このコンテンツを視聴するには、JoVE 購読が必要です。 サインイン又は無料トライアルを申し込む。
Method Article
我々は、複数のマイクロ流体チャネル中の粒子の検出及びサイズを多重化するために、符号分割多重アクセス(CDMA)を有する抵抗パルスセンシング(RPS)を組み合わせた統合表面電極ネットワークとマイクロ流体プラットフォームを示します。
生物学的サンプルのマイクロ流体処理は、典型的には、空間的に関心のある生物学的特性に基づいて、試料を分別するために、様々な力場下の浮遊粒子の微分操作を含みます。得られた空間分布は、アッセイの読み出しとして使用するために、マイクロ流体デバイスは、多くの場合、より高いコストおよび低減可搬性を有する複雑な機器を必要とする顕微鏡分析に供されます。この制限に対処するために、我々は、マイクロ流体チップ上の異なる位置での粒子の多重検出のための統合された電子センシング技術を開発しました。マイクロ流体CODESと呼ばれる私たちの技術は、1D電気信号に二次元空間情報を圧縮するために符号分割多元接続で抵抗パルスセンシングを兼ね備えています。本稿では、検出するためのマイクロ流体CODES技術の実用的なデモンストレーションを提示し、サイズ培養癌細胞は、複数のマイクロ流体チャネルにわたって分布します。として高速顕微鏡によって検証、当社の技術は、正確に外部機器を必要とせずに、すべての電子密度の高い細胞集団を分析することができます。このように、マイクロ流体CODESは、潜在的に生物学的サンプルのポイント・オブ・ケア検査するのに適している低コストの統合されたラボオンチップデバイスを有効にすることができます。
このような液体中に懸濁された細胞、細菌またはウイルスのような生物学的粒子の正確な検出および分析アプリケーション1、2、3の範囲のための非常に興味深いです。サイズがよくマッチ、マイクロ流体デバイスは、高感度、穏やかなサンプル操作とよく制御微小環境4、5、6、7、この目的のためのユニークな利点を提供します。さらに、マイクロ流体デバイスは、受動的に種々の性質8、9、10、11、12に基づいて、生物学的粒子の不均一な集団を分画するために流体力学とフォースフィールドの組み合わせを使用するように設計することができます。これらの装置ではS、得られた粒子分布は、読み出しとして使用することができるが、空間情報は、ラボのインフラストラクチャに結びつけることにより、マイクロ流体デバイスの実用性を制限する、唯一の顕微鏡を通して一般的にアクセス可能です。したがって、それらはマイクロ流体デバイス上で操作しているように容易に、粒子の時空間マッピングを報告することができる統合されたセンサーは、潜在的にモバイルでの試料の試験のために特に魅力的で低コスト、統合されたラボオンチップデバイスを有効にすることができます、リソースが制限された設定。
薄膜電極は、様々なアプリケーション13、14のためにマイクロ流体デバイスに統合されたセンサーとして使用されています。抵抗パルスセンシング(RPS)は、電気測定15から直接、堅牢敏感、およびハイスループット検出機構を提供していますように、マイクロ流体チャネル内の小さな粒子の統合センシングのために特に魅力的です。 RPSは、電解液中に浸漬一対の電極間のインピーダンスの変調は、粒子を検出するための手段として使用されます。粒子が開口部を通過するとき、粒子のオーダーの大きさ、数および電流の過渡パルスの振幅は、それぞれ、カウントおよびサイズ粒子に使用されます。また、センサの幾何学的形状は、感度16、17、18、19を強化するか、マイクロ流体チャネル20内の粒子の垂直位置を推定するために、抵抗パルス波形を整形するために、フォトリソグラフィの解像度を有するように設計することができます。
我々は最近、電気的検出(マイクロ流体CODES)21によってマイクロ流体符号化直交検出と呼ばれる拡張性とシンプルな多重抵抗パルスセンシング技術を導入しています。マイクロ流体コードはに依存しています抵抗パルスセンサの相互接続ネットワーク、多重化を可能にするために、それぞれ、一意の識別可能な方法で伝導を調節するために微細加工電極のアレイからなります。我々は、特に符号分割多元接続で使用されるデジタルコードに似て、直交電気信号を生成するために各センサを設計した22(CDMA)通信ネットワーク、個々の抵抗パルスセンサ信号は一意に単一の出力波形から回収することができるようにも信号の場合異なるセンサが干渉する。このように、我々の技術は、最小限に、デバイスに、両方のシステムレベルの複雑さを維持しながら、マイクロ流体チップ上の異なる位置での粒子のモニタリングを可能にする、1D電気信号への粒子の2次元空間情報を圧縮します。
本稿では、実験と計算マイクロ流体CODES技術を使用するために必要な方法と同様に、Rのための詳細なプロトコルを提示しますシミュレートされた生物学的試料の分析におけるその使用からepresentative結果。技術を説明するための例の4多重センサを有する試作装置の結果を使用して、我々は、(2)実験の説明を含むマイクロ流体CODES技術とマイクロ流体デバイスを作成するために、(1)微細加工プロセスのプロトコルを提供します、電子的、光学的、および流体ハードウェア、(3)異なるセンサからの干渉信号を復号するためのコンピュータアルゴリズム、および(4)の検出およびマイクロ流体チャネル中の癌細胞の分析からの結果。私たちは、ここで説明する詳細なプロトコルを使用して、他の研究者が自分の研究のために当社の技術を適用することができると信じています。
コーディング電極の1デザイン
注:図1aは、微細電極の3次元構造を示しています。
表面電極の2微細加工
注:図2bは、表面電極の製造工程を示す図です。
マイクロ流体チャネルのためのSU-8鋳型の3製作
注:図2aは、マイクロ流体チャネル用モールドの製造工程を示す図です。
マイクロ流体CODESデバイスの4組立
模擬生物学的サンプルの5準備
6.マイクロ流体CODESデバイスを実行します
注:Fiを提供してグレ3に実験を示しています。
センサ信号の7処理
4マイクロ流体チャネルに分散4つのセンサから成るマイクロ流体CODES装置は図1bに示されています。 (1)複数のセルが並行して、電極を通過することができず、(2)細胞の感受性を増加させる電極に近いままであるように、このシステムでは、各マイクロ流体チャネルの断面は、セルの大きさに近くなるように設計されました。各センサは、ユニークな7...
複数の抵抗パルスセンサが以前に、マイクロ流体チップ28、29、30、31、32に組み込まれています。これらのシステムでは、抵抗パルスセンサはどちら28、29、30、31、またはそ?...
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by National Science Foundation Award No. ECCS 1610995. The authors would like to thank the Institute of Electronics and Nanotechnology and the Parker H. Petit Institute for Bioengineering and Bioscience staff for their support in using shared facilities. The authors also would like to thank Chia-Heng Chu for his help in preparing the manuscript.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
98% Sulfuric Acid | BDH Chemicals | BDH3074-3.8LP | |
30% Hydrogen Peroxide | BDH Chemicals | BDH7690-3 | |
Trichlorosilane | Aldrich Chemistry | 235725-100G | |
NR9-1500PY Negative Photoresist | Furuttex | ||
Resist Developer RD6 | Furuttex | ||
Acetone | BDH Chemicals | BDH1101-4LP | |
SU-8 2015 Negative Photoresist | Microchem | SU8-2015 | |
SU-8 Developer | Microchem | Y010200 | |
Polydimethylsiloxane (PDMS) | Dow Corning | 3097358-1004 | Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit |
Isopropyl Alcohol | BDH Chemicals | BDH1133-4LP | |
RPMI 1640 | Corning Cellgro | 10-040-CV | |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Seradigm | 1500-050 | |
Penicillin-Streptomycin | Amresco | K952-100ML | |
Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Corning Cellgro | 21-040-CM | |
PHD 22/2000 Syringe Pump | Harvard Apparatus | 70-2001 | |
HF2LI Lock-in Amplifier | Zurich Instrument | ||
HF2TA Current Amplifier | Zurich Instrument | ||
Eclipse Ti-U Microscope | Nikon Corporation | ||
DS-Fi2 High-Definition Color Camera | Nikon Corporation | ||
v7.3 High-speed Camera | Phantom | ||
PCIe-6361 Data Acquisition Board | National Instruments | 781050-01 | |
BNC-2120 Shielded Connector Block | National Instruments | 777960-01 | |
PX-250 Plasma Treatment System | Nordson MARCH |
このJoVE論文のテキスト又は図を再利用するための許可を申請します
許可を申請This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2023 MyJoVE Corporation. All rights reserved