryl-CoA-Reduktase) und Fetts&auml;ure-Synthase. Phagozytose l&ouml;ste die proteolytische Aktivierung von zwei Lipogenic Transkriptionsfaktoren, Sterin regulatorischen Element Binding Protein-1a (SREBP-1a) und SREBP-2. Proteolyse von SREBPs fiel mit der Darstellung ihrer transcriptionally aktiv N-Termini im Zellkern und 3-Band-Aktivierung ein SREBP-spezifische-Reporter-gen. In fr&uuml;heren Studien mit kultivierten Zellen wurde als Reaktion auf selektive Hungertod von Zellen f&uuml;r Cholesterin und unges&auml;ttigten Fetts&auml;uren proteolytische Aktivierung von SREBP-1a und SREBP-2 beobachtet. Allerdings sind unter den gegenw&auml;rtigen Bedingungen SREBP-1a und SREBP-2 ohne Lipid Entbehrung ausgel&divide;St. SREBP Aktivierung ist durch hohe Niveaus der SREBP-Interaktion-Proteine Insig1 oder die Zytosolische Dom&auml;ne SREBP Cleavage-Aktivierung Proteins gehemmt. Auf eine &Uuml;berexpression von dieser Proteine wurden Transkription induziert durch Phagozytose und Lipid-Synthese blockiert. Diese Ergebnisse identifizieren SREBPs als wesentliche Regulatoren der Membran Biogenese und bieten ein n&uuml;tzliches System f&uuml;r weitere Studien auf Membran-Hom&ouml;ostase.

Transkriptionelle Regulation der Membran induziert durch Phagozytose Biogenese von Sterin regulatorischen Element bindenden Proteinen.

In procinto di biogenesi della membrana parecchi dozzina proteine devono operare in concerto preciso per generare circa 100 lipidi a concentrazioni appropriate. Per studiare il regolamento dell&#39;Assemblea di doppio strato in modo indipendente dal ciclo cellulare, noi abbiamo sfruttato il fatto che i fagociti ricostituire membrane esaurite durante il engulfment della particella in una rapida fase di sintesi di lipidi. In risposta alla fagocitosi dei granuli di lattice, cellule renali embrionali umane 293 sintetizzato colesterolo e fosfolipidi a importi equivalenti per l&#39;area della superficie delle particelle interiorizzate. Sintesi di lipidi &egrave; stata accompagnata da aumentata trascrizione di diverse proteine lipogenici, tra cui il recettore di lipoproteine a bassa densit&agrave;, enzimi necessari per la sintesi del colesterolo (3-idrossi-3-metilglutaril CoA sintasi, 3-idrossi-3-metilglutaril CoA reduttasi) e acido grasso sintasi. Fagocitosi innescato l&#39;attivazione proteolitica di due fattori di trascrizione lipogenici, sterol regulatory element associazione proteina-1a (SREBP-1a) e SREBP-2. Proteolisi di SREBPs coincise con l&#39;aspetto di loro termini N transcriptionally attivi nel nucleo e triplice attivazione di un gene reporter SREBP-specifiche. In precedenti studi con cellule coltivate, attivazione proteolitica di SREBP-1a e SREBP-2 &egrave; stata osservata in risposta alla fame selettiva delle cellule per colesterolo e acidi grassi insaturi. Tuttavia, nelle condizioni attuali, SREBP-1a e SREBP-2 sono indotte senza privazione dei lipidi. Attivazione di SREBP &egrave; inibito da alti livelli di proteine interagenti SREBP Insig1 o il dominio citosolico della proteina SREBP attivazione di clivaggio. All&#39;iperespressione di queste proteine, indotta da fagocitosi trascrizione e sintesi di lipidi sono stati bloccati. Questi risultati identificano SREBPs come regolatori essenziali della biogenesi della membrana e forniscono un sistema utile per ulteriori studi sull&#39;omeostasi membrana.

Regolazione trascrizionale di biogenesi della membrana indotta da fagocitosi da sterol regulatory element binding proteins.

&#x819C;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x6570;&#x5341;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x7D04;100&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x76F8;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x8CAA;&#x98DF;&#x6642;&#x306B;&#x8CBB;&#x3084;&#x3055;&#x819C;&#x3092;&#x88DC;&#x5145;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x814E;&#x81D3;293&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x91D1;&#x984D;&#x3067;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;3  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-3  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB;CoA&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;3  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-3  - &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30EB;CoA&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3001;&#x3068;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x9175;&#x7D20;&#x3002;&#x8CAA;&#x98DF;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-1A&#xFF08;SREBP-1a&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;SREBP-2&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SREBPs&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x3067;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x3068;SREBP-&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;3&#x500D;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SREBP-1a&#x3068;SREBP-2&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3084;&#x98FD;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SREBP-1a&#x3068;SREBP-2&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; SREBP&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;SREBP-&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Insig1&#x307E;&#x305F;&#x306F;SREBP&#x5207;&#x65AD;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x98DF;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8102;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;SREBPs&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB9C9; &#xC18D; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E4;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 100 &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xCF58;&#xC11C;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD; bilayer &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC790; engulfment &#xB3D9;&#xC548; &#xC18C;&#xBE44;&#xB97C; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC744; &#xC545;&#xC6A9;. &#xB77C;&#xD14D;&#xC2A4; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; 293 &#xC138;&#xD3EC; &#xD569;&#xC131; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC0F; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xB178;&#xCD9C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0;. &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; synthase (3 hydroxy 3 methylglutaryl CoA synthase, 3 hydroxy 3 methylglutaryl CoA reductase) &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC800;&#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; lipogenic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC804;&#xC0AC; &#xB3D9;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9; &#xB450; lipogenic &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;, sterol &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-1a (SREBP-1a) &#xBC0F; SREBP-2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xAC00; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; Srebps&#xC758; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; transcriptionally &#xD65C;&#xC131; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBAA8;&#xC591;&#xACFC; SREBP &#xAD00;&#xB828; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; 3 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xACB9; &#xCCE4; &#xB2E4;. &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; SREBP-1a &#xBC0F; SREBP-2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC0F; &#xBD88;&#xD3EC;&#xD654; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAE30;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; SREBP-1a &#xBC0F; SREBP-2 &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD80;&#xC871; &#xC5C6;&#xC774; &#xC720;&#xB3C4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. SREBP &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; SREBP &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; insig1&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC774; &#xB098; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SREBP&#xC758; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; overexpression, &#xC2DC; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9C9; &#xC18D;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; Srebps&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C9; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sterol &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB9C9; &#xC18D;&#xC758; transcriptional &#xADDC;&#xC81C;.

En el proceso de la biog&#xE9;nesis prote&#xED;nas de la membrana varias docenas debe operar en concierto precisa para generar aproximadamente 100 l&#xED;pidos en las concentraciones adecuadas. Para estudiar la regulaci&#xF3;n del conjunto de doble capa en un ciclo celular de manera independiente, hemos aprovechado el hecho de que los fagocitos reponer membranas gastadas durante el atrapamiento de part&#xED;culas en una r&#xE1;pida fase de la s&#xED;ntesis de l&#xED;pidos. En respuesta a la fagocitosis de perlas de l&#xE1;tex, ri&#xF1;&#xF3;n embrionario humano 293 c&#xE9;lulas sintetizan colesterol y fosfol&#xED;pidos en cantidades equivalentes a la superficie de las part&#xED;culas internalizados. S&#xED;ntesis de l&#xED;pidos fue acompa&#xF1;ado por transcripci&#xF3;n aumentado de varias prote&#xED;nas lipogenic, incluyendo el receptor de lipoprote&#xED;nas de baja densidad, las enzimas necesarias para la s&#xED;ntesis de colesterol (sintasa 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA, 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductasa) y &#xE1;cido graso sintasa. Fagocitosis provoc&#xF3; la activaci&#xF3;n proteol&#xED;tica de dos factores de transcripci&#xF3;n, los lipog&#xE9;nicos regulador de esteroles elemento de uni&#xF3;n de prote&#xED;nas 1a-(SREBP-1a) y SREBP-2. La prote&#xF3;lisis de SREBPs coincidi&#xF3; con la aparici&#xF3;n de sus extremos N transcripcionalmente activos en el n&#xFA;cleo y tres veces la activaci&#xF3;n de un gen reportero SREBP-espec&#xED;fica. En estudios anteriores con c&#xE9;lulas cultivadas, la activaci&#xF3;n proteol&#xED;tica de SREBP-1a y SREBP 2-se ha observado en respuesta a la inanici&#xF3;n selectiva de las c&#xE9;lulas para colesterol y &#xE1;cidos grasos insaturados. Sin embargo, en las condiciones actuales, SREBP-1a y SREBP-2 se induce sin privaci&#xF3;n de l&#xED;pidos. SREBP activaci&#xF3;n es inhibida por altos niveles de las prote&#xED;nas SREBP-que interact&#xFA;an Insig1 o el dominio citos&#xF3;lico de SREBP divisi&#xF3;n de activaci&#xF3;n de la prote&#xED;na. A la sobreexpresi&#xF3;n de estas prote&#xED;nas, la fagocitosis inducida por la transcripci&#xF3;n y la s&#xED;ntesis de l&#xED;pidos fueron bloqueados. Estos resultados identifican SREBPs como reguladores esenciales de la biog&#xE9;nesis de la membrana y proporcionar un sistema &#xFA;til para estudios posteriores sobre la homeostasis de la membrana.

Regulaci&#xF3;n transcripcional de la biog&#xE9;nesis de la membrana fagocitosis inducida por las prote&#xED;nas reguladoras del esterol elemento de enlace

Phagosomes &#x665A;&#x541E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x4E0E;&#x878D;&#x5408;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D88;&#x5316;&#x7684;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3001; &#x8870;&#x8001;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x51CB;&#x4EA1;&#x5C0F;&#x4F53;&#x548C;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5916;&#x90E8;&#x5206;&#x7247;&#x6BB5;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6F84;&#x6E05;&#x76EE;&#x6807;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E00;&#x79CD;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7814;&#x7A76;&#x9010;&#x6B65;&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x548C; phagosomes &#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x6C1A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53; phagosomes &#x5305;&#x542B;&#x95EA;&#x70C1;&#x4E73;&#x80F6;&#x73E0;&#x4E0E;&#x5B75;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D1;&#x5149;&#x4E2D;&#x9700;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x3001; &#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x548C;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F4E;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x65B0;&#x751F;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x662F;&#x7531;&#x78B1;&#x6027;&#x78B3;&#x9178;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&quot;&#x505C;&#x9760;&quot;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x878D;&#x5408;&#x4E2D;&#x65AD;&#x5BF9;&#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x5BF9;&#x63A5;&#x524D;&#x9762;&#x662F;&#x8BA9;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x5728;&#x505C;&#x9760;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x4E0D;&#x518D;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x5BF9;&#x63A5;&#x6D3B;&#x52A8;&#x88AB;&#x51C0;&#x5316;&#xFF0C;&#x9644;&#x8FD1;&#x4ECE;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x7684;&#x540C;&#x8D28;&#x6027;&#x3002;&#x4E3B;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x5305;&#x62EC;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; IQGAP2&#x3002;IQGAPs &#x5DF2;&#x77E5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x9489; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x5728;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x5B9E;&#x4E60;&#x534F;&#x8C03;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x4EA4;&#x4E92;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x884C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5939;&#x5C42;&#x4E3A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x3001; &#x9499;&#x8C03;&#x7D20;&#x548C; Ca2 + &#x5DEE;&#x8981;&#x6C42;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x9488;&#x5BF9;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;

Fusion of phagosomes with late endocytic organelles is essential for cellular digestion of microbial pathogens, senescent cells, apoptotic bodies, and retinal outer segment fragments. To further elucidate the biochemistry of the targeting process, we developed a scintillation proximity assay to study the stepwise association of lysosomes and phagosomes in vitro. Incubation of tritium-labeled lysosomes with phagosomes containing scintillant latex beads led to light emission in a reaction requiring cytosol, ATP, and low Ca(2+) concentrations. The nascent complex was sensitive to disruption by alkaline carbonate, indicating that the organelles had "docked" but not fused. Through inhibitor studies and fluorescence microscopy we show that docking is preceded by a tethering step that requires actin polymerization and calmodulin. In the docked state ongoing actin polymerization and calmodulin are no longer necessary. The tethering/docking activity was purified to near homogeneity from rat liver cytosol. Major proteins in the active fractions included actin, calmodulin and IQGAP2. IQGAPs are known to bind calmodulin and cross-link F-actin, suggesting a key coordinating role during lysosome/phagosome attachment. The current results support the conclusion that lysosome/phagosome interactions proceed through distinct stages and provide a useful new approach for further experimental dissection.

Differential requirements for actin polymerization, calmodulin, and Ca2+ define distinct stages of lysosome/phagosome targeting.

Fusion des phagosomes avec la fin des organites d&#x26;#39;endocytose est essentiel pour la digestion cellulaire des pathog&#xE8;nes microbiens, les cellules s&#xE9;nescentes, corps apoptotiques, et la r&#xE9;tine des fragments segment externe. Pour &#xE9;lucider la biochimie du processus de ciblage, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une analyse de proximit&#xE9; &#xE0; scintillation pour &#xE9;tudier l&#x26;#39;association progressive des lysosomes et phagosomes in vitro. Lysosomes incubation du tritium-&#xE9;tiquet&#xE9;es avec phagosomes contenant des billes de latex scintillantes ont conduit &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;mission de lumi&#xE8;re dans une r&#xE9;action n&#xE9;cessitant cytosol, ATP, et faible teneur en Ca (2 +). Concentrations Le complexe &#xE9;tait naissante sensible aux perturbations par le carbonate alcalin, ce qui indique que les organites avait &#x26;quot;ancr&#xE9;e&#x26;quot;, mais pas fusionn&#xE9;. Gr&#xE2;ce &#xE0; des &#xE9;tudes d&#x26;#39;inhibiteurs et microscopie de fluorescence, nous montrons que la caudectomie est pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9;e par une &#xE9;tape d&#x26;#39;attache qui exige polym&#xE9;risation de l&#x26;#39;actine et la calmoduline. Dans la polym&#xE9;risation de l&#x26;#39;actine &#xE9;tat amarr&#xE9; en cours et la calmoduline ne sont plus n&#xE9;cessaires. L&#x26;#39;activit&#xE9; d&#x26;#39;attache / d&#x26;#39;accueil a &#xE9;t&#xE9; purifi&#xE9;e jusqu&#x26;#39;&#xE0; homog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; &#xE0; proximit&#xE9; du cytosol de foie de rat. Prot&#xE9;ines majeures dans les fractions actives inscrites actine, la calmoduline et IQGAP2. IQGAPs sont connus pour se lier la calmoduline et cross-link F-actine, sugg&#xE9;rant un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la coordination au cours lysosome / phagosome pi&#xE8;ce jointe. Les r&#xE9;sultats actuels appuient la conclusion que lysosome / phagosome interactions proc&#xE9;der par &#xE9;tapes distinctes et de fournir une approche utile pour la dissection exp&#xE9;rimentale nouvelle encore.

Exigences diff&#xE9;rentielles pour polym&#xE9;risation de l&#x26;#39;actine, la calmoduline, et Ca2 + D&#xE9;finir des &#xE9;tapes distinctes de Lysosome / phagosome ciblage

Verschmelzung von Phagosomen mit sp&auml;ten endocytic Organellen unbedingt zellularen Verdauung von mikrobiellen Krankheitserregern, alternde Zellen und Apoptotic K&ouml;rper retinale &auml;u&szlig;ere Segment Fragmente. Um die Biochemie des Prozesses gezielt weiter zu erhellen, entwickelten wir ein Szintillation-N&auml;he-Assay um die schrittweise Vereinigung der Lysosomen und Phagosomen in-vitro-Studie. Inkubation von Tritium-beschrifteten Lysosomen mit Phagosomen mit Scintillant Latex Beads f&uuml;hrte zur Lichtemission im Zytosol, ATP und niedrigen Konzentrationen der Ca(2+) Reaktion. Der entstehende Komplex war empfindlich auf St&ouml;rungen durch Alkali Carbonat, darauf hinweist, dass die Organellen &quot;angedockt&quot; hatte, aber nicht verschmolzen. Durch Hemmer Studien und Fluoreszenz Mikroskopie zeigen wir, dass Andocken ein Anbindehaltung Schritt vorangestellt, die Aktin-Polymerisation und Calmodulin erfordert. In die angedockten Zustand laufenden Actin sind Polymerisierung und Calmodulin nicht mehr notwendig. Die Anbindehaltung/Andocken-Aktivit&auml;t wurde gereinigt, um Homogenit&auml;t von Rattenleberzellen Zytosol nahe. Wichtige Proteine in der aktiven Br&uuml;che enthalten Calmodulin, Aktin und IQGAP2. IQGAPs sind bekannterma&szlig;en Calmodulin binden und sich vernetzen F-Actin, schl&auml;gt einen koordinierende Rolle w&auml;hrend Lysosom/Phagosom Anlage Schl&uuml;ssel. Die aktuelle Ergebnisse st&uuml;tzen die Schlussfolgerung, dass Lysosom/Phagosom Interaktionen unterscheidbare Stufen durchlaufen und einen n&uuml;tzlichen neuen Ansatz f&uuml;r weitere experimentelle Dissektion bieten.

Differenzielle Anforderungen f&uuml;r Aktin-Polymerisation, Calmodulin und Ca2 + definieren Lysosom/Phagosom auf mehreren Stufen.

Fusione di phagosomes con fine endocitico organelli &egrave; essenziale per la digestione cellulare di microbi patogeni, cellule senescenti, enti apoptotic e frammenti della retina segmento esterno. Per chiarire ulteriormente la biochimica del processo di targeting, abbiamo sviluppato un saggio di prossimit&agrave; di scintillazione per studiare l&#39;associazione graduale dei lisosomi e phagosomes in vitro. Incubazione dei lisosomi trizio-contrassegnati con phagosomes contenenti granuli di lattice scintillant ha portati alla emissione di luce in una reazione che richiede ATP citosol e basse concentrazioni di Ca(2+). Il complesso nascente era sensibile alle perturbazioni di carbonato alcalino, che indica che gli organelli avevano &quot;agganciato&quot; ma non fuse. Attraverso studi di inibitore e fluorescenza microscopia mostriamo che attracco &egrave; preceduta da un passo di legatura che richiede la calmodulina e la polimerizzazione dell&#39;actina. Nell&#39;actina in corso stato ancorato polimerizzazione e calmodulina non sono pi&ugrave; necessarie. L&#39;attivit&agrave; di tethering/docking &egrave; stato purificato vicino omogeneit&agrave; dal citosol di fegato di ratto. Principali proteine nelle frazioni attive includevano actina, calmodulina e IQGAP2. IQGAPs sono noti per associare la calmodulina e cross-link F-actina, suggerendo una ruolo di coordinamento durante l&#39;attacco di lysosome/Fagosoma di chiave. I risultati attuali supportano la conclusione che le interazioni lisosoma/Fagosoma procede attraverso tappe distinte e forniscono un nuovo approccio utile per ulteriore dissezione sperimentale.

Requisiti differenziale per la polimerizzazione dell&#39;actina, calmodulina e Ca2 + definiscono fasi distinte di targeting lisosoma/Fagosoma.

&#x5F8C;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3068;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3001;&#x8001;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x4F53;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6D88;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x76EE;&#x6A19;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x9023;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x3001;ATP&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F4E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x767A;&#x5149;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306F;&#x3001; &#x26;quot;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x26;quot;&#x304C;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x70AD;&#x9178;&#x5869;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6DF7;&#x4E71;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5148;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x72B6;&#x614B;&#x7D99;&#x7D9A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3082;&#x306F;&#x3084;&#x5FC5;&#x8981;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;/&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x307B;&#x307C;&#x5747;&#x4E00;&#x306B;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x753B;&#x5206;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;IQGAP2&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; IQGAPs&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x6574;&#x5F79;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x7D4C;&#x3066;&#x9032;&#x307F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x89E3;&#x5256;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;Ca2 +&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x8981;&#x4EF6;

&#xB2A6;&#xC740; endocytic organelles&#xC640; phagosomes&#xC758; &#xC735;&#xD569; &#xC138;&#xD3EC; &#xC18C;&#xD654; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;, &#xB178;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC;, apoptotic &#xBCF8;&#xBB38;&#xACFC; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xC870;&#xAC01;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xB300;&#xC0C1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xBA85;&#xB8CC;, &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; stepwise &#xD611;&#xD68C; phagosomes &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC1C;&#xBC1C;. Scintillant &#xB77C;&#xD14D;&#xC2A4; &#xAD6C;&#xC2AC; cytosol, ATP, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE5B; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; phagosomes&#xC640; &#xC0BC;&#xC911; &#xC218;&#xC18C; &#xB77C;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xBD80; &#xD654;. &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; organelles &quot;&#xB3C4;&#xD0B9;&quot; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC735;&#xD569;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xD0C4;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBCF4;&#xAE30; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC911; &#xD569; &#xBC0F; calmodulin&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; tethering &#xB2E8;&#xACC4; &#xC55E;&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C4;&#xD0B9; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911; &#xD569; &#xBC0F; calmodulin&#xB294; &#xD544;&#xC694; &#xC774;&#xC0C1;. &#xB9E4;/&#xB3C4;&#xD0B9; &#xD65C;&#xB3D9; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC950; &#xAC04; cytosol&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xB9D0;&#xB77C;, calmodulin&#xC640; IQGAP2 &#xD3EC;&#xD568;. IQGAPs calmodulin&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xAD50;&#xCC28; F-&#xB9D0;&#xB77C;, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xC911; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC815; &#xD0A4; &#xC81C;&#xC548; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xACB0;&#xACFC; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xACB0;&#xB860; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xC0C1;&#xD638; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xB354; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD574; &#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9D0;&#xB77C; &#xD569;, calmodulin, &#xBC0F; Ca2 + &#xCC28;&#xB3D9; &#xC694;&#xAD6C;&#xC758; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC815;&#xC758;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La fusi&#xF3;n de fagosomas con fines de org&#xE1;nulos endoc&#xED;tica es esencial para la digesti&#xF3;n celular de los microbios pat&#xF3;genos, c&#xE9;lulas senescentes, cuerpos apopt&#xF3;ticos, y fragmentos de la retina segmento externo. Para aclarar a&#xFA;n m&#xE1;s la bioqu&#xED;mica del proceso de focalizaci&#xF3;n, se desarroll&#xF3; un ensayo de proximidad de centelleo para estudiar la asociaci&#xF3;n gradual de los lisosomas y fagosomas in vitro. La incubaci&#xF3;n de los lisosomas con tritio etiquetados con fagosomas que contienen l&#xED;quido de centelleo bolas de l&#xE1;tex llevaron a la emisi&#xF3;n de luz en una reacci&#xF3;n que requiere el citosol, el ATP, y la baja en Ca (2 +) las concentraciones. El complejo naciente era sensible a las perturbaciones por carbonato alcalino, lo que indica que los org&#xE1;nulos hab&#xED;a &#x26;quot;acoplado&#x26;quot; pero no fusionados. A trav&#xE9;s de estudios de inhibidor y microscop&#xED;a de fluorescencia nos muestran que de acoplamiento est&#xE1; precedida por una etapa de inmovilizaci&#xF3;n que requiere la polimerizaci&#xF3;n de actina y calmodulina. En la polimerizaci&#xF3;n de la actina estado acoplado en curso y la calmodulina ya no son necesarios. La actividad inmovilizaci&#xF3;n / acoplamiento se purific&#xF3; hasta la homogeneidad cerca de citosol de h&#xED;gado de rata. Prote&#xED;nas importantes en las fracciones activas incluidas actina, calmodulina y IQGAP2. IQGAPs se sabe que se unen calmodulina y la cruz de enlace F-actina, lo que sugiere un papel clave en la coordinaci&#xF3;n de lisosoma / fagosoma archivo adjunto. Los resultados actuales apoyan la conclusi&#xF3;n de que el lisosoma / fagosoma interacciones proceder a trav&#xE9;s de distintas etapas y ofrecer una nueva aproximaci&#xF3;n &#xFA;til para la disecci&#xF3;n experimental adicional.

Requisitos diferenciales para la polimerizaci&#xF3;n de actina, calmodulina y Ca2 + Definir las distintas etapas de Lisosoma / fagosoma Orientaci&#xF3;n

IgG &#x6297;&#x4F53;&#x5728;&#x62B5;&#x5FA1;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6444;&#x5165;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x6740;&#x706D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8981;&#x95EE;&#x662F;&#x5426;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684; IgG opsonization &#x63D0;&#x9AD8;&#x5230; phagosomes &#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x9488;&#x5BF9;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D88;&#x9664;&#x5BF9;&#x63A5;&#x6536;&#x8FC7;&#x7A0B; IgG &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230;&#x4E73;&#x80F6;&#x73E0;&#x5728; 15-20 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x88AB;&#x706B;&#x7130;&#x541E;&#x6CA1;&#x7684; IgG &#x6D82;&#x5C42;&#x548C;&#x4E0D;&#x5E26;&#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x73E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x9632;&#x6B62; phagosomes &#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x540E;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230; 37 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#xFF0C;phagosomes &#x5305;&#x542B; IgG &#x73E0;&#x6210;&#x719F;&#x5927;&#x5927;&#x5FEB;&#x5230;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6839;&#x636E;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x6807;&#x5FD7;&#x6765;&#x5224;&#x65AD;&#x3002;IgG &#x6548;&#x679C;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7C92;&#x5B50;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;&#x6216;&#x8840;&#x6E05;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x9644;&#x4EF6;&#x4E5F;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4F9D;&#x8D56;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x751F;&#x5316;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5927;&#x5927;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86;&#x53CD;&#x5E94;&#x5305;&#x542B;&#x4ECE;&#x5DF2;&#x516C;&#x5F00;&#x5230; IgG &#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x73E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; IgG &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x80DE;&#x6D46;&#x9488;&#x5BF9;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3002;&#x4E0E;&#x4ECE;&#x4E3B;&#x7684;&#x4EBA;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5F97;&#x5230;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C; U 937 &#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2; (CHO) &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4EBA; IgG &#xFF08;Fcgamma&#xFF09; &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x5F71;&#x54CD;&#x76EE;&#x6807;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x5BF9;&#x63A5;&#x9636;&#x6BB5;&#x5E76;&#x7740;&#x624B;&#x901A;&#x8FC7;&#x9014;&#x5F84;&#x6D89;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C.&#x663E;&#x793A; igG &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x96BE;&#x5F97;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63A7;&#x5236;&#x819C;&#x9488;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x548C;&#x505C;&#x9760;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x6761;&#x6B65;&#x9053;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6297;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; G &#x4FE1;&#x53F7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x5BF9;&#x63A5;&#x3002;

An important role of IgG antibodies in the defense against microbial infections is to promote the ingestion and killing of microbes by phagocytes. Here, we developed in vivo and in vitro approaches to ask whether opsonization of particles with IgG enhances intracellular targeting of lysosomes to phagosomes. To eliminate the effect of IgG on the ingestion process, cells were exposed to latex beads at 15-20 degrees C, which allows engulfment of both IgG-coated and uncoated beads but prevents the fusion of lysosomes with phagosomes. Upon shifting the temperature to 37 degrees C, phagosomes containing IgG beads matured significantly faster into phagolysosomes as judged by colocalization with lysosomal markers. The IgG effect was independent of other particle-associated antigens or serum factors. Lysosome/phagosome attachment was also quantified biochemically with a cytosol-dependent scintillation proximity assay. Interactions were enhanced significantly in reactions containing cytosol from mouse macrophages that had been exposed to IgG-coated beads, indicating that IgG signaling modulates the cytosolic-targeting machinery. Similar results were obtained with cytosol from primary human monocytes, human U-937 histiocytic lymphoma cells and from Chinese hamster ovary (CHO) cells transfected with a human IgG (Fcgamma) receptor. IgG-induced activation is shown to affect the actin-dependent tethering/docking stage of the targeting process and to proceed through a pathway involving protein kinase C. These results provide a rare example of an extracellular signal controlling membrane targeting on the level of tethering and docking. We propose that this pathway contributes to the role of antibodies in the protection against microbial infections.

Immunoglobulin G signaling activates lysosome/phagosome docking.

Un r&#xF4;le important des anticorps IgG dans la d&#xE9;fense contre les infections microbiennes est de promouvoir l&#x26;#39;ingestion et destruction des microbes par les phagocytes. Ici, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; in vivo et in vitro se rapproche de se demander si l&#x26;#39;opsonisation des particules avec IgG am&#xE9;liore le ciblage intracellulaire des lysosomes &#xE0; phagosomes. &#xC0; &#xE9;liminer l&#x26;#39;effet de l&#x26;#39;IgG sur le processus d&#x26;#39;ingestion, les cellules ont &#xE9;t&#xE9; expos&#xE9;s &#xE0; des billes de latex &#xE0; 15-20 &#xB0; C, ce qui permet d&#x26;#39;immersion deux billes IgG-rev&#xEA;tues et non rev&#xEA;tues, mais emp&#xEA;che la fusion de lysosomes avec phagosomes. Lors du d&#xE9;placement de la temp&#xE9;rature &#xE0; 37 &#xB0; C, phagosomes contenant des billes d&#x26;#39;IgG m&#xFB;ri nettement plus rapide en phagolysosomes &#xE0; en juger par colocalisation avec des marqueurs lysosomales. L&#x26;#39;effet IgG &#xE9;tait ind&#xE9;pendant des autres particules associ&#xE9;es &#xE0; des antig&#xE8;nes ou des facteurs s&#xE9;riques. Lysosome / phagosome attachement a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; quantifi&#xE9;e biochimique avec un dosage de cytosol-d&#xE9;pendante scintillation de proximit&#xE9;. Les interactions ont &#xE9;t&#xE9; am&#xE9;lior&#xE9;es de mani&#xE8;re significative dans les r&#xE9;actions contenant cytosol des macrophages de souris qui avaient &#xE9;t&#xE9; expos&#xE9;s &#xE0; des IgG de billes rev&#xEA;tues, indiquant que les IgG de signalisation module la machinerie cytosolique de ciblage. Des r&#xE9;sultats similaires ont &#xE9;t&#xE9; obtenus avec le cytosol &#xE0; partir des monocytes primaires humains, des cellules U-937 lymphomes histiocytaires et de ovariennes de hamster chinois (cellules CHO) transfect&#xE9;es avec une IgG humaine (Fcgamma) du r&#xE9;cepteur. IgG-activation induite est d&#xE9;montr&#xE9; qu&#x26;#39;elle affecte la fonction modem actine-d&#xE9;pendante / &#xE9;tape d&#x26;#39;accostage du processus de ciblage et de proc&#xE9;der par une voie impliquant la prot&#xE9;ine kinase C. Ces r&#xE9;sultats fournissent un rare exemple d&#x26;#39;une membrane par un signal extracellulaire contr&#xF4;ler le ciblage sur le niveau de partage de la connexion et amarrage. Nous proposons que cette voie contribue &#xE0; le r&#xF4;le des anticorps dans la protection contre les infections microbiennes.

Immunoglobuline G Signalisation Active Lysosome / phagosome d&#x26;#39;accueil

Eine wichtige Rolle von IgG-Antik&ouml;rpern bei der Verteidigung gegen mikrobielle Infektionen ist die Einnahme und T&ouml;tung von Mikroben durch Fresszellen zu f&ouml;rdern. Hier haben wir in-vivo und in vitro Ans&auml;tze um zu Fragen, ob Opsonization Teilchen mit IgG erh&ouml;ht die intrazellul&auml;re Ausrichtung der Lysosomen zu Phagosomen entwickelt. Um die Wirkung der IgG auf der Aufnahme-Prozess zu beseitigen, wurden Zellen Latex Perlen bei 15-20 Grad C, ausgesetzt, die erm&ouml;glicht Engulfment IgG-beschichtete und unbeschichtete Perlen aber verhindert, dass die Fusion von Lysosomen mit Phagosomen. Nach Umstellung der Temperatur auf 37 Grad C, Phagosomen mit IgG-Beads deutlich schneller zu gereift Phagolysosomes wie von Kolokalisation mit lysosomalen Markern beurteilt. Der IgG-Effekt war unabh&auml;ngig von anderen Teilchen-assoziierte Antigene oder Serum Faktoren. Lysosom/Phagosom Anlage war auch biochemisch mit einem Zytosol abh&auml;ngigen Szintillation-N&auml;he-Assay quantifiziert. Interaktionen wurden erheblich verbessert, in Reaktionen mit Zytosol von Maus-Makrophagen, die ausgesetzt waren, zu IgG-beschichtete Perlen, darauf hinweist, dass IgG signalisieren die Zytosolische Zielversionen Maschinerie moduliert. &Auml;hnliche Ergebnisse wurden erzielt mit Zytosol von prim&auml;ren menschlichen Monozyten, menschliche U-937-Histiozyt&auml;re-Lymphom-Zellen und aus chinesischer Hamster Eierstock transfected Zellen (CHO) mit einem menschlichen IgG (Fcgamma)-Rezeptor. IgG-induzierte Aktivierung ist die Aktin-abh&auml;ngige Anbindehaltung/Andocken Phase gezielt zu beeinflussen und durch einen Weg mit Proteinkinase C. Vorgehen dargestellt. Diese Ergebnisse liefern ein seltenes Beispiel f&uuml;r eine extrazellul&auml;re Signal Steuern Membran Zielgruppenadressierung auf der Ebene der Anbindehaltung und Andocken. Wir schlagen vor, dass dieser Weg f&uuml;r die Rolle der Antik&ouml;rper in den Schutz vor mikrobiellen Infektionen beitr&auml;gt.

Immunglobulin G Signalisierung aktiviert Lysosom/Phagosom andocken.

Un ruolo importante degli anticorpi IgG nella difesa contro le infezioni microbiche &egrave; quello di promuovere l&#39;ingestione e l&#39;uccisione di microbi dai fagociti. Qui, abbiamo sviluppato approcci in vivo e in vitro per chiedere se opsonizzazione delle particelle con IgG migliora intracellulare di targeting dei lisosomi a phagosomes. Per eliminare l&#39;effetto delle IgG sul processo di ingestione, le cellule sono stati esposti a granuli di lattice a 15-20 gradi C, che permette di engulfment di perline rivestite di IgG e non patinate, ma impedisce la fusione dei lisosomi con phagosomes. Su spostando la temperatura a 37 gradi C, phagosomes contenente perline IgG maturata significativamente pi&ugrave; veloce in phagolysosomes come giudicato dalla presenza con marcatori lisosomiale. L&#39;effetto di IgG era indipendente da altri antigeni associati a particelle o i fattori del siero. Attaccamento lisosoma/Fagosoma &egrave; stato quantificato anche biochimicamente con un dosaggio di prossimit&agrave; di scintillazione citosol-dipendente. Le interazioni sono state rafforzate significativamente nelle reazioni contenenti cytosol da macrofagi di topo che erano stati esposti a perline rivestite di IgG, che indica che IgG segnalazione modula il macchinario citosolico di targeting. Risultati simili sono stati ottenuti con citosol da monociti umani primari, le cellule umane di linfoma istiocitario U-937 e dall&#39;ovaio di criceto cinese cellule (CHO) transfected con un recettore umano IgG (Fcgamma). Attivazione indotta da igG &egrave; mostrato di influenzare l&#39;actina-dipendente tethering/docking fase del processo di targeting e di procedere attraverso un percorso che coinvolge la proteina chinasi C. Questi risultati forniscono un esempio raro di un segnale extracellulare controllando membrana targeting sul livello di tethering e docking. Proponiamo che questo percorso contribuisce al ruolo di anticorpi nella protezione contro le infezioni microbiche.

Immunoglobulina G segnalazione attiva lisosoma/Fagosoma docking.

&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x9632;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IgG&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x6442;&#x53D6;&#x3068;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IgG&#x3068;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x30AA;&#x30D7;&#x30BD;&#x30CB;&#x30F3;&#x5316;&#x304C;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x805E;&#x3044;&#x3066;in vivo&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vitro&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6442;&#x53D6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;IgG&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;IgG-&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;15&#x304B;&#x3089;20&#x5EA6;C&#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5224;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x308B;IgG&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;37&#x2103;&#x306B;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3092;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x901F;&#x304F;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002; IgG&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8840;&#x6E05;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;IgG&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;IgG&#x6297;&#x4F53;&#x88AB;&#x8986;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x200B;&#x200B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x5358;&#x7403;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;U-937&#x7D44;&#x7E54;&#x7403;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;IgG&#xFF08;Fcgamma&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#xFF08;CHO&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; IgG&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x76EE;&#x6A19;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;/&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x306E;&#x7A00;&#x306A;&#x4F8B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7D9A;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9632;&#x5FA1;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;G&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; IgG &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC12D;&#xCDE8;&#xC640; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0B4;&#xD574;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; in vivo &#xCCB4; &#xC678; &#xC811;&#xADFC; &#xC5EC;&#xBD80; opsonization Igg&#xC640; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; phagosomes &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC12D;&#xCDE8; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; Igg&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC140; phagosomes&#xC640; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xC735;&#xD569;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; engulfment IgG &#xCF54;&#xD305; &#xBC0F; &#xBE44; &#xCF54;&#xD305; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; &#xC218;&#xB294; 15-20&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xB77C;&#xD14D;&#xC2A4; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB410;&#xB2E4;. 37 &#xC12D;&#xC528; &#xC628;&#xB3C4; &#xC628;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; IgG &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC774; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; phagosomes &#xC131;&#xC219; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBE68;&#xB9AC; phagolysosomes&#xB85C; lysosomal &#xD45C;&#xC2DD;&#xC774; &#xC788;&#xB294; colocalization&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD310;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C;. IgG &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC785;&#xC790;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB610;&#xB294; &#xD608; &#xCCAD; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xB610;&#xD55C; cytosol &#xC885;&#xC18D; &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC815;&#xB7C9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; cytosol IgG &#xCF54;&#xD305; &#xAD6C;&#xC2AC;, &#xADF8; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; cytosolic &#xAE30;&#xACC4; &#xBCC0;&#xC870; IgG &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB358; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. Cytosol &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; monocytes&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; U 937 histiocytic &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; (&#xC870;) &#xC140; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; IgG (Fcgamma) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xD398;. IgG &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC885;&#xC18D; tethering/&#xB3C4;&#xD0B9; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB300;&#xC0C1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; c.&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9C9; tethering &#xBC0F; &#xB3C4;&#xD0B9;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xB4DC;&#xBB38; &#xC608;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; G &#xC2E0;&#xD638; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un papel importante de anticuerpos IgG en la defensa contra las infecciones microbianas es promover la ingesti&#xF3;n y la muerte de los microbios por los fagocitos. Aqu&#xED;, hemos desarrollado in vivo e in vitro se aproxima a preguntar si opsonizaci&#xF3;n de part&#xED;culas con IgG aumenta orientaci&#xF3;n intracelular de los lisosomas a fagosomas. Para eliminar el efecto de IgG en el proceso de la ingesti&#xF3;n, las c&#xE9;lulas fueron expuestas a perlas de l&#xE1;tex a 15-20 grados C, que permite inmersi&#xF3;n de ambas perlas de IgG-revestidos y no revestidos, pero impide la fusi&#xF3;n de lisosomas con fagosomas. A cambio de la temperatura a 37 &#xBA; C, fagosomas que contienen perlas de IgG madurado significativamente m&#xE1;s r&#xE1;pido en fagolisosomas a juzgar por la colocalizaci&#xF3;n con marcadores lisosomales. El efecto de IgG fue independiente de otras part&#xED;culas ant&#xED;genos asociados o factores del suero. Lisosoma / fagosoma apego Tambi&#xE9;n se cuantific&#xF3; bioqu&#xED;micamente con un ensayo de centelleo citosol dependiente de la proximidad. Las interacciones se han mejorado de manera significativa en las reacciones que contienen citoplasma de los macr&#xF3;fagos de ratones que hab&#xED;an sido expuestos a la IgG revestida de piedras, lo que indica que la IgG se&#xF1;alizaci&#xF3;n modula la maquinaria citos&#xF3;lica de metas. Se obtuvieron resultados similares con citosol de monocitos humanos primarios, humanos c&#xE9;lulas U-937 y linfoma histioc&#xED;tico de ovario de h&#xE1;mster chino (CHO) transfectadas con un IgG humana (Fcgamma) del receptor. IgG inducida por la activaci&#xF3;n est&#xE1; demostrado que afectan a la inmovilizaci&#xF3;n de actina dependiente / etapa de acoplamiento del proceso de selecci&#xF3;n y proceder a trav&#xE9;s de una v&#xED;a que implica la prote&#xED;na cinasa C. Estos resultados proporcionan un raro ejemplo de una membrana de se&#xF1;ales extracelulares controlar la orientaci&#xF3;n en el nivel de anclaje y acoplamiento. Se propone que esta v&#xED;a contribuye a la funci&#xF3;n de los anticuerpos en la protecci&#xF3;n contra las infecciones microbianas.

Inmunoglobulina G de se&#xF1;alizaci&#xF3;n activa lisosoma / fagosoma de acoplamiento

&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x88AB;&#x541E;&#x6CA1;&#xFF0C;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x6740;&#x6B7B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6D88;&#x5316;&#x5165;&#x4FB5;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x4E0E;&#x4F53;&#x6DB2;&#x7684;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5408;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; G (IgG) &#x6297;&#x4F53;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x541E;&#x566C;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; (Fcgamma) &#x53D7;&#x4F53;&#x3001; &#x7C92;&#x5B50;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x3001; &#x4EE3;&#x7684;&#x6740;&#x83CC;&#x5242;&#x6C27;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5E95;&#x7269;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x5230; phagosomes &#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7684;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x5F00;&#x53D1;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x9776;&#x5411; phagosomes &#x548C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#x7684; IgG &#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5305;&#x62EC;&#x4F7F;&#x7528;&#x9694;&#x79BB; phagosomes &#x8F7D;&#x6709;&#x95EA;&#x70C1;&#x4E73;&#x80F6;&#x73E0;&#x548C;&#x6C1A;&#x6807;&#x8BB0;&#x8FDB;&#x884C;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x3002;&#x95EA;&#x70C1;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x548C; phagosomes &#x6765;&#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x89E6;&#x65F6;&#xFF0C;&#x624D;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x548C;&#x9700;&#x8981;&#x8865;&#x5145;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E0E;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2; &#xFF1B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4ECE; IgG &#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6DFB;&#x52A0;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x6B64;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x7684;&#x89C4;&#x4F8B;&#x548C;&#x5BF9;&#x63A5;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x548C; phagosome &#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;

&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x5230; phagosome &#x9488;&#x5BF9;&#x7814;&#x7A76;&#x4E00;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Phagocytes, such as macrophages, neutrophils, and dendritic cells, play important roles in the innate immune system through their ability to engulf, kill, and digest invading microbes. In cooperation with the humoral adaptive immune system, coating of substrates with immunoglobulin G (IgG) antibodies enhances several aspects of phagocytosis, including the recognition of substrates by cell surface IgG (Fcgamma) receptors, particle internalization, generation of microbicidal oxygen species, and targeting of lysosomes to phagosomes. We describe a cell-free scintillation proximity assay developed to study the mechanisms of lysosome targeting to phagosomes and the regulation of this process by IgG. The approach involves the use of isolated phagosomes containing scintillant latex beads and lysosomes labeled with a tritiated marker. Scintillation results only when lysosomes and phagosomes come into immediate contact and requires supplementation of reactions with adenosine triphosphate and cytosol; addition of cytosol from IgG-conditioned cells enhances this signal. The method is useful for investigating the biochemistry and regulation of the early tethering and docking steps of lysosome and phagosome interactions.

A cell-free scintillation proximity assay for studies on lysosome-to-phagosome targeting.

Les phagocytes, telles que les macrophages, les neutrophiles et les cellules dendritiques, jouent un r&#xF4;le important dans le syst&#xE8;me immunitaire inn&#xE9; par leur capacit&#xE9; &#xE0; engloutir, de tuer et dig&#xE9;rer microbes envahisseurs. En coop&#xE9;ration avec le syst&#xE8;me immunitaire humorale adaptative, rev&#xEA;tement de substrats avec l&#x26;#39;immunoglobuline G (IgG) am&#xE9;liore plusieurs aspects de la phagocytose, y compris la reconnaissance des substrats par la surface des cellules IgG (Fcgamma) r&#xE9;cepteurs, internalisation des particules, la production d&#x26;#39;esp&#xE8;ces oxyg&#xE9;n&#xE9;es microbicides, et le ciblage des lysosomes &#xE0; phagosomes. Nous d&#xE9;crivons un essai acellulaire scintillation de proximit&#xE9; mis au point pour &#xE9;tudier les m&#xE9;canismes de ciblage pour lysosome phagosomes et la r&#xE9;gulation de ce processus par les IgG. L&#x26;#39;approche implique l&#x26;#39;utilisation de phagosomes isol&#xE9;s contenant des billes de latex scintillantes et des lysosomes marqu&#xE9;s avec un marqueur triti&#xE9;. R&#xE9;sultats &#xE0; scintillation uniquement lorsque les lysosomes et phagosomes entrer en contact imm&#xE9;diat et n&#xE9;cessite une suppl&#xE9;mentation de r&#xE9;actions avec l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine triphosphate et le cytosol; plus de cytosol de cellules IgG climatis&#xE9;es am&#xE9;liore ce signal. La m&#xE9;thode est utile pour &#xE9;tudier la biochimie et la r&#xE9;glementation de l&#x26;#39;attache rapide et &#xE0; l&#x26;#39;amarrage des mesures d&#x26;#39;interactions lysosome et phagosome.

Un test sur des cellules sans scintillation de proximit&#xE9; pour les &#xE9;tudes sur Lysosome-&#xE0;-phagosome ciblage

Fresszellen, Makrophagen, neutrophile und Makrophagen, spielen wichtige Rollen des angeborenen Immunsystems durch ihre F&auml;higkeit, zu verschlingen, wie t&ouml;ten, und eindringende Mikroben zu verdauen. In Zusammenarbeit mit dem humorale adaptive Immunsystem verbessert die Beschichtung von Substraten mit Immunglobulin G (IgG) Antik&ouml;rper verschiedene Aspekte der Phagozytose, einschlie&szlig;lich der Anerkennung von Substraten durch Zellrezeptoren Oberfl&auml;che IgG (Fcgamma), Partikel Internalisierung, Erzeugung von Mikrobizide Sauerstoffsorte und Ausrichtung der Lysosomen zu Phagosomen. Wir beschreiben ein zellfreier Szintillation-N&auml;he-Assay entwickelt, um die Mechanismen der Lysosom-targeting Phagosomen und die Verordnung dieses Prozesses zu studieren durch IgG. Die Methode umfasst die Verwendung von isolierten Phagosomen mit Scintillant Latex Perlen und Lysosomen mit tritiiertem Marker beschriftet. Szintillation Ergebnisse nur dann, wenn Lysosomen und Phagosomen in unmittelbare Ber&uuml;hrung kommen und erfordert eine Supplementierung von Reaktionen mit Adenosintriphosphat und Zytosol; Zusatz von Zytosol von IgG konditionierten Zellen verbessert dieses Signal. Die Methode eignet sich f&uuml;r die Biochemie und die Verordnung &uuml;ber die fr&uuml;hen Anbindehaltung untersuchen und Andocken Schritte Lysosom und Phagosom Interaktionen.

Ein zellfreier Szintillation-N&auml;he-Assay f&uuml;r Studien &uuml;ber Lysosom-Phagosom-Ausrichtung.

Fagociti, come macrofagi, neutrofili e cellule dendritiche, giocano un ruolo importante nel sistema immunitario innato attraverso la loro capacit&agrave; di fagocitare, uccidono e digeriscono i microbi invasori. In collaborazione con il sistema immunitario adattivo umorale, rivestimento di substrati con gli anticorpi di immunoglobulina G (IgG) migliora diversi aspetti della fagocitosi, compreso il riconoscimento di substrati di superfici recettori IgG (Fcgamma) cella, interiorizzazione delle particelle, generazione di specie dell&#39;ossigeno microbicida e targeting dei lisosomi a phagosomes. Descriviamo un dosaggio di prossimit&agrave; senza cellula scintillazione sviluppato per studiare i meccanismi di lysosome targeting per phagosomes e la regolazione di questo processo di IgG. L&#39;approccio prevede l&#39;utilizzo di phagosomes isolati contenenti granuli di lattice scintillant e lisosomi etichettati con un marcatore di trizio. Risultati solo quando entrano in contatto immediato lisosomi e phagosomes di scintillazione e richiede un&#39;integrazione delle reazioni con trifosfato di adenosina e citosol; aggiunta del citosol da cellule IgG-condizionato migliora questo segnale. Il metodo &egrave; utile per indagare la biochimica e il regolamento dei primi tethering e docking passi delle interazioni lisosoma e Fagosoma.

Un dosaggio di prossimit&agrave; di scintillazione cell-free per gli studi sul targeting lisosoma-Fagosoma.

&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3001;&#x6BBA;&#x3057;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x3092;&#x6D88;&#x5316;&#x3002;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x3068;&#x5354;&#x529B;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;G&#xFF08;IgG&#xFF09;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;IgG&#xFF08;Fcgamma&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x57FA;&#x8CEA;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3001;&#x6BBA;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8CAA;&#x98DF;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;IgG&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x6A19;&#x7684;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x5316;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3068;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x5373;&#x6642;&#x306B;&#x63A5;&#x89E6;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x88DC;&#x5145;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IgG&#x6297;&#x4F53;&#x30A8;&#x30A2;&#x30B3;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;

&#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;, &#xBC0F; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC544;&#xB9C8;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xAC19;&#xC740; &#xC8FD; &#xC77C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCE68;&#xC785; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xC18C;&#xD654;. Humoral &#xC801;&#xC751;&#xC131; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC640; &#xD611;&#xB825;, &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; G (IgG) &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xCF54;&#xD305;&#xC758; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;, &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; IgG (Fcgamma) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, &#xC785;&#xC790; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;, microbicidal &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC778;&#xC815;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; phagosomes &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IgG phagosomes &#xBC0F;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD55C; &#xC140; &#xD504;&#xB9AC; &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Scintillant &#xB77C;&#xD14D;&#xC2A4; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xACFC; tritiated &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; phagosomes&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC811;&#xADFC;. &#xC12C;&#xAD11; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xACFC; phagosomes &#xC989;&#xC2DC; &#xC811;&#xCD09;&#xC73C;&#xB85C; &#xC62C; &#xB54C;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xBA70; cytosol; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0;&#xACFC; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xBCF4;&#xC644; cytosol IgG &#xC870;&#xAC74; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00;&#xC774; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC27;&#xC904;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC870;&#xC0AC;&#xC640; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xACFC; phagosome &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;-phagosome &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC12C;&#xAD11; &#xC140; &#xBB34;&#xB8CC; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;

Los fagocitos, como los macr&#xF3;fagos, neutr&#xF3;filos y c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas, desempe&#xF1;an un papel importante en el sistema inmune innato a trav&#xE9;s de su capacidad para hundir, matar y digerir los microbios invasores. En cooperaci&#xF3;n con la humoral del sistema inmune adaptativo, revestimiento de sustratos con inmunoglobulina G (IgG) mejora varios aspectos de la fagocitosis, incluido el reconocimiento de los sustratos de la superficie celular (IgG Fcgamma), los receptores, la internalizaci&#xF3;n de las part&#xED;culas, la generaci&#xF3;n de especies de ox&#xED;geno microbicidas, y la orientaci&#xF3;n de los lisosomas a los fagosomas. Se describe un ensayo libre de c&#xE9;lulas de centelleo de proximidad desarrollado para estudiar los mecanismos de focalizaci&#xF3;n de los lisosomas fagosomas y la regulaci&#xF3;n de este proceso por IgG. El enfoque implica el uso de fagosomas aislados que contienen perlas de centelleo de l&#xE1;tex y lisosomas marcadas con un marcador tritiada. Resultados de centelleo s&#xF3;lo cuando los lisosomas y fagosomas entrar en contacto inmediato y requiere suplementaci&#xF3;n de las reacciones con el trifosfato de adenosina y el citosol, adem&#xE1;s de citosol de las c&#xE9;lulas IgG acondicionado aumenta la se&#xF1;al. El m&#xE9;todo es &#xFA;til para la investigaci&#xF3;n de la bioqu&#xED;mica y la regulaci&#xF3;n de la inmovilizaci&#xF3;n temprana y medidas de acoplamiento de las interacciones lisosoma y el fagosoma.

Una c&#xE9;lula libre de centelleo ensayo de proximidad de Estudios sobre Lisosoma a fagosoma Orientaci&#xF3;n

&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3001; &#x8870;&#x8001;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x51CB;&#x4EA1;&#x5C0F;&#x4F53;&#x548C;&#x8870;&#x8001;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6750;&#x6599;&#x662F;&#x4E3B;&#x673A;&#x9632;&#x5FA1;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7A33;&#x6001;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x63CF;&#x8FF0;&#x751F;&#x6D3B;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7C92;&#x5B50;&#x88AB;&#x706B;&#x7130;&#x541E;&#x6CA1;&#x548C;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x9488;&#x5BF9;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x6216;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6807;&#x6709;&#x6C1A;&#x8840;&#x8102;&#x3001; &#x540E;&#x8DDF;&#x95EA;&#x70C1;&#x5FAE;&#x7403;&#x7684;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x6C1A; &beta; &#x7C92;&#x5B50;&#x3001; &#x51E0;&#x4F55;&#x56E0;&#x7D20;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5BF9;&#x819C;&#x8102;&#x7684;&#x5206;&#x5A29;&#x77ED;&#x8303;&#x56F4;&#xFF0C;&#x95EA;&#x70C1;&#x53EA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x53D1;&#x793A;&#x8E2A;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x7ACB;&#x5373;&#x90BB;&#x4E8C;&#x5230;&#x95EA;&#x70C1;&#x3002;&#x5F53;&#x8840;&#x6D46; membrane.is &#x6807;&#x6709; [H (3)] &#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5236;&#x4F5C;&#x5173;&#x4E8E;&#x73E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x63A5;&#x89E6;&#x548C;&#x88AB;&#x706B;&#x7130;&#x541E;&#x6CA1;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x8FBE;&#x5230;&#x7A33;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5728; 45 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x3002;&#x5F53;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6807;&#x6709; nonhydrolyzable [H (3)] &#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6CB9;&#x57FA;&#x919A;&#x65F6;&#xFF0C;&#x95EA;&#x70C1;&#x9700;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x9644;&#x4EF6;&#x6216;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x4EC5;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x65F6;&#x540E;&#x8FBE;&#x5230;&#x7A33;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F88;&#x6709;&#x7528;&#x68C0;&#x67E5;&#x5BF9;&#x7C92;&#x5B50;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;/phagosome &#x9488;&#x5BF9;&#x836F;&#x7406;&#x548C;&#x9057;&#x4F20;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95EA;&#x70C1;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7814;&#x7A76;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Phagocytosis of microorganisms, senescent cells, apoptotic bodies, and effete tissue material is an important process in host defense and tissue homeostasis. A method is described to measure, in living macrophages, the kinetics of particle engulfment and lysosome/phagosome targeting. Plasma membranes or lysosomes are labeled with tritiated lipids, followed by exposure of cells to scintillant microbeads. Because of the short range of tritium beta-particles, geometric factors, and the confinement of lipids to membranes, scintillation can only be elicited by tracer molecules in membranes immediately vicinal to the scintillant. When the plasma membrane.is labeled with [(3)H]cholesterol, a signal is produced on bead-cell contact and engulfment and then reaches steady state within 45 min. When lysosomes are labeled with nonhydrolyzable [(3)H]cholesterol oleyl ether, scintillation requires intracellular lysosome/phagosome attachment or fusion, and steady state is attained only after several hours. The live-cell scintillation proximity approach is useful for examining the effects of pharmacological and genetic manipulations on particle uptake and on lysosome/phagosome targeting.

Studying phagocytosis by live-cell scintillation proximity assay.

La phagocytose des micro-organismes, les cellules s&#xE9;nescentes, corps apoptotiques, et du mat&#xE9;riel tissulaire d&#xE9;cadent est un processus important dans la d&#xE9;fense d&#x26;#39;accueil et l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie tissulaire. Une m&#xE9;thode est d&#xE9;crite pour mesurer, dans les macrophages vivants, de la cin&#xE9;tique de l&#x26;#39;engloutissement des particules et lysosomes / phagosome ciblage. Membranes plasmiques ou les lysosomes sont &#xE9;tiquet&#xE9;s avec des lipides triti&#xE9;s, suivie par l&#x26;#39;exposition de cellules &#xE0; des microbilles scintillantes. En raison de la courte port&#xE9;e de tritium b&#xEA;ta-particules, les facteurs g&#xE9;om&#xE9;triques, et le confinement des lipides des membranes, la scintillation ne peut &#xEA;tre obtenue par des mol&#xE9;cules traceurs dans les membranes imm&#xE9;diatement vicinaux &#xE0; l&#x26;#39;scintillant. Lorsque le plasma membrane.is marqu&#xE9; avec le cholest&#xE9;rol [(3) H], un signal est produit sur bourrelet cellules de contact et immersion et atteint ensuite l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre dans les 45 min. Lorsque les lysosomes sont &#xE9;tiquet&#xE9;s avec hydrolys&#xE9; [(3) H] oleyl&#xE9;ther cholest&#xE9;rol, la scintillation exige intracellulaire lysosome / phagosome pi&#xE8;ce jointe ou de fusion, et l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre n&#x26;#39;est atteint qu&#x26;#39;apr&#xE8;s plusieurs heures. L&#x26;#39;approche des cellules vivantes scintillation de proximit&#xE9; est utile pour examiner les effets de manipulations pharmacologiques et g&#xE9;n&#xE9;tiques sur l&#x26;#39;absorption des particules et sur le ciblage lysosome / phagosome.

Etudier la phagocytose par les cellules vivantes Scintillation Proximity Assay

Phagozytose von Mikroorganismen, alternde Zellen, Apoptotic K&ouml;rper und schlaffer Gewebematerial ist ein wichtiger Prozess in Host-Verteidigungs- und Gewebe-Hom&ouml;ostase. Eine Methode wird beschrieben, in lebenden Makrophagen, die Kinetik der Partikel Engulfment und Lysosom/Phagosom targeting zu messen. Plasma Membrane oder Lysosomen werden mit tritiiertem Lipide, gefolgt von Aussetzung Zellen, Scintillant Microbeads beschriftet. Wegen der kurzen Tritium Beta-Teilchen, geometrische Faktoren und die Beengtheit der Lipide, Membranen kann Szintillation nur von Tracer-Molek&uuml;le in Membranen sofort zu den Scintillant vicinal hervorgerufen werden. Wenn der Plasma-membrane.is mit [(3) H] Cholesterin bezeichnet, wird ein Signal auf Perlen-Zell-Kontakt und Engulfment und Steady-State innerhalb 45 min erreicht. Wenn Lysosomen mit Nonhydrolyzable [(3) H] Cholesterin Oleyl &Auml;ther beschriftet sind, Szintillation erfordert intrazellul&auml;r Lysosom/Phagosom Anlage oder Fusion und Steady-State wird erst nach mehreren Stunden erreicht. Der Leben-Zelle Szintillation N&auml;he Ansatz eignet sich f&uuml;r die Pr&uuml;fung der Auswirkungen der pharmakologischen und genetische Manipulationen auf Partikel Aufnahme und auf Lysosom/Phagosom Zielgruppenadressierung.

Phagozytose durch Leben-Zelle Szintillation N&auml;he Probe zu studieren.

Fagocitosi dei microrganismi, cellule senescenti, enti apoptotic e materiale tessuto logoro sono un processo importante nell&#39;omeostasi del tessuto e la difesa ospite. Un metodo &egrave; descritto su misura, in macrofagi vivente, la cinetica di engulfment della particella e targeting lisosoma/Fagosoma. Plasma membrane o lisosomi sono etichettati con i lipidi di trizio, seguite dall&#39;esposizione delle cellule a microsfere scintillant. A causa della breve gamma di trizio beta-particelle, fattori geometrici e il confinamento dei lipidi delle membrane, scintillazione pu&ograve; essere suscitato solo da molecole di tracciante in membrane immediatamente vicinali per il scintillant. Quando il plasma membrane.is etichettato con colesterolo [H (3)], un segnale &egrave; prodotto il engulfment e contatto tallone-cella e poi raggiunge steady state entro 45 min. Quando i lisosomi sono etichettati con etere di nonhydrolyzable [3 H] colesterolo oleico, scintillazione richiede intracellulare lisosoma/Fagosoma allegato o fusione, e dello stato stazionario &egrave; raggiunto solo dopo diverse ore. L&#39;approccio di prossimit&agrave; live-cella scintillazione &egrave; utile per esaminare gli effetti delle manipolazioni genetiche e farmacologiche sulla captazione delle particelle e sul targeting lisosoma/Fagosoma.

Studiando la fagocitosi mediante saggio di prossimit&agrave; di scintillazione live-cella.

&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3001;&#x8001;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x4F53;&#x3068;&#x3001;&#x3081;&#x3081;&#x3057;&#x3044;&#x7D44;&#x7E54;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x306F;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x9632;&#x5FA1;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3068;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A19;&#x7684;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x3001;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3084;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3078;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x66DD;&#x9732;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x8102;&#x8CEA;&#x304C;&#x4ED8;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3081;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x3B2;-&#x7C92;&#x5B50;&#x3001;&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306F;&#x3001;[3 H]&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;membrane.is&#x6642;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3067;&#x88FD;&#x9020;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;45&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;[3 H]&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30A4;&#x30EB;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x6570;&#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x3068;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A19;&#x7684;&#x306B;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8FD1;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;

&#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;, &#xC138;&#xD3EC; &#xB178;&#xD654;, apoptotic &#xBAB8;&#xACFC; &#xC57D; &#xCCB4; &#xC870;&#xC9C1; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC640; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACFC;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xB300;&#xC0C1; &#xC785;&#xC790; engulfment&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xB610;&#xB294; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC140;&#xC758; &#xB178;&#xCD9C; scintillant microbeads tritiated &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B8; &#xB9AC;&#xD2AC; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC785;&#xC790; &#xD615;&#xC0C1; &#xC694;&#xC778;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAC10; &#xAE08; &#xC9E7;&#xC740; &#xBC94;&#xC704; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xCD94;&#xC801; &#xBD84;&#xC790;&#xB294; scintillant&#xC5D0; &#xC989;&#xC2DC; &#xADFC;&#xC811;&#xC5B4; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC12C;&#xAD11;&#xC744;&#xB9CC; elicited &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; membrane.is [(3) H] &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xACFC; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC2E0;&#xD638; &#xBE44;&#xB4DC; &#xC140; &#xC811;&#xCD09;&#xACFC; engulfment&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418; &#xACE0; 45 &#xBD84; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC;. Nonhydrolyzable [(3) H] &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; oleyl &#xC5D0;&#xD14C;&#xB974; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC12C;&#xAD11; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xB610;&#xB294; &#xD4E8;&#xC804;, &#xD544;&#xC694; &#xBC0F; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBA87; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC785;&#xC790; &#xAE00;&#xADC0;&#xC640; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;/phagosome &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC12C;&#xAD11; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

La fagocitosis de microorganismos, c&#xE9;lulas senescentes, cuerpos apopt&#xF3;ticos, y material de tejido est&#xE9;ril es un proceso importante en la defensa del hu&#xE9;sped y la homeostasis del tejido. Se describe un m&#xE9;todo para medir, en los macr&#xF3;fagos de vida, la cin&#xE9;tica de las part&#xED;culas y la inmersi&#xF3;n en la orientaci&#xF3;n lisosoma / fagosoma. Las membranas plasm&#xE1;ticas o lisosomas est&#xE1;n etiquetados con los l&#xED;pidos tritiados, seguido por la exposici&#xF3;n de las c&#xE9;lulas a microperlas centelleo. Debido a la corta distancia de tritio part&#xED;culas beta, factores geom&#xE9;tricos, y el confinamiento de los l&#xED;pidos en las membranas, el centelleo s&#xF3;lo puede ser provocada por las mol&#xE9;culas del trazador en las membranas de inmediato vecinales con el centelleo. Cuando el plasma membrane.is marcado con colesterol [(3) H], se produce una se&#xF1;al en cord&#xF3;n de c&#xE9;lulas de contacto y atrapamiento y luego alcanza el estado estacionario dentro de 45 minutos. Cuando los lisosomas se etiquetan con no hidrolizable [H (3)] oleil &#xE9;ter de colesterol, de centelleo requiere lisosoma intracelular / fagosoma uni&#xF3;n o fusi&#xF3;n, y el estado de equilibrio s&#xF3;lo se alcanza despu&#xE9;s de varias horas. El enfoque de centelleo en vivo de c&#xE9;lulas de proximidad es &#xFA;til para examinar los efectos de las manipulaciones farmacol&#xF3;gicas y gen&#xE9;ticas en la captaci&#xF3;n de part&#xED;culas y en la orientaci&#xF3;n lisosoma / fagosoma.

El estudio de fagocitosis por c&#xE9;lulas vivas, ensayo de proximidad de centelleo

&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4EE3;&#x8C22;&#x662F;&#x7CBE;&#x5FC3;&#x7B56;&#x5212;&#x7684;&#x4E00;&#x5BB6;&#x53EB;&#x753E;&#x9187;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (&#x56FA;&#x9187;&#xFF09; &#x63A7;&#x5236;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x3001; &#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x548C;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x56FA;&#x9187;&#x662F;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8C03;&#x63A7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7A33;&#x6001;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x591A;&#x4E2A;&#x73A9;&#x5BB6;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5DEE;&#x8DDD;&#x4ECD;&#x7136;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7406;&#x89E3;&#x56FA;&#x9187;&#x5982;&#x4F55;&#x534F;&#x8C03;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x751F;&#x7406;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

&#x65B0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x56FA;&#x9187;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Lipid metabolism in mammals is orchestrated by a family of transcription factors called sterol regulatory element-binding proteins (SREBPs) that control the expression of genes required for the uptake and synthesis of cholesterol, fatty acids, and triglycerides. SREBPs are thus essential for insulin-induced lipogenesis and for cellular membrane homeostasis and biogenesis. Although multiple players have been identified that control the expression and activation of SREBPs, gaps remain in our understanding of how SREBPs are coordinated with other physiological pathways.

Identification of novel genes and pathways regulating SREBP transcriptional activity.

Le m&#xE9;tabolisme des lipides chez les mammif&#xE8;res est orchestr&#xE9;e par une famille de facteurs de transcription appel&#xE9; st&#xE9;rols r&#xE9;glementaires &#xE9;l&#xE9;ment prot&#xE9;ines de liaison (SREBPs) qui contr&#xF4;lent l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes n&#xE9;cessaires &#xE0; l&#x26;#39;absorption et la synth&#xE8;se du cholest&#xE9;rol, des acides gras et des triglyc&#xE9;rides. SREBPs sont donc indispensables pour la lipog&#xE9;n&#xE8;se induite par l&#x26;#39;insuline et l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie membrane cellulaire et la biogen&#xE8;se. Bien que plusieurs joueurs ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s qui contr&#xF4;lent l&#x26;#39;expression et l&#x26;#39;activation de SREBPs, des lacunes subsistent dans notre compr&#xE9;hension de la fa&#xE7;on dont SREBPs sont coordonn&#xE9;s avec d&#x26;#39;autres voies physiologiques.

Identification de nouveaux g&#xE8;nes et voies de r&#xE9;gulation transcriptionnelle de SREBP activit&#xE9;

Lipidstoffwechsel bei S&auml;ugetieren ist eine Familie von Transkriptionsfaktoren genannt Sterin regulatorischen Element-bindende Proteine (SREBPs), die Steuern, die Expression von Genen, die f&uuml;r die Aufnahme und die Synthese von Cholesterin, Fetts&auml;uren und Triglyceride erforderliche arrangierte. SREBPs sind daher unerl&auml;sslich f&uuml;r Insulin-induzierte Lipogenese und zellul&auml;ren Membran-Hom&ouml;ostase und Biogenese. Obwohl mehrere Spieler identifiziert wurden, die Ausdruck und Aktivierung von SREBPs steuern, bleiben L&uuml;cken in unserem Verst&auml;ndnis der wie SREBPs mit anderen physiologischen Wege koordiniert werden.

Identifizierung der neuartige Gene und Wege, die Regulierung SREBP transkriptionelle Aktivit&auml;t.

Metabolismo dei lipidi nei mammiferi &egrave; orchestrato da una famiglia di fattori di trascrizione chiamato sterolo regulatory element-binding proteins (SREBPs) che controllano l&#39;espressione dei geni necessari per l&#39;assorbimento e la sintesi del colesterolo, acidi grassi e trigliceridi. SREBPs sono quindi essenziali per lipogenesi insulino-indotta e biogenesi e omeostasi della membrana cellulare. Anche se pi&ugrave; giocatori sono stati identificati che controllano l&#39;espressione e l&#39;attivazione di SREBPs, permangono carenze nella nostra comprensione di come SREBPs sono coordinati con altri percorsi fisiologici.

Identificazione di nuovi geni e percorsi che regolano attivit&agrave; trascrizionale SREBP.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3001;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#x3092;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;SREBPs&#xFF09;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SREBPs&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x751F;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3068;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30E4;&#x30FC;&#x304C;SREBPs&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x304C;SREBPs&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SREBP&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xD3EC;&#xC720; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; sterol &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (SREBPs) &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xBC0F; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;, &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC911;&#xC131; &#xC9C0;&#xBC29; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xB77C;&#xB294; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC728; &#xB41C;. Srebps&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xBC1C; lipogenesis &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC18D;&#xC5D0; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; Srebps&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC04;&#xACA9;&#xC774; SREBPs &#xB2E4;&#xB978; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD568;&#xAED8; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xD1B5;&#xB85C; SREBP transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Metabolismo de los l&#xED;pidos en los mam&#xED;feros est&#xE1; orquestada por una familia de factores de transcripci&#xF3;n llamado regulador de esteroles de elemento de enlace-prote&#xED;nas (SREBPs) que controlan la expresi&#xF3;n de genes necesarios para la absorci&#xF3;n y la s&#xED;ntesis de colesterol, &#xE1;cidos grasos y triglic&#xE9;ridos. SREBPs lo que son fundamentales para la insulina inducida por la lipog&#xE9;nesis y la homeostasis de la membrana celular y la biog&#xE9;nesis. Aunque varios jugadores se han identificado que el control de la expresi&#xF3;n y activaci&#xF3;n de SREBPs, siguen existiendo lagunas en nuestra comprensi&#xF3;n de c&#xF3;mo SREBPs se coordinan con otras v&#xED;as fisiol&#xF3;gicas.

La identificaci&#xF3;n de nuevos genes y v&#xED;as que regulan la actividad transcripcional SREBP

&#x53CC;&#x5C42;&#x5408;&#x6210;&#x819C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x671F;&#x95F4;&#x6D89;&#x53CA;&#x591A;&#x8102;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x8981;&#x6C42;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x5438;&#x6536;&#x3001; &#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x548C;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5E03;&#x534F;&#x8C03;&#x4E00;&#x81F4;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x68C0;&#x8BA8;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7A81;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x5C31;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x5168;&#x5C40;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5DE5;&#x5177;&#x662F;&#x5C11;&#x91CF;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x9176;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x662F;&#x523A;&#x6FC0;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x56FA;&#x9187;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (&#x56FA;&#x9187;)&#x3002;&#x4ECE;&#x4E0E;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x5F88;&#x591A;&#x5DF2;&#x6DF1;&#x77E5;&#x7F00;&#x548C;&#x9EA6;&#x89D2;&#x56FA;&#x9187;&#x8C03;&#x8282;&#x901A;&#x8FC7; Ino2p/Ino4p &#x548C; Upc2p &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x4F9B;&#x5E94;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F17;&#x591A;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x53CD;&#x9988;&#x7535;&#x8DEF;&#x53D1;&#x8D77;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x54C1;&#x548C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x8102;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x8FDB;&#x884C;&#x5FAE;&#x8C03;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x8DE8;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5373;&#x7C7B;&#x8102;&#x8D28;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5206;&#x652F;&#x4E2D;&#x7684;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7EF4;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x8102;&#x8D28;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x53D1;&#x751F;&#x8102;&#x8D28;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x3002;

Bilayer synthesis during membrane biogenesis involves the concerted assembly of multiple lipid species, requiring coordination of the level of lipid synthesis, uptake, turnover, and subcellular distribution. In this review, we discuss some of the salient conclusions regarding the coordination of lipid synthesis that have emerged from work in mammalian and yeast cells. The principal instruments of global control are a small number of transcription factors that target a wide range of genes encoding enzymes that operate in a given metabolic pathway. Critical in mammalian cells are sterol regulatory element binding proteins (SREBPs) that stimulate expression of genes for the uptake and synthesis of cholesterol and fatty acids. From work with Saccharomyces cerevisiae, much has been learned about glycerophospholipid and ergosterol regulation through Ino2p/Ino4p and Upc2p transcription factors, respectively. Lipid supply is fine-tuned through a multitude of negative feedback circuits initiated by both end products and intermediates of lipid synthesis pathways. Moreover, there is evidence that the diversity of membrane lipids is maintained through cross-regulatory effects, whereby classes of lipids activate the activity of enzymes operating in another metabolic branch.

Coordination of lipid metabolism in membrane biogenesis.

Synth&#xE8;se bicouche pendant la biogen&#xE8;se membranaire implique l&#x26;#39;assemblage concert&#xE9;e des esp&#xE8;ces lipidiques multiples, qui exige la coordination au niveau de la synth&#xE8;se des lipides, l&#x26;#39;absorption, le chiffre d&#x26;#39;affaires, et la distribution subcellulaire. Dans cette revue, nous discutons de quelques-unes des conclusions principales concernant la coordination de la synth&#xE8;se des lipides qui ont &#xE9;merg&#xE9; du travail dans les cellules de mammif&#xE8;res et de levure. Les principaux instruments de la lutte mondiale contre un petit nombre de facteurs de transcription qui ciblent une large gamme de g&#xE8;nes codant pour des enzymes qui op&#xE8;rent dans une voie m&#xE9;tabolique donn&#xE9;e. Critique dans les cellules de mammif&#xE8;res sont des prot&#xE9;ines de st&#xE9;rols &#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;gulation contraignants (SREBPs) qui stimulent l&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes pour l&#x26;#39;absorption et la synth&#xE8;se de cholest&#xE9;rol et des acides gras. Du travail avec Saccharomyces cerevisiae, on a beaucoup appris sur les glyc&#xE9;rophospholipides et de la r&#xE9;glementation par le biais ergost&#xE9;rol Ino2p/Ino4p et des facteurs de transcription Upc2p, respectivement. Apport lipidique est affin&#xE9; par une multitude de circuits de r&#xE9;troaction n&#xE9;gatives lanc&#xE9;es par les deux produits finaux et interm&#xE9;diaires des voies de synth&#xE8;se des lipides. En outre, il est &#xE9;vident que la diversit&#xE9; des lipides membranaires est maintenue gr&#xE2;ce &#xE0; croix-r&#xE9;glementaires effets, dans lequel les cat&#xE9;gories de lipides activent l&#x26;#39;activit&#xE9; des enzymes qui op&#xE8;rent dans une autre branche m&#xE9;tabolique.

Coordination du m&#xE9;tabolisme des lipides en biogen&#xE8;se des membranes

Bilayer Synthese w&auml;hrend der Membran Biogenese umfasst die konzertierte Assembly mehrere Lipid-Arten, die Koordinierung des Niveaus der Lipid-Synthese, Aufnahme, Umsatz, und subzellul&auml;re Verteilung. In diesem Bericht besprechen wir einige der wichtigsten Schlussfolgerungen hinsichtlich der Koordinierung der Lipid-Synthese, die von der Arbeit in den S&auml;ugetier- und Hefe-Zellen entstanden sind. Die wichtigsten Instrumente der globalen Kontrolle sind eine kleine Anzahl von Transkriptionsfaktoren, die als Ziel eine Vielzahl von Genen, die Codierung der Enzyme, die in einem bestimmten Stoffwechselweg t&auml;tig sind. Kritisch in den S&auml;ugetier-Zellen sind Sterin-regulatorische Element-Binding-Proteine (SREBPs), die Expression von Genen f&uuml;r die Aufnahme und Synthese von Cholesterin und Fetts&auml;uren stimulieren. Von der Arbeit mit Saccharomyces Cerevisiae hat viel &uuml;ber Phosphoglyceride und Ergosterin Verordnung &uuml;ber Ino2p/Ino4p und Upc2p Transkriptionsfaktoren, bzw. erfahren wurde. Lipid-Versorgung ist durch eine Vielzahl von Gegenkopplung Schaltungen initiiert von End- und Zwischenprodukte der Lipid-Synthese-Bahnen abgestimmt. Dar&uuml;ber hinaus gibt es Hinweise, dass die Vielfalt der Membrane Lipide durch Kreuz-regulatorische Effekte, aufrechterhalten wird, wobei Klassen von Lipiden aktivieren die Aktivit&auml;t der Enzyme, die in einem anderen metabolischen Zweig t&auml;tig.

Koordination des Fettstoffwechsels in Membran Biogenese.

Sintesi di doppio strato durante la biogenesi della membrana comporta l&#39;Assemblea concordata di molteplici specie di lipidi, che richiedono il coordinamento del livello di sintesi di lipidi, assorbimento, fatturato e distribuzione subcellulare. In questa recensione, discutiamo alcune conclusioni salienti per quanto riguarda il coordinamento della sintesi dei lipidi che sono emersi dal lavoro in cellule di mammiferi e lievito. I principali strumenti di controllo globale sono un piccolo numero di fattori di trascrizione che l&#39;obiettivo di una vasta gamma di geni che codificano enzimi che operano in una determinata via metabolica. Critica in cellule di mammifero sono sterol regulatory element binding proteins (SREBPs) che stimolano l&#39;espressione dei geni per l&#39;assorbimento e la sintesi del colesterolo e acidi grassi. Dal lavoro con Saccharomyces cerevisiae, molto &egrave; stato imparato glicerofosfolipide ed ergosterolo regolamento attraverso i fattori di trascrizione Ino2p/Ino4p e Upc2p, rispettivamente. Fornitura dei lipidi &egrave; perfezionata attraverso una moltitudine di circuiti di retroazione negativa iniziata da sia prodotti finiti e intermedi delle vie di sintesi dei lipidi. Inoltre, vi &egrave; evidenza che la diversit&agrave; dei lipidi di membrana viene mantenuta attraverso effetti cross-normativi, per cui le classi di lipidi attivare l&#39;attivit&agrave; degli enzimi che operano in un altro ramo metabolico.

Coordinamento del metabolismo lipidico nella biogenesi della membrana.

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&#xB9C9; &#xC18D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC758; &#xC870;&#xC815;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La s&#xED;ntesis de dos capas en la biog&#xE9;nesis de la membrana consiste en el conjunto concertado de las especies de l&#xED;pidos m&#xFA;ltiples, que requieren la coordinaci&#xF3;n del nivel de la s&#xED;ntesis de l&#xED;pidos, la captaci&#xF3;n, el volumen de negocios, y la distribuci&#xF3;n subcelular. En esta revisi&#xF3;n, se discuten algunas de las conclusiones m&#xE1;s destacadas con respecto a la coordinaci&#xF3;n de la s&#xED;ntesis de l&#xED;pidos que han surgido del trabajo en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros y levaduras. Los principales instrumentos de control mundial son un peque&#xF1;o n&#xFA;mero de factores de transcripci&#xF3;n que se dirigen a una amplia gama de genes que codifican enzimas que operan en una ruta metab&#xF3;lica determinada. Cr&#xED;tico en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros son prote&#xED;nas reguladoras de esterol de los elementos de uni&#xF3;n (SREBPs) que estimulan la expresi&#xF3;n de los genes para la captaci&#xF3;n y la s&#xED;ntesis de colesterol y &#xE1;cidos grasos. A partir del trabajo con Saccharomyces cerevisiae, se ha aprendido mucho acerca glicerofosfol&#xED;pido y la regulaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de ergosterol Ino2p/Ino4p y los factores de transcripci&#xF3;n Upc2p, respectivamente. Aporte de l&#xED;pidos es perfeccionado a trav&#xE9;s de una multitud de circuitos de retroalimentaci&#xF3;n negativa iniciados por los productos finales como para los intermedios de las v&#xED;as de s&#xED;ntesis de l&#xED;pidos. Adem&#xE1;s, no hay evidencia de que la diversidad de los l&#xED;pidos de membrana se mantiene a trav&#xE9;s transversal reguladoras efectos, mediante el cual las clases de l&#xED;pidos activan la actividad de las enzimas que act&#xFA;an en otra rama metab&#xF3;lica.

Axel Nohturfft

Department of Molecular and Cell Biology

Harvard

Studying Membrane Biogenesis with a Luciferase-Based Reporter Gene Assay