purification-of-hsp104-a-protein-disaggregase

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

University of Pennsylvania

HyHEL 8&#x3001; HyHEL-10 &#x548C; HyHEL 26 (HH8&#x3001; HH10 &#x548C; HH26&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF09; &#x662F;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5355;&#x514B;&#x9686; IgG(1) &#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4EFD;&#x989D;&#x8D85;&#x8FC7; 90%&#x53D8;&#x91CF;&#x533A;&#x57DF;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x8BC6;&#x548C;&#x8BC6;&#x522B;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x5728;&#x6BCD;&#x9E21;&#x86CB;&#x6E05;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9176; (&#x6D77;&#x5CF0;)&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6297;&#x4F53;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x5EA6;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x3002;HH8 &#x662F;&#x6700;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x800C; HH26 &#x738B;&#x671D;&#x7684;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x76D0;&#x94FE;&#x63A5;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x5341;&#x5206;&#x5177;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5F3A;&#x70C8;&#x53D7;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x534F;&#x4F1A;&#x548C;&#x5206;&#x89E3;&#x7387;&#x3002;HH10 &#x662F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x548C;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E3B;&#x8981;&#x5728;&#x79BB;&#x89E3;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x70ED;&#x6CD5;&#x8868;&#x5F81;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6297;&#x4F53;&#x4E0E;&#x672C;&#x673A;&#x6297;&#x539F;&#x6D77;&#x5CF0;&#x548C;&#x65E5;&#x672C;&#x9E4C;&#x9E51;&#x86CB;&#x6E05;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9176; (JQL) &#x81EA;&#x7136;&#x53D1;&#x751F; variant &#x79BD;&#x534F;&#x4F1A; balls &#x663E;&#x793A;&#x4E92;&#x52A8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x4EA4;&#x53C9;&#x6027;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; HH8 &#x7684;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x4EA4;&#x53C9;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x548C;&#x51CF;&#x53BB;&#x7279;&#x5B9A;&#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7075;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x8BA1;&#x7B97;&#x8868;&#x660E;&#x7ECF;&#x534F;&#x4F1A; HH8 &#x62DB;&#x81F4;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x7EC4;&#x6001;&#x71B5;&#x7F5A;&#x548C;&#x4E5F;&#x7684;&#x53D8;&#x578B;&#x6297;&#x539F;&#x4E0E;&#x7113;&#x9A71;&#x52A8;&#x529B;&#x6700;&#x5C0F;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x8981;&#x5C0F;&#x5F97;&#x591A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6270;&#x52A8;&#x9884;&#x671F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x592A;&#x7075;&#x6D3B;&#x7684; HH26 &#x5F62;&#x6210;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x548C;&#x7113;&#x53D8;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x4E0E;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x529B;&#x4F1A;&#x906D;&#x53D7;&#x5927;&#x91CF;&#x635F;&#x5931;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x5176;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x5173;&#x8054;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x884C;&#x4E3A;&#x5177;&#x6709;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x548C;&#x8BF4;&#x660E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x5206;&#x5B50;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E2D;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

&#x80FD;&#x91CF;&#x5B66;&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;

HyHEL-8, HyHEL-10, and HyHEL-26 (HH8, HH10, and HH26, respectively) are murine monoclonal IgG(1) antibodies which share over 90% variable-region amino acid sequence identity and recognize identical structurally characterized epitopes on hen egg white lysozyme (HEL). Previous immunochemical and surface plasmon resonance-based studies have shown that these antibodies differ widely in their tolerance of mutations in the epitope. While HH8 is the most cross-reactive, HH26 is rigidified by a more extensive network of intramolecular salt links and is highly specific, with both association and dissociation rates strongly affected by epitope mutations. HH10 is of intermediate specificity, and epitope mutations produce changes primarily in the dissociation rate. Calorimetric characterization of the association energetics of these three antibodies with the native antigen HEL and with Japanese quail egg white lysozyme (JQL), a naturally occurring avian variant, shows that the energetics of interaction correlate with cross-reactivity and specificity. These results suggest that the greater cross-reactivity of HH8 may be mediated by a combination of conformational flexibility and less specific intermolecular interactions. Thermodynamic calculations suggest that upon association HH8 incurs the largest configurational entropic penalty and also the smallest loss of enthalpic driving force with variant antigen. Much smaller structural perturbations are expected in the formation of the less flexible HH26 complex, and the large loss of enthalpic driving force observed with variant antigen reflects its specificity. The observed thermodynamic parameters correlate well with the observed functional behavior of the antibodies and illustrate fundamental differences in thermodynamic characteristics between cross-reactive and specific molecular recognition.

Association energetics of cross-reactive and specific antibodies.

HyHEL-8 HyHEL-10 et HyHEL-26 (HH8 et HH10 CM26, respectivement) sont des anticorps monoclonaux murins de IgG(1) quelle part plus de 90 % d&#39;acides amin&eacute;s variable-r&eacute;gion identit&eacute; de s&eacute;quence et reconnaissent identiques structurellement caract&eacute;ris&eacute; &eacute;pitopes sur le lysozyme de blanc de &oelig;uf (HEL). Pr&eacute;c&eacute;dent immunochimiques et surface plasmon resonance-&eacute;tudes ont montr&eacute; que ces anticorps sont tr&egrave;s diff&eacute;rent dans leur tol&eacute;rance des mutations dans l&#39;&eacute;pitope. Alors que HH8 est le plus une r&eacute;action crois&eacute;e, CM26 est rigidifi&eacute; par un plus vaste r&eacute;seau de liens sel intramol&eacute;culaire et il est hautement sp&eacute;cifique, d&#39;association et dissociation fortement affect&eacute;s par les mutations de l&#39;&eacute;pitope. HH10 est de sp&eacute;cificit&eacute; interm&eacute;diaire, et des mutations &eacute;pitope produisent des changements principalement dans le taux de dissociation. Caract&eacute;risation calorim&eacute;trique de l&#39;&eacute;nerg&eacute;tique de l&#39;association de ces trois anticorps avec l&#39;antig&egrave;ne natif HEL et lysozyme de blanc d&#39;oeuf caille du Japon (JQL), une variante aviaire naturelle, montre que les &eacute;nergies de corr&eacute;lation de l&#39;interaction avec r&eacute;activit&eacute; crois&eacute;e et la sp&eacute;cificit&eacute;. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la plus grande r&eacute;activit&eacute; de HH8 pourrait &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par une combinaison de flexibilit&eacute; conformationnelle et moins sp&eacute;cifiques interactions intermol&eacute;culaires. Calculs thermodynamiques sugg&egrave;rent que sur association HH8 doit supporter la plus grande peine entropique configurationnelle et aussi les plus faibles chutes d&#39;enthalpique force motrice avec l&#39;antig&egrave;ne variant. Beaucoup plus petites perturbations structurelles sont attendues dans la formation de la moins flexible CM26 complexes, et la grande perte d&#39;enthalpique force motrice observ&eacute;e avec l&#39;antig&egrave;ne variante refl&egrave;te sa sp&eacute;cificit&eacute;. La corr&eacute;lation avec les param&egrave;tres thermodynamiques observ&eacute;s bien avec le comportement observ&eacute; fonctionnel des anticorps et illustrent les caract&eacute;ristiques thermodynamiques des diff&eacute;rences fondamentales entre une r&eacute;action crois&eacute;e et sp&eacute;cifique de la reconnaissance mol&eacute;culaire.

Energ&eacute;tique Association des anticorps sp&eacute;cifiques et une r&eacute;action crois&eacute;es.

HyHEL-8, HyHEL-10 und HyHEL-26 (HH8, HH10 und HH26, beziehungsweise) sind Muriner monoklonaler IgG(1) Antik&ouml;rper davon Anteil &uuml;ber 90 % Variable-Region-Aminos&auml;ure-Sequenz Identit&auml;t und strukturell identisch zu erkennen Epitopes auf Hen Eiwei&szlig; Lysozym (HEL charakterisiert). Fr&uuml;heren immunochemischen und Oberfl&auml;chen-Plasmon-Resonanz-basierten Studien haben gezeigt, dass diese Antik&ouml;rper sehr in ihrer Toleranz von Mutationen in der Epitop unterschiedlich. W&auml;hrend HH8 die meisten kreuzreagierenden, HH26 ist ein umfassender Netzwerk von intramolekulare Salzbr&uuml;cken rigidified und ist sehr spezifisch, mit Assoziation und Dissoziation Preise stark Epitop Mutationen betroffen. HH10 ist der Mittelstufe Besonderheit und Epitop Mutationen produzieren Ver&auml;nderungen in erster Linie die Dissoziation. Kalorimetrischer Charakterisierung der Verband Energetik dieser drei Antik&ouml;rper mit nativen Antigens HEL und Japanische Wachtel Eiwei&szlig; Lysozym (JQL), ein nat&uuml;rlich vorkommendes Avi&auml;re Variante, zeigt, dass die Energetik der Interaktion korrelieren mit Kreuzreaktivit&auml;t und Spezifit&auml;t. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die gr&ouml;&szlig;ere Kreuzreaktivit&auml;t von HH8 durch eine Kombination von Konformations&auml;nderungen Flexibilit&auml;t und weniger spezifischen intermolekulare Wechselwirkungen vermittelt werden kann. Thermodynamische Berechnungen zufolge HH8 bei der Vereinigung der gr&ouml;&szlig;ten Konfiguration betreffenden entropischen Geldstrafe und auch den kleinsten Verlust der Enthalpie treibende Kraft mit variant Antigen entstehen. Viel kleinere strukturelle St&ouml;rungen d&uuml;rften sich bei der Bildung von weniger flexibel HH26 komplexe, und der gro&szlig;e Verlust der Enthalpie treibende Kraft beobachtet mit variant Antigen spiegelt seine Besonderheit. Die beobachteten thermodynamischen Parametern korrelieren gut mit dem beobachteten funktionale Verhalten der Antik&ouml;rper und veranschaulichen grundlegende Unterschiede bei den thermodynamischen Eigenschaften zwischen kreuzreagierenden und spezifische molekulare Erkennung.

Verband Energetik kreuzreagierenden und spezifische Antik&ouml;rper.

HyHEL-8, HyHEL-10 e HyHEL-26 (HH8, HH10 e HH26, rispettivamente) sono anticorpi murini monoclonali IgG(1) quota di cui oltre il 90% dell&#39;amminoacido variabile-regione identit&agrave; di sequenza e riconoscere identiche strutturalmente caratterizzato gli epitopi su lisozima di bianco d&#39;uovo di gallina (HEL). Studi basati su risonanza plasmonica di superficie e immunochimiche precedenti hanno dimostrato che questi anticorpi differiscono ampiamente nella loro tolleranza delle mutazioni nell&#39;epitopo. Mentre HH8 &egrave; pi&ugrave; interferenti, HH26 &egrave; irrigidito da una pi&ugrave; vasta rete di legami salini intramolecolare ed &egrave; altamente specifico, con tariffe sia associazione e dissociazione, fortemente influenzate da mutazioni di epitopo. HH10 &egrave; di specificit&agrave; intermedie ed epitopo mutazioni producono cambiamenti principalmente nel tasso di dissociazione. Caratterizzazione calorimetrico dell&#39;energetica di associazione di questi tre anticorpi con l&#39;antigene nativo HEL e Quaglia giapponese bianco d&#39;uovo lisozima (JQL), una variante natura aviaria, dimostra che l&#39;energetica di interazione in correlazione con cross-reattivit&agrave; e la specificit&agrave;. Questi risultati suggeriscono che la cross-reattivit&agrave; maggiore di HH8 pu&ograve; essere mediata da una combinazione di flessibilit&agrave; conformazionale e meno specifiche interazioni intermolecolari. Calcoli termodinamici suggeriscono che all&#39;associazione HH8 comporta la pena entropic configurazionale pi&ugrave; grande e anche la pi&ugrave; piccola perdita di entalpico forza motrice con variante dell&#39;antigene. Molto pi&ugrave; piccole perturbazioni strutturali sono attesi per la formazione della HH26 meno flessibile complessi, e la grande perdita di forza motrice entalpico osservato con antigene variante riflette la sua specificit&agrave;. I parametri termodinamici osservati in correlazione con il comportamento osservato funzionale degli anticorpi e illustrare fondamentali differenze nelle caratteristiche termodinamiche interferenti e specifico riconoscimento molecolare.

Energetica di associazione di anticorpi specifici ed interferenti.

HyHEL 8&#x3001;HyHEL 10&#x3001;HyHEL 26 (HH8&#x3001;HH10&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; HH26&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB; IgG(1) &#x6297;&#x4F53;&#x306E; 90 &#xFF05; &#x4EE5;&#x4E0A;&#x5909;&#x6570;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x4E00;&#x8A8D;&#x8B58;&#x5171;&#x6709;&#x7279;&#x5FB4;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x9D8F;&#x5375;&#x767D;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0; (HEL) &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x5F7C;&#x3089;&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HH8 &#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;HH26 &#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5869;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; rigidified &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x5354;&#x4F1A;&#x3068;&#x89E3;&#x96E2;&#x7387;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;HH10 &#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x89E3;&#x96E2;&#x7387;&#x306E;&#x63A8;&#x79FB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x6297;&#x539F;&#x30D8;&#x30EB;&#x3068;&#x30A6;&#x30BA;&#x30E9;&#x5375;&#x767D;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0; (JQL) &#x81EA;&#x7136;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x9CE5;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 3 &#x3064;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8AD6;&#x306E;&#x71B1;&#x91CF;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8AD6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HH8 &#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x306E;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x306B; HH8 &#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30FC; &#x30DA;&#x30CA;&#x30EB;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x30AA;&#x30EB;&#x30C8;&#x306E;&#x539F;&#x52D5;&#x529B;&#x3068;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x640D;&#x5931;&#x8CA0;&#x62C5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x6442;&#x52D5;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A; HH26 &#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x89B3;&#x5BDF;&#x30AA;&#x30EB;&#x30C8;&#x306E;&#x539F;&#x52D5;&#x529B;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x3057;&#x3001;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306E;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5354;&#x4F1A;&#x30A8;&#x30CA;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x5B9A;&#x3002;

HyHEL 8, HyHEL-10 &#xBC0F; HyHEL-26 (HH8, HH10, &#xBC0F; HH26, &#xAC01;&#xAC01;) murine &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB85C; &#xB110; IgG(1) &#xD56D; &#xCCB4;&#xB294; &#xC810;&#xC720;&#xC728; 90% &#xC774;&#xC0C1; &#xBCC0;&#xC218; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD2B9;&#xC9D5; epitopes &#xC554; &#xD0C9; &#xACC4;&#xB780; &#xD770; lysozyme (&#xD5EC;)&#xC5D0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; immunochemical &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85;-&#xAE30;&#xBC18; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xD56D;&#xC774; &#xCCB4;&#xB294; epitope&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hh8&#xC740; &#xAC00;&#xC7A5; cross-reactive, HH26 intramolecular &#xC18C;&#xAE08; &#xB9C1;&#xD06C;&#xC758; &#xB354; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; rigidified &#xC774;&#xBA70; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xD611;&#xD68C; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC18D;&#xB3C4; epitope &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xD558;&#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. HH10 &#xC911;&#xAC04; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; epitope &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xC774; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD5EC;&#xC640; &#xC77C;&#xBCF8; &#xBA54; &#xCD94; &#xB77C; &#xAE30; &#xACC4;&#xB780; &#xD770; lysozyme (JQL), &#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC870;&#xB958; &#xBCC0;&#xC885; &#xD611;&#xD68C;&#xC5D0; &#xB108; &#xC9C0;&#xB860;&#xC758; &#xC5F4; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xADF8; &#xBD84; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC0C1;&#xD638; &#xC0C1;&#xAD00;&#xC758;&#xC5D0; &#xB108; &#xC9C0;&#xB860;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD2B9;&#xC815; intermolecular &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; &#xC801;&#xC740; hh8&#xC758; &#xB354; &#xD070; &#xBD84;&#xC5D0; &#xC911;&#xC7AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD611;&#xD68C; &#xC2DC; &#xCD5C;&#xB300; configurational &#xC5D4;&#xD2B8;&#xB85C;&#xD53C; &#xCC98;&#xBC8C;&#xACFC; &#xBCC0;&#xD615; &#xD56D; &#xC6D0; &#xAC00;&#xC9C4; enthalpic &#xC6D0;&#xB3D9;&#xB825;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC791;&#xC740; &#xC190;&#xC2E4; HH8 &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6E8;&#xC52C; &#xC791;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870; &#xBB3C;&#xACB0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xB35C; &#xC720;&#xC5F0; HH26 &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC608;&#xC0C1;&#xC740; &#xD558; &#xACE0; enthalpic &#xC6D0;&#xB3D9;&#xB825; &#xBCC0;&#xD615; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xAD00;&#xCC30;&#xC758; &#xD070; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC18;&#xC601; &#xD55C;&#xB2E4; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;. &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC0C1;&#xAD00; &#xCCB4;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3D9;&#xC791; &#xC74C; &#xBC0F; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; cross-reactive &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; &#xBD84;&#xC790; &#xC778;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xCC28;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;.

&#xD611;&#xD68C; cross-reactive &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758;&#xC5D0; &#xB108; &#xC9C0;&#xB860;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

HyHEL-8, HyHEL-10 y 26-HyHEL (HH8, HH10 y HH26, respectivamente) son anticuerpos monoclonales murinos de IgG(1) que compartir m&aacute;s del 90% variable-regi&oacute;n amino&aacute;cido secuencia identidad y reconocer id&eacute;ntico estructuralmente caracterizado epitopos de la lisozima del huevo de gallina (HEL). Estudios de basadas en la resonancia de plasm&oacute;n superficial e inmunoqu&iacute;mico anteriores han demostrado que estos anticuerpos difieren ampliamente en su tolerancia de mutaciones en el epitopo. Mientras que HH8 es el m&aacute;s Cruz-reactivo, HH26 rigidified por una red m&aacute;s extensa de Enlaces intramoleculares de sal y es altamente espec&iacute;fico, con tasas tanto asociaci&oacute;n y disociaci&oacute;n, fuertemente afectadas por las mutaciones del ep&iacute;topo. HH10 es de especificidad intermedio y del ep&iacute;topo mutaciones producen cambios principalmente en la tasa de disociaci&oacute;n. Caracterizaci&oacute;n calorim&eacute;trica de la energ&eacute;tica de la Asociaci&oacute;n de estos tres anticuerpos con el ant&iacute;geno nativo HEL y lisozima huevo de codornices japonesas (JQL), una variante aviar natural, demuestra que la energ&iacute;a de interacci&oacute;n correlato con reactividad cruzada y especificidad. Estos resultados sugieren que la reactividad cruzada mayor de HH8 puede estar mediada por una combinaci&oacute;n de flexibilidad conformacional y menos interacciones intermoleculares espec&iacute;ficas. C&aacute;lculos termodin&aacute;micos sugieren que a Asociaci&oacute;n HH8 incurre en la m&aacute;s grande pena entr&oacute;pica configuracional y tambi&eacute;n la menor p&eacute;rdida de fuerza impulsora ent&aacute;lpico con ant&iacute;geno variante. Mucho m&aacute;s peque&ntilde;as perturbaciones estructurales se espera que en la formaci&oacute;n de la HH26 menos flexibles complejas, y la gran p&eacute;rdida de fuerza impulsora ent&aacute;lpico observado con ant&iacute;geno variante refleja su especificidad. El correlato de par&aacute;metros termodin&aacute;micos observado bien con el comportamiento observado funcional de los anticuerpos e ilustrar diferencias fundamentales en las caracter&iacute;sticas termodin&aacute;micas entre Cruz-reactivo y espec&iacute;fico de reconocimiento molecular.

Energ&eacute;tica de la Asociaci&oacute;n de anticuerpos espec&iacute;ficos y cruz-reactivos.

&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x89E3;&#x51B3;&#x7531;&#x4E8E; L &#x94FE; HyHEL-10 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x6210;&#x719F; IgG &#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x56FD;&#x8D38;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3001; SPR &#x4E0E; van&#39;t &#x970D;&#x592B;&#x5206;&#x6790;&#x548C; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7236;&#x6BCD;&#x6297;&#x4F53; H26L26&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9176;&#x6709;&#x5229; DeltaG(o)-1.2+/-0.1 &#x5343;&#x5361; mol(-1) &#x548C;-1.3+/-0.1 mol(-1) &#x5343;&#x5361;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x8868;&#x660E;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; H26L10 &#x548C; H26L8 &#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x3002;H26L10 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x6709;&#x5229;&#x7113;&#x53D8;&#x4E0E;&#x71B5;&#x4E0E; H26L26 &#x76F8;&#x6BD4;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x5DEE;&#x522B;&#x51C0;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;H26L8 &#x671B;&#x6708;&#x5C55;&#x51FA;&#x6709;&#x5229;&#x7113;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x5347;&#x5E45;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x4E0A;&#x5347;&#x4E0D;&#x5229;&#x7684;&#x71B5;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5176;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x662F;&#x5B9E;&#x8D28;&#x4E0A;&#x76F8;&#x5F53;&#x3002;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; L &#x94FE;&#x786E;&#x5B9A;&#x5171;&#x4EAB;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8; S30G &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x589E;&#x52A0;&#x5BF9;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9176;&#x4EB2;&#x548C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E0D;&#x53D7; H &#x94FE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;30 L &#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63A5;&#x53E3;&#x548C; S30G &#x5F71;&#x54CD;&#x5916;&#x56F4;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11; H &#x7C98;&#x63A5;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5927;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x4E0D;&#x80FD;&#x4F7F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x65B0;&#x7684;&#x5927;&#x529B;&#x91CD;&#x8981;&#x6297;&#x539F;&#x63A5;&#x89E6;&#x3002;&#x65B0;&#x7684; 1.2 A &#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9664;-&#x548C;&#x5185;&#x90E8;-molecular H10L10 &#x6D77;&#x5CF0;&#x590D;&#x6742;&#x663E;&#x793A;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6C34;&#x76F8;&#x6BD4; H26L26 &#x4E0B;&#x4E00;&#x7BC7;&#xFF1A; &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63A5;&#x53E3;&#x9644;&#x8FD1;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x91CD;&#x5927;&#x7ED3;&#x6784;&#x6539;&#x52A8;&#x4E0E;&#x5F25;&#x5408;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E;&#x5F15;&#x8FDB;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x4E86;&#x89E3;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#x7684;&#x9AA8;&#x5E72;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x6C34;&#x6865;&#x5982;&#x4F55;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x900A;&#x8272;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD;&#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

&#x8F7B;&#x94FE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x6539;&#x53D8;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x6297;&#x4F53; HyHEL-10 &#x7CFB;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x6C34;&#x534F;&#x8C03;&#x3002;

Thermodynamic and structural studies addressed the increased affinity due to L-chain somatic mutations in the HyHEL-10 family of affinity matured IgG antibodies, using ITC, SPR with van't Hoff analysis, and X-ray crystallography. When compared to the parental antibody H26L26, the H26L10 and H26L8 chimeras binding to lysozyme showed an increase in favorable DeltaG(o) of -1.2+/-0.1 kcal mol(-1) and -1.3+/-0.1 kcal mol(-1), respectively. Increase in affinity of the H26L10 chimera was due to a net increase in favorable enthalpy change with little difference in change in entropy compared to H26L26. The H26L8 chimera exhibited the greatest increase in favorable enthalpy but also showed an increase in unfavorable entropy change, with the result being that the affinities of both chimeras were essentially equivalent. Site-directed L-chain mutants identified the shared somatic mutation S30G as the dominant contributor to increasing affinity to lysozyme. This mutation was not influenced by H-chain somatic mutations. Residue 30L is at the periphery of the binding interface and S30G effects an increase in hydrophobicity and decrease in H-bonding ability and size, but does not make any new energetically important antigen contacts. A new 1.2-A structure of the H10L10-HEL complex showed changes in the pattern of both inter- and intra-molecular water bridging with no other significant structural alterations near the binding interface compared to the H26L26-HEL complex. These results highlight the necessity for investigating both the structure and the thermodynamics associated with introduced mutations, in order to better assess and understand their impact on binding. Furthermore, it provides an important example of how backbone flexibility and water-bridging may favorably influence the thermodynamics of an antibody-antigen interaction.

Light chain somatic mutations change thermodynamics of binding and water coordination in the HyHEL-10 family of antibodies.

&Eacute;tudes thermodynamiques et structurelles adress&eacute;e l&#39;affinit&eacute; accrue due &agrave; des mutations somatiques de L-cha&icirc;ne appartenant &agrave; la famille de HyHEL-10 de l&#39;anticorps IgG affinit&eacute; est arriv&eacute;e &agrave; &eacute;ch&eacute;ance, &agrave; l&#39;aide de la CCI, SPR avec Van &#39; t Hoff analyse et cristallographie aux rayons x. Par rapport &agrave; l&#39;anticorps parental H26L26, les H26L10 et H26L8 chim&egrave;res liant au lysozyme ont montr&eacute; une augmentation de DeltaG(o) favorable de-1.2+/-0.1 kcal mol(-1) et mol(-1) de-1.3+/-0.1 de kcal, respectivement. Augmentation de l&#39;affinit&eacute; de la chim&egrave;re H26L10 &eacute;tait due &agrave; une augmentation nette des changement d&#39;enthalpie favorable avec peu de diff&eacute;rence dans le changement d&#39;entropie par rapport &agrave; H26L26. La chim&egrave;re H26L8 pr&eacute;sentait la plus forte augmentation d&#39;enthalpie favorable mais aussi ont montr&eacute; une augmentation dans la variation d&#39;entropie d&eacute;favorable, avec le r&eacute;sultat &eacute;tant que les affinit&eacute;s de deux chim&egrave;res &eacute;taient essentiellement &eacute;quivalentes. Des mutants de L-cha&icirc;ne dirig&eacute;e identifi&eacute; la mutation somatique partag&eacute;e S30G comme cotisant dominante pour augmenter l&#39;affinit&eacute; de lysozyme. Cette mutation n&#39;est pas influenc&eacute;e par les mutations somatiques H-cha&icirc;ne. R&eacute;sidu 30 L est &agrave; la p&eacute;riph&eacute;rie de l&#39;interface de liaison et les effets de la S30G, une augmentation de l&#39;hydrophobicit&eacute; et diminution de la capacit&eacute; de liaison hydrog&egrave;ne et la taille, mais ne fait pas tout nouveaux contacts antig&egrave;ne &eacute;nerg&eacute;tiquement importants. Une nouvelle structure de 1,2-A des changements a montr&eacute; H10L10-HEL complexes dans le mod&egrave;le de deux inter - et intra - mol&eacute;culaires water Bridge avec aucun autre modifications structurales importantes pr&egrave;s de l&#39;interface de liaison par rapport au complexe H26L26-HEL. Ces r&eacute;sultats mettent en &eacute;vidence la n&eacute;cessit&eacute; d&#39;&eacute;tudier la structure et la thermodynamique associ&eacute;e &agrave; des mutations introduites, afin de mieux &eacute;valuer et comprendre leur impact sur la liaison. En outre, il fournit un exemple important de comment flexibilit&eacute; de la colonne vert&eacute;brale et de l&#39;eau-transition peuvent influer favorablement sur la thermodynamique d&#39;une interaction antig&egrave;ne-anticorps.

Des mutations somatiques de cha&icirc;ne l&eacute;g&egrave;re changement thermodynamique de l&#39;eau et la liaison coordination appartenant &agrave; la famille de HyHEL-10 des anticorps.

Thermodynamische und strukturelle Studien adressiert die erh&ouml;hte Affinit&auml;t mit L-Kette somatische Mutationen in der HyHEL-10-Familie von Affinit&auml;t gereift-IgG-Antik&ouml;rper, ITC, SPR mit van&#39;t Hoff Analyse und Kristallstrukturanalyse. Im Vergleich zu der elterlichen Antik&ouml;rper H26L26, die H26L10 und H26L8 Chim&auml;ren, die Bindung an Lysozym zeigten eine Zunahme g&uuml;nstige DeltaG(o)-1.2+/-0.1 kcal mol(-1) und-1.3+/-0.1 kcal mol(-1), beziehungsweise. Zunahme der Affinit&auml;t des H26L10-Chim&auml;re war auf eine Nettozunahme der g&uuml;nstigen Enthalpie &Auml;nderung mit wenig Unterschied bez&uuml;glich der &Auml;nderung der Entropie, die im Vergleich zu H26L26. Die H26L8-Chim&auml;re ausgestellt den gr&ouml;&szlig;ten Zuwachs in g&uuml;nstigen Enthalpie aber zeigte auch eine Erh&ouml;hung in ung&uuml;nstigen Entropie &auml;ndern, mit dem Ergebnis, dass die &Uuml;bereinstimmung der beiden Chim&auml;ren im Wesentlichen gleichwertig war. Site-verwiesene L-Kette Mutanten identifiziert die freigegebene somatische Mutation S30G als der dominierende Beitrag zur Erh&ouml;hung der Affinit&auml;t zu Lysozym. Diese Mutation wurde von H-Kette somatische Mutationen nicht beeinflusst. R&uuml;ckstand 30L ist an der Peripherie der Bindung-Schnittstelle und S30G Wirkungen, Hydrophobie Zunahme und Abnahme der H-Bonden F&auml;higkeit und Gr&ouml;&szlig;e, aber macht keiner neue energetisch wichtige Antigen-Kontakte. Eine neue 1.2-A-Struktur der H10L10-HEL komplexen zeigten Ver&auml;nderungen im Muster der beiden inter - und innerhalb - molecular Wasser &uuml;berbr&uuml;cken mit keine andere wesentlichen strukturellen Ver&auml;nderungen in der N&auml;he der Bindung-Schnittstelle im Vergleich zu der H26L26-HEL-Komplex. Diese Ergebnisse unterstreichen die Notwendigkeit der Untersuchung der Struktur und der Thermodynamik eingef&uuml;hrte Mutationen, um besser einsch&auml;tzen und verstehen ihre Auswirkungen auf die Bindung zugeordnet. Au&szlig;erdem bietet es ein wichtiges Beispiel f&uuml;r wie R&uuml;ckgrat Flexibilit&auml;t und Wasser-bridging g&uuml;nstig Thermodynamik von einer Antik&ouml;rper-Antigen-Interaktion beeinflussen k&ouml;nnen.

Leichtketten somatische Mutationen &auml;ndern Thermodynamik Bindung und Wasser-Koordination in der HyHEL-10-Familie von Antik&ouml;rpern.

Studi strutturali e termodinamici indirizzata l&#39;affinit&agrave; maggiore a causa di mutazioni somatiche L-catena della famiglia HyHEL-10 di affinit&agrave; maturato anticorpi IgG, utilizzando le ITC, SPR con van &#39; t Hoff analisi e cristallografia a raggi x. Rispetto all&#39;anticorpo parentale H26L26, le chimere di H26L10 e H26L8 associazione di lisozima ha mostrato un aumento nella DeltaG(o) favorevole di-1.2+/-0.1 kcal mol(-1) e-1.3+/-0.1 mol(-1) kcal, rispettivamente. Aumento dell&#39;affinit&agrave; di chimera H26L10 era a causa di un aumento netto di entalpia favorevole con poca differenza nella variazione di entropia rispetto al H26L26. La chimera H26L8 esposto il pi&ugrave; grande aumento di entalpia favorevole, ma inoltre hanno mostrato un aumento in cambio sfavorevole entropia, con il risultato che le affinit&agrave; delle due chimere erano essenzialmente equivalente. Mutanti L-catena diretto sito identificato il condivisa mutazione somatica S30G come collaboratore alla dominante a aumentando l&#39;affinit&agrave; di lisozima. Questa mutazione non &egrave; stata influenzata da mutazioni somatiche H-catena. Residuo 30 L &egrave; alla periferia dell&#39;interfaccia di associazione e di effetti S30G un aumento di idrofobicit&agrave; e diminuzione della capacit&agrave; di legame H e dimensione, ma non fa alcun nuovi contatti energeticamente importante antigene. Una nuova struttura di 1.2-A dei cambiamenti H10L10-HEL complessi ha mostrati nel modello di entrambi inter - e intra - molecular acqua bridging con nessun altro significative alterazioni strutturali vicino all&#39;interfaccia dell&#39;associazione rispetto al complesso H26L26-HEL. Questi risultati evidenziano la necessit&agrave; di indagare la struttura e la termodinamica associata a mutazioni introdotte, al fine di meglio valutare e comprendere il loro impatto sull&#39;associazione. Inoltre, esso fornisce un esempio importante di come spina dorsale flessibilit&agrave; e acqua-bridging possono influenzare favorevolmente la termodinamica di un&#39;interazione anticorpo-antigene.

Mutazioni somatiche catena leggera modifica termodinamica del coordinamento associazione e acqua nella famiglia degli anticorpi HyHEL-10.

&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x69CB;&#x9020;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x6210;&#x719F;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; IgG &#x6297;&#x4F53;&#x3001;ITC &#x306F;&#x3001;SPR &#x30F4;&#x30A1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30D5; Hoff &#x89E3;&#x6790;&#x3068; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x306E; HyHEL 10 &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E; L &#x9396;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3002;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x7D50;&#x5408; H26L10 &#x3068; H26L8 &#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3001;&#x89AA;&#x6297;&#x4F53; H26L26 &#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;-1.2+/-0.1 kcal mol(-1) &#x3068;-1.3+/-0.1 kcal mol(-1) &#x306E;&#x6709;&#x5229;&#x306A; DeltaG(o) &#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;H26L10 &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F; H26L26 &#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5DEE;&#x3092;&#x6709;&#x5229;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30BF;&#x30EB;&#x30D4;&#x30FC;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x7D14;&#x5897;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;H26L8 &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6709;&#x5229;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30BF;&#x30EB;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304C;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x7B49;&#x4FA1;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5897;&#x52A0;&#x4E0D;&#x5229;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D4;&#x30FC;&#x5909;&#x5316;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; L &#x9396;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x5171;&#x6709;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x7570; S30G &#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x8005;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; H &#x9396;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;30 L &#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x80FD;&#x529B;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3068; S30G &#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x5468;&#x56F2;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x7CBE;&#x529B;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9023;&#x7D61;&#x5148;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;H10L10 &#x30D8;&#x30EB;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x5909;&#x5316;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9; inter- &#x3068;&#x5185;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; 1.2 A &#x69CB;&#x9020;&#x6C34;&#x306E;&#x4ED6;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3001;H26L26 &#x30D8;&#x30EB;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x754C;&#x9762;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x3067;&#x306E;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x3088;&#x308A;&#x3088;&#x304F;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3068;&#x6C34;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x306F;&#x597D;&#x610F;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x5F71;&#x97FF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4F8B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8EFD;&#x9396;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x7570;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x6297;&#x4F53;&#x306E; HyHEL 10 &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6C34;&#x8ABF;&#x6574;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC131;&#xC219; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; IgG &#xD56D; &#xCCB4;, ITC, van&#39;t Hoff &#xBD84;&#xC11D;&#xC73C;&#xB85C; SPR &#xBC0F; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; HyHEL 10 &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; L-&#xC0AC;&#xC2AC; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xD574;&#xACB0;. &#xBE44;&#xD574; &#xBD80;&#xBAA8;&#xC758; &#xCCB4; H26L26, H26L10 &#xBC0F; H26L8 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; lysozyme &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; DeltaG(o)-1.2+/-0.1 kcal mol(-1) &#xBC0F;-1.3+/-0.1 kcal mol(-1)&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC01;&#xAC01; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. H26L10 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; &#xC5D4; &#xD0C8;&#xD53C; &#xBCC0;&#xD654; h26l26&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC5D4;&#xD2B8;&#xB85C;&#xD53C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; &#xD560; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. H26L8 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; &#xC5D4; &#xD0C8;&#xD53C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xC99D;&#xAC00; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xB450; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xB2F9; &#xB418;&#xB294; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xBD88;&#xB9AC; &#xD55C; &#xC5D4;&#xD2B8;&#xB85C;&#xD53C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. L &#xCCB4;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; &#xACF5;&#xC720; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; S30G lysozyme &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; H &#xCCB4;&#xC778; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xBCC0;&#xC774; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0;. &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30; 30 L hydrophobicity &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C; H &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC640; &#xD06C;&#xAE30;, &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC640; S30G &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0C8; &#xC815;&#xB825;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; 1.2 A &#xAD6C;&#xC870; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xBCC0;&#xD654; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xB450; &#xC778;&#xD14C;&#xB974;-&#xC640; intra-molecular&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; H10L10 &#xD5EC;&#xC758; H26L26 &#xD5EC; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; &#xB2E4;&#xB978; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE0C;&#xB9AC;&#xC9D5; &#xBB3C;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559; &#xB354; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB3C4;&#xC785;&#xB41C; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBC31;&#xBCF8; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xACFC; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB193;&#xB294; &#xC218; &#xD638;&#xC758; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559; &#xBBF8;&#xCE60;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC608;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD56D; &#xCCB4; HyHEL-10 &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xBB3C; &#xC870;&#xC815;&#xC758; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559; &#xBCC0;&#xACBD;.

Estudios termodin&aacute;micos y estructurales dirigidas a la mayor afinidad debido a mutaciones som&aacute;ticas L-cadena de la familia HyHEL-10 de anticuerpos de IgG de afinidad madurado, ITC, SPR con van &#39; t Hoff an&aacute;lisis y Cristalograf&iacute;a de rayos x. En comparaci&oacute;n con el anticuerpo parental H26L26, los H26L10 y H26L8 quimeras vinculante a lisozima mostr&oacute; un aumento favorable DeltaG(o) de mol(-1) de-1.2+/-0.1 kcal y mol(-1) de-1.3+/-0.1 kcal, respectivamente. Aumento en la afinidad de la quimera de H26L10 fue debido a un aumento neto en entalp&iacute;a favorable con poca diferencia en cambio de entrop&iacute;a en comparaci&oacute;n con H26L26. La quimera H26L8 exhibi&oacute; el mayor incremento de entalp&iacute;a favorable pero tambi&eacute;n mostr&oacute; un aumento en el cambio de entrop&iacute;a desfavorable, por lo que las afinidades de ambos quimeras fueron esencialmente equivalentes. Mutantes de L cadena dirigida identifican la mutaci&oacute;n som&aacute;tica compartida S30G como el contribuyente dominante al aumentar la afinidad a la lisozima. Esta mutaci&oacute;n no fue influenciada por mutaciones som&aacute;ticas H-cadena. Residuo 30 L es en la periferia de la interfaz de enlace y los efectos de la S30G un aumento de la hidrofobicidad y disminuci&oacute;n de la capacidad de uni&oacute;n de H y tama&ntilde;o, pero no tiene ning&uacute;n nuevos contactos de ant&iacute;geno energ&eacute;ticamente importantes. Una nueva estructura de 1.2-A de los cambios mostr&oacute; complejos H10L10-HEL en el patr&oacute;n de ambos inter - y intra - molecular del agua bridging con ninguna otras alteraciones estructurales significativas cercana a la interfase de Uni&oacute;n frente al complejo H26L26-HEL. Estos resultados destacan la necesidad de investigar la estructura y la termodin&aacute;mica asociada a mutaciones introducidas, con el fin de evaluar mejor y entender su impacto en la Uni&oacute;n. Adem&aacute;s, brinda un importante ejemplo de c&oacute;mo flexibilidad de la espina dorsal y el puente de agua pueden influir favorablemente en la termodin&aacute;mica de una interacci&oacute;n ant&iacute;geno-anticuerpo.

Las mutaciones som&aacute;ticas de cadena ligera cambian termodin&aacute;mica de la coordinaci&oacute;n de enlace y agua en la familia HyHEL-10 de anticuerpos.

&#x9884;&#x9632;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x3002;

Preventing Parkinson's pathology.

Pr&eacute;venir la pathologie de la maladie de Parkinson.

Parkinson Krankheit zu verhindern.

Prevenire la patologia di Parkinson.

&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1;&#xC758; &#xBCD1; &#xB9AC;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Prevenci&oacute;n de la patolog&iacute;a de la enfermedad de Parkinson.

&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684; Hsp104 &#x548C; ClpB &#x4E2D;&#x7EC6;&#x83CC;&#x662F;&#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x516D; AAA + &#x86CB;&#x767D;&#x548C; Hsp100 chaperones&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x73AF; translocases &#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x7C7B;&#x548C;&#x91CD;&#x65B0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;Hsp104 &#x548C; ClpB &#x5305;&#x542B;&#x72EC;&#x7279;&#x5377;&#x7EBF;&#x5708;&#x4E2D;&#x95F4;&#x57DF; (MD &#x63D2;&#x5165;&#x7B2C;&#x4E00; AAA + &#x57DF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x5B83;&#x4EEC;&#x533A;&#x522B;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6; AAA + &#x86CB;&#x767D;&#x548C; Hsp100 &#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CD;&#x70B9;&#x5C31;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x516D;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5668;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x60AC;&#x800C;&#x672A;&#x51B3;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6D77;&#x4E8B;&#x5904;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x516D;&#x5927;&#x4F1A; Hsp104 &#x548C; ClpB &#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x7ED3;&#x6784;&#x4ECD;&#x7136;&#x4E0D;&#x660E;&#x6717;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x7167;&#x4EAE;&#x4E86; MD &#x662F;&#x516D;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x5728; disaggregase &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8C03;&#x89E3;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x4F34;&#x4FA3;&#x7CFB;&#x7EDF; &#xFF08;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x548C; Hsp40&#xFF09; &#x8D4B;&#x4E88;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x7C7B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x529F;&#x80FD;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x522B;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x9898;&#x4E3A;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF1A; AAA &#x4E09;&#xFF1A; &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Hsp104 &#x548C; ClpB &#x53EF;&#x671B;&#x800C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53CA;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x57DF;&#xFF1A; &#x4F4D;&#x7F6E;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Hsp104 in yeast and ClpB in bacteria are homologous, hexameric AAA+ proteins and Hsp100 chaperones, which function in the stress response as ring-translocases that drive protein disaggregation and reactivation. Both Hsp104 and ClpB contain a distinctive coiled-coil middle domain (MD) inserted in the first AAA+ domain, which distinguishes them from other AAA+ proteins and Hsp100 family members. Here, we focus on recent developments concerning the location and function of the MD in these hexameric molecular machines, which remains an outstanding question. While the atomic structure of the hexameric assembly of Hsp104 and ClpB remains uncertain, recent advances have illuminated that the MD is critical for the intrinsic disaggregase activity of the hexamer and mediates key functional interactions with the Hsp70 chaperone system (Hsp70 and Hsp40) that empower protein disaggregation. This article is part of a Special Issue entitled: AAA ATPases: structure and function.

The elusive middle domain of Hsp104 and ClpB: Location and function.

Hsp104 dans la levure et les bact&#xE9;ries sont CLPB homologue, hexam&#xE9;rique AAA + prot&#xE9;ines chaperons, et Hsp100 qui fonctionnent dans la r&#xE9;ponse au stress de ring-translocases que la d&#xE9;sagr&#xE9;gation des prot&#xE9;ines d&#x26;#39;entra&#xEE;nement et de r&#xE9;activation. Les deux Hsp104 et CLPB contiennent un caract&#xE8;re distinctif domaine coiled-coil milieu (MD) ins&#xE9;r&#xE9; dans le premier domaine AAA +, ce qui les distingue des autres prot&#xE9;ines AAA + et Hsp100 membres de la famille. Ici, nous nous concentrons sur les d&#xE9;veloppements r&#xE9;cents concernant l&#x26;#39;emplacement et la fonction du rapport de gestion dans ces machines mol&#xE9;culaires hexam&#xE9;riques, qui reste une question en suspens. Bien que la structure atomique de l&#x26;#39;assembl&#xE9;e hexam&#xE9;rique de Hsp104 et CLPB reste incertain, les progr&#xE8;s r&#xE9;cents ont mis en lumi&#xE8;re que le MD est critique pour l&#x26;#39;activit&#xE9; intrins&#xE8;que de la disaggregase hexam&#xE8;re et fait office de m&#xE9;diateur principales interactions fonctionnelles avec le syst&#xE8;me de chaperon Hsp70 (Hsp70 et Hsp40) qui permettent aux prot&#xE9;ines d&#xE9;sagr&#xE9;gation. Cet article fait partie d&#x26;#39;un num&#xE9;ro sp&#xE9;cial intitul&#xE9;: ATPases AAA: structure et fonction.

Le Domaine du Moyen Elusive de Hsp104 et CLPB: Emplacement et fonction

Hsp104 in der Hefe und ClpB in Bakterien sind homologe, Hexameric AAA + Proteine und Hsp100 chaperones, die funktionieren in der Stress-Reaktion als Ring-Translocases, die Protein Entzweiung und Reaktivierung zu fahren. Sowohl die Hsp104 als auch die ClpB enthalten eine unverwechselbare gewickelt-mittlere umwickeltes (MD) eingef&uuml;gt, der erste AAA +-Dom&auml;ne, die sie von anderen AAA + Proteine und Hsp100 Familienangeh&ouml;rigen unterscheidet. Hier konzentrieren wir uns auf aktuellen Entwicklungen bez&uuml;glich der Lage und Funktion der MD in diesen Hexameric molekulare Maschinen, die eine hervorragende Frage bleibt. W&auml;hrend die atomare Struktur der Hexameric Versammlung des Hsp104 und ClpB ungewiss bleibt, haben die j&uuml;ngsten Fortschritte beleuchtet, die MD ist entscheidend f&uuml;r die systeminterne Disaggregase Aktivit&auml;t der Hexamer und vermittelt wichtige funktionale Interaktionen mit dem Hsp70-Chaperon-System (Hsp70 und Hsp40), die Protein Aufschl&uuml;sselung zu bef&auml;higen. Dieser Artikel ist Teil einer Spezial-Ausgabe mit dem Titel: AAA ATPasen: Struktur und Funktion.

Schwer fassbaren mittleren Bereich der Hsp104 und ClpB: Position und Funktion.

Hsp104 in lievito e ClpB nei batteri sono omologhi, esamerica AAA + proteine e Hsp100 chaperones, che funzionano nella risposta allo stress come anello-translocases che guidano la disgregazione proteica e la riattivazione. Sia Hsp104 e ClpB contengono un dominio distintivo coiled-coil di medio (MD) inserito nel primo AAA + dominio, che li distingue da altri AAA + proteine e membri della famiglia Hsp100. Qui, ci concentriamo sui recenti sviluppi riguardanti la posizione e la funzione del MD in queste macchine molecolari esamerica, che rimane una questione eccezionale. Mentre la struttura atomica dell&#39;Assemblea del Hsp104 e ClpB esamerica rimane incerta, i recenti progressi hanno illuminato che il MD &egrave; critica per l&#39;attivit&agrave; disaggregase intrinseca del hexamer e da intermediario chiave interazioni funzionali con il sistema chaperone Hsp70 (Hsp70 e Hsp40) che autorizzano la disgregazione proteica. Questo articolo fa parte di un numero speciale intitolato: AAA ATPasi: struttura e funzione.

Il dominio centrale sfuggente di Hsp104 e ClpB: localizzazione e funzione.

&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;ClpB&#x306E;Hsp104&#x306F;&#x76F8;&#x540C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30DE;&#x30FC;AAA +&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;Hsp100&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;translocases&#x305D;&#x306E;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3068;&#x518D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002; Hsp104&#x3068;ClpB&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x4ED6;&#x306E;AAA +&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;Hsp100&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;AAA +&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x4E2D;&#x9593;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;MD&#xFF09;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5353;&#x8D8A;&#x3057;&#x305F;&#x8CEA;&#x554F;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x516D;&#x91CF;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3067;MD&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x52D5;&#x5411;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Hsp104&#x3068;ClpB&#x306E;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30DE;&#x30FC;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;MD&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D1;&#x30EF;&#x30FC;Hsp70&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#xFF08;HSP70&#x3068;HSP40&#xFF09;&#x3068;&#x516D;&#x3068;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;disaggregase&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x70B9;&#x706F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x5206;&#x89E3;&#x3002; AAA ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF1A;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x984C;&#x3059;&#x308B;&#x7279;&#x96C6;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Hsp104&#x3068;ClpB&#x306E;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x4E2D;&#x6771;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF1A;&#x30ED;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;

&#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xB294; Hsp104 &#xBC0F; ClpB &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC885;, hexameric AAA + &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; Hsp100 chaperones, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC704;&#xC870;&#xD488;&#xACFC; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9C1; translocases&#xB85C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xC218;. Hsp104&#xC640; ClpB &#xB458; &#xB2E4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xC911;&#xAC04; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (MD) &#xB2E4;&#xB978; AAA + &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; Hsp100 &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; AAA + &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xB41C; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xC9C8;&#xBB38; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB294;&#xC774; hexameric &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0; MD&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;. Hsp104 &#xBC0F; Clpb&#xC758; hexameric &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xC6D0;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD88;&#xD655;&#xC2E4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; MD&#xB294; hexamer &#xB0B4;&#xC7A5; disaggregase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD53C;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; Hsp70 &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (Hsp70 &#xBC0F; Hsp40)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0C1;&#xD638; &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC9C4;&#xBCF4; &#xC870;&#xBA85; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xB294; &#xC790;&#xACA9;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D1;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;: AAA ATPases: &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;.

Hsp104 &#xBC0F; Clpb&#xC758; &#xAE30;&#xBB18;&#xD55C; &#xC911;&#xAC04; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;: &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;.

Hsp104 en la levadura y CLPB en las bacterias son hom&#xF3;logas, hexameric AAA + prote&#xED;nas y acompa&#xF1;antes Hsp100, que funcionan en la respuesta al estr&#xE9;s como anillo translocases que la desagregaci&#xF3;n unidad de la prote&#xED;na y la reactivaci&#xF3;n. Tanto Hsp104 y CLPB contener un distintivo de espiral de la bobina de dominio del medio (MD) que se inserta en el primer dominio de la AAA +, que las distingue de otras prote&#xED;nas AAA + y Hsp100 miembros de la familia. Aqu&#xED;, nos centramos en los &#xFA;ltimos acontecimientos relativos a la ubicaci&#xF3;n y funci&#xF3;n de la MD en estas m&#xE1;quinas moleculares hexam&#xE9;ricas, que sigue siendo una cuesti&#xF3;n pendiente. Mientras que la estructura at&#xF3;mica de la asamblea de hexameric Hsp104 y CLPB sigue siendo incierto, los avances recientes han iluminado que el MD es cr&#xED;tico para la actividad intr&#xED;nseca de la disaggregase hex&#xE1;mero y media las interacciones funcionales clave con el sistema de chaperona Hsp70 (Hsp70 y Hsp40) que facultan a la prote&#xED;na desagregaci&#xF3;n. Este art&#xED;culo es parte de un n&#xFA;mero especial titulado: ATPasas AAA: estructura y funci&#xF3;n.

Morgan E. DeSantis

Department of Biochemistry and Biophysics

University of Pennsylvania

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Morgan E. DeSantis

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biochemistry and Biophysics

University of Pennsylvania

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Department of Biochemistry and Biophysics