グリカン媒介タンパク質相互作用の研究のためのバイオインフォマティクスリソース

要約

このプロトコルは、オンラインリソースでヒトタンパク質グリカムを探索、比較、および解釈する方法を示しています。

要約

Glyco@Expasyイニシアチブは、糖鎖生物学における知識のいくつかの側面にまたがる相互依存的なデータベースとツールのコレクションとして開始されました。特に、糖タンパク質(細胞表面受容体など)と糖鎖によって媒介される炭水化物結合タンパク質との間の相互作用を強調することを目的としている。ここでは、ヒト前立腺特異抗原(PSA)のNグリコームとヒト血清タンパク質のOグリコームを中心とした2つの例示的な例を通じて、コレクションの主要なリソースを紹介します。この記事では、さまざまなデータベース クエリと視覚化ツールを使用して、連続体内のコンテンツを探索および比較して、散在する情報を収集して関連付ける方法を示します。収集されたデータは、グリカン機能のより精巧なシナリオを養う運命にあります。したがって、ここで紹介するグリコインフォマティクスは、所与の文脈におけるタンパク質グリコームの特異性に関する仮定を強化、形成、または反論する手段として提案される。

概要

グリカン、それらが結合するタンパク質(糖タンパク質)およびそれらが結合するタンパク質(レクチンまたは炭水化物結合タンパク質)は、細胞表面における主要な分子アクター^である1。細胞間通信におけるこの中心的な役割にもかかわらず、グリコミック、グリコプロテオミクス、またはグリカン相互作用データを含む大規模な研究は、ゲノミクスおよびプロテオミクスにおける対応するものと比較して依然として乏しい。

最近まで、キャリアタンパク質にコンジュゲートされたまま複雑な炭水化物の分岐構造を特徴付ける方法は開発されていなかった。糖タンパク質の生合成は、単糖ドナー、受容性糖タンパク質基質、および糖転移酵素およびグリコシダーゼが相互作用的な役割を果たす非テンプレート駆動型プロセスである。得られた糖タンパク質は、複数の分岐点を持つ複雑な構造を持つことができ、各単糖成分は自然界に存在するいくつかのタイプの1つであり得る¹。非テンプレート駆動型プロセスは、オリゴ糖構造データを生成するための唯一の選択肢として生化学的分析を課します。天然タンパク質に結合しているグリカン構造の分析プロセスは、単糖組成、結合、および分岐配列を決定するために高感度、定量的、堅牢な技術を必要とするため、しばしば困難です²。

この文脈において、質量分析(MS)は、グリコミクスおよびグリコプロテオミクス実験において最も広く使用されている技術である。時間が経つにつれて、これらはより高いスループット設定で実行され、データは現在データベースに蓄積されています。様々なフォーマットのグリカン構造³は、グリカンが定義される精度のレベル(例えば、おそらく欠損連鎖タイプまたは曖昧な組成)に関係なく、各構造が安定した識別子と関連付けられている普遍的なグリカンデータリポジトリであるGlyTouCan4に移入する。非常によく似た構造が収集されていますが、それらのわずかな違いが明確に報告されています。糖タンパク質は、互いに相互参照する2つのデータベースである^GlyConnect5およびGlyGen6に記載およびキュレーションされています。構造的証拠を裏付けるMSデータは、GlycoPOST7にますます保存されています。オンラインリソースのより広い範囲をカバーするために、リファレンスマニュアルの第52章「糖鎖生物学の要点」は、グリコインフォマティクスに捧げられています⁸。興味深いことに、糖ペプチド同定ソフトウェアは近年増殖している^9,10が再現性の恩恵を受けていない。後者の懸念により、HUPO GlycoProteomics Initiative(HGI)のリーダーは、2019年にソフトウェアの課題を設定しました。CID、ETD、およびEThcDフラグメンテーションモードでNおよびOグリコシル化ヒト血清タンパク質の複雑な混合物を処理することから得られたMSデータは、ソフトウェアユーザーまたは開発者のいずれであっても競合他社に利用可能であった。この課題¹¹の結果に関する完全なレポートは、ここでのみ概説されています。まず、識別の広がりが観察された。これは主に、検索エンジンに実装された方法の多様性、その設定、出力のフィルタリング方法、およびペプチドの「カウント」によって引き起こされたと解釈されました。実験計画はまた、いくつかのソフトウェアとアプローチを(不)利点に置いたかもしれない。重要なことに、同じソフトウェアを使用している参加者が一貫性のない結果を報告し、それによって深刻な再現性の問題が浮き彫りになりました。異なる提出物を比較することで、一部のソフトウェアソリューションは他のソリューションよりも優れたパフォーマンスを発揮し、一部の検索戦略はより良い結果をもたらすと結論付けられました。このフィードバックは、自動糖ペプチドデータ解析方法の改善を導く可能性が高く、ひいてはデータベースの内容に影響を与えるでしょう。

グリコインフォマティクスの拡大により、情報を提供し、複数の類似または補完するリソースにアクセスするWebポータルが作成されました。最新かつ最新のものは、包括的糖科学の本シリーズ¹²の章で説明されており、協力を通じて、データ共有と情報交換のソリューションがオープンアクセスモードで提供されています。そのようなポータルの1つは、もともとGlycomics@ExPASy ¹³と呼ばれ、何十年もの間、いくつかのオミクスで使用されているツールとデータベースの大規模なコレクションをホストしてきたExpasyプラットフォーム¹⁴の大規模なオーバーホールに続いて、Glyco@Expasyに改名されました最も人気のあるアイテムはUniProt15 - 普遍的なタンパク質知識ベースです。Glyco@Expasyは、データベースとツールの目的と使用法を、視覚的な分類と相互依存関係の表示に基づいて教訓的に発見します。以下のプロトコルは、グリコプロテオミクスとグリカン相互作用ミクスの間の接続をglycomicsを介して明示するこのポータルからのリソースの選択を使用して、グリコミクスおよびグリコプロテオミクスデータを探索する手順を示しています。グリコミクス実験は、単糖が完全に定義され、結合が部分的または完全に決定される構造を生成するが、それらのタンパク質部位の結合は、たとえそうであっても、特徴付けが不十分である。対照的に、グリコプロテオミクス実験は正確な部位結合情報を生成するが、グリカン構造の分解能は悪く、しばしば単糖組成物に限定される。この情報は、GlyConnect データベースでつなぎ合わされています。さらに、GlyConnectの検索ツールを使用して、UniLectin16でそれらを認識するタンパク質とともに記載されている潜在的なグリカンリガンドを検出し、グリカンを介してGlyConnectにリンクすることができます。ここで提示されたプロトコルは、N結合型およびO結合型グリカンおよび糖タンパク質に特有の質問をカバーするために、2つのセクションに分かれています。

プロトコル

注: インターネットに接続されたデバイス(大画面を推奨)と、Chrome や Firefox などの最新のウェブブラウザが必要です。SafariやEdgeを使用することはそれほど信頼できないかもしれません。

1. GlyConnectのタンパク質Nグリコームからユニレクチンのレクチンへ

1. Glyco@Expasyからのリソースへのアクセス
   メモ: ここで説明する手順は GlyConnect にアクセスすることですが、プラットフォームに記録されているリソースへのアクセスにも適用できます。
   1. https://glycoproteome.expasy.org/glycomics-expasy に移動し、複合糖質 や グリカン結合などのさまざまなカテゴリを示す右側のバブルチャートを検討してください。バブル内のカテゴリを反映する左端のメニューで、[ 糖タンパク質] ボックスをオンにして、右側のバブル チャートがそのカテゴリに一致するバブルをすぐに拡大できるようにします。
      メモ: 緑色のバブルはツールで、黄色のバブルはデータベースです。どちらかをクリックすると、再びズームインしてリソースの詳細が表示されます。これを行う前に、ユーザーはそのリソースの他のユーザーへの依存関係を理解したい場合があります。
   2. 依存関係に関する情報を取得するには、[ リソース主題別分類 ] タブから [ リソース依存関係ホイール] タブに移動します。ホイールの GlyConnect にマウスを置き、他のソースとの統合レベルを確認します(図1)。
   3. 「 リソース主題別分類」 タブに戻り、ステップ 1.1.1 のように GlyConnect バブルに到達し、それをクリックして (補足図 1)、データベースの最新リリースのコンテンツの統計情報を表示する新しいタブに GlyConnect ホームページを表示します。
      メモ: 表 1 に示す配色は、データベースに格納されているさまざまな種類の情報と一致します。このカラーコードは、GlyConnect のすべてのエンティティページで有効であり、全体を通して一貫しています。ホームページには、Sars-Cov-2スパイクタンパク質(COVID-19)のグリコシル化を説明するものや、ヒトミルクオリゴ糖(HMO)を広範囲に詳述したものなど、焦点を絞ったデータセット専用の4つのセクションも表示されます。これらは、このプロトコルでは説明しません。
2. タンパク質Nグリコームの文脈情報を探る
   注: GlyConnect のすべてのグリカン構造は、3 つの代替および一般的に使用される形式で表示されます: (1) グリカンのシンボル命名法 (SNFG)¹⁷ (2)IUPAC凝縮¹⁸、および (3) オックスフォード¹⁹.これに対し、糖鎖組成を発現する標準的な表記はない。GlyConnect では、ヘキソースには Hex、N-アセチルヘキソサミンには HexNAc、フコースには dHex、シアル酸には NeuAc というコードが使用されます。簡単にするために、視覚化ツールは、ヘキソースのH、N-アセチルヘキソサミンのN、フコースのF、シアル酸のSの凝縮表記に依存しています。さらに、小さな文字は、アセチル化のための「a」、リン酸化のための「p」、硫酸化のための「s」などの修飾を、これらのいわゆる置換基の中で最も頻繁に示す。
   1. ヒト前立腺特異抗原(PSA)のNグリコームを表示および探索するには、GlyConnectホームページから、以下の手順を実行します。
      注:ヒトPSAのグリコシル化は、特に前立腺癌の文脈で、長年にわたって研究されてきた。GlyConnect データベースには、グリコミクスとグリコプロテオミクスのデータを組み合わせた 3 つの参考文献 ²⁰、^21、22 が格納されています。ここで提供される結果は、GlyConnect の 2021 年 9 月のリリースで得られたものであることに注意してください。データベースを使用すると、頻繁なデータ更新のためにわずかに異なる統計が生成されることがあります。
   2. 「タンパク質」ボタンを選択して、データベースの タンパク質 ビューを開きます。タンパク質ビューページで、検索ウィンドウに 前立腺 と入力します。出力にリストされている 2 つのエントリで、pI 値が異なる PSA の 2 つのアイソフォームを区別するエントリを探します。PSAの共通アイソフォームに対応する 790 (Id列)をクリックします。
      注:上記のスキームで公開された作品から抽出された要約情報を示す上部の多色バーを探します。ナビゲーションには、以下で説明するようにいくつかのオプションがあります。
   3. 上部の多色バーで、緑色の [SOURCE ] ボタンをクリックすると、公開されたデータが処理されたサンプルの種類 (尿 と 精液) が表示されます。この情報をさらに参照するには、これらのサンプルの種類のいずれかをクリックします。同じことが、色付きのボタンをクリックしたときに表示されるすべての項目にも当てはまります。
   4. データベースの健康関連コンテンツを確認するには、GlyConnectの対応する専用疾患ページにリンクする前立腺癌の2つの項目を含むDISEASEボタンをクリックします。そのページの要約は、3つの大規模研究が308のヒトタンパク質に見られる1,087の部位について319の組成を報告したことを示しています。
   5. STRUCTUREボタンをクリックすると、グリコミクスデータからPSAに関連する135の構造の完全なリストが表示されます。COMPOSITIONボタンをクリックすると、グリコプロテオミクス実験によって決定された関連する78の組成物が表示されます。任意の構造または構成をクリックすると、詳細が表示されます。
      注:特定の構造を保持する代替タンパク質のリストまたは組成物に一致する構造のリストなどの詳細を得ることができる。PSAは、Asn-69に1つのN-グリコシル化部位しか持たないことが知られている(茶色の SITE ボタンには1つの項目のみがカウントされる)。
   6. コンポジションのあいまいさを減らすには、選択したコンポジションの下にある 「推奨構造 」をクリックします(たとえば、Hex:6 HexNAc:3 NeuAc:1)。単糖数が上記の構造と一致するたびに提案がなされる(図2)。
      注:グリコプロテオミクス実験によって生成されたHex:6 HexNAc:3 NeuAc:1組成は、グリコミクスデータから4つの高分解能構造と一致します。PSAの場合、Asn-69のみがグリコシル化されているため、解決する部位の曖昧さはない。
   7. タンパク質ページを完全に探索するには、ページの右側に詳細を表示します(図3)。
      1. 各モノマーに結合された2つの複合グリカンで示されているPSAのデフォルトの 3QUM PDB(タンパク質データ^Bank23)エントリ(図3)または代替の 2ZCK エントリ(結合された炭水化物のためにも利用可能)を参照してください。2 番目のエントリは、1 つのチェーンを示します。
         注:両方のエントリは、PDB-RCSBで採用されているSNFG-3D表記でグリカンを表示する3D LiteMolプラグイン²⁴ で視覚化されます。
      2. 他の相互参照の対応するリンクをクリックして、UniProtなどの主要なプロテオミクスデータベースから関連する機能情報を調べます(図3)。
3. タンパク質N-グリコームのコンテキスト情報の視覚化と相関
   注: 前のセクションで見たように、構造やコンポジションの長いリストは全体として把握するのが難しく、GlyConnect は重要な情報を視覚化するために 2 つの異なるツール、つまり GlyConnect Octopus と GlyConnect Compozitor に依存しています (最初のツールは色付きのボタンでキャプチャされた要約情報を展開し、2 つ目は構造/構成が別のツールに含まれているという点で構造的な依存関係を引き出します)。以下に示すように、GlyConnect Octopus は、データベースの内容を反映して複数または単一の接続を強調表示することによって、データベースに格納されているさまざまなエンティティ間の関連付けを調べます。
   1. GlyConnect Octopus検索を行い、PSAに結合している糖鎖の多様性にハイブリッドコア構造や高頻度シアル酸含有構造などの共通の構造特性が存在することを確認します。
   2. タコのホームページ https://glyconnect.expasy.org/octopus/ に移動します。「N リンク」タブは デフォルトで選択されたままにします。 [コア ]サブタブに移動し、[ ハイブリッド] アイコンをクリックします。 [プロパティ ]サブタブに移動し、[ シアリル処理 ]アイコンをクリックします。下の緑色の 検索 ボタンをクリックします。
      メモ: 検索結果は、3 つのカテゴリのアイテム間の関係としてグラフィカルに表示されます。デフォルトでは、中央のリストは組成のクエリと一致し、左側のコレクションは関連するタンパク質にまたがり、右側のコレクションは関連するグリカンにまたがります。
   3. 表示された関係のグラフで、 H6N4F1S1 にカーソルを合わせると、6つのタンパク質と3つの構造へのリンクが強調表示されます。これとは対照的に、 H6N4F2S1 にカーソルを合わせると、PSAの2つのアイソフォーム(どちらもUniProt ID:KLK3_HUMANと呼ばれる)と1つの構造(ID:10996と呼ばれる)が選ばれます。構造 ID にカーソルを合わせると、その SNFG 表現が表示され、それをクリックして対応するページが開きます (補足図 2)。
   4. タコのノードを、グリコシル化のコンテキストを説明する他のトピックに変更します。カラーコードは、前述のものと同じです ( 表 1 を参照)。
      1. [ 中心節点 ]を [組織 ]に変更して、グラフの中央に15のオプションを表示しますが、その多くは体液です。組織情報に応じて、クエリに一致するタンパク質とグリカンの間のすべての関連を探します。グラフの中央にある 尿 または 精液 にカーソルを置いて、さまざまな関連性を表示します(図4A、B)。
      2. [中心ノード] を [疾患] に変更して、13 個のオプションを表示し、そのうちの 1 つは前立腺がんです。関連する唯一のタンパク質はPSA(KLK3_HUMAN)である(補足図3)。
         注:タンパク質ページに示されているPSA N-グリコームを詳しく見ると、末端NeuAc(a?-?)の非常に高い周波数が特定されます。ギャル(b?-?)GlcNAc下部構造は、多くの場合、2つまたは3つのアンテナを有する構造上に存在する。別のタコは、以下に説明するように、それに基づいて生成することができます。
   5. [ クリア] ボタンをクリックして検索を更新します。 [プロパティ ]サブタブに移動し、[ バイアンテナ ]アイコンをクリックします。 「決定要因」 サブタブに移動し、 3-シアリル-LN (タイプ 2) アイコンをクリックします。下の緑色の 検索 ボタンをクリックします。
   6. 末端3-シアリル-LN(タイプ2)モチーフ、すなわちNeuAc(a1-3)Gal(b1-4)GlcNAcを含むバイアンテナグリカンとのタコ検索された関連を確認してください。読みやすくするために センターノード を 組織 に変更し 、KLK3_HUMAN の上にカーソルを合わせると、Seminal FluidをPSA共通のアイソフォームと7つの構造に直接接続できます(補足図4)。
      注: 2 番目の視覚化ツールである GlyConnect Compozitor は、そのリスト内のすべてのコンポジション間の潜在的な関係のスキャンを実行します (下記参照)。関係は、2つの組成物間で1つの単糖のみと異なるものとして定義される。グラフにプロットされたこれらの同定された関係は、グリコームの(不)連続性を明らかにする。
   7. GlyConnect Compozitor を使用して、PSA の場合に以下に示すように、そのリスト内の各コンポジション間の潜在的な関係のスキャンを実行します。
      メモ: GlyConnect コンポジターは、コンテキストに関連してコンポジションを処理します。GlyConnectを照会するための個別のタブ、例えば 、タンパク質、ソース、細胞株、 コンテキストを修飾するために自明である疾患を提供します。これをPSAで次のように説明します。
   8. PSAのタンパク質ページに戻る:https://glyconnect.expasy.org/browser/proteins/790。PSAエントリーページの右側にあるコンポジターリンクをクリックします。Compozitor 検索フィールドには、[タンパク質] タブの Id 790 エントリの詳細があらかじめ入力されていることを確認します (タンパク質 : 前立腺特異的抗原、種: ホモ サピエンス、および グリカンタイプ: N リンク)。
   9. 「 選択範囲に追加」 ボタンをクリックして、データベースからデータを取得し、接続されているコンポジションのグラフを表示します。 「仮想ノードを含める」 オプションの選択を解除します。 [グラフの計算] ボタンをクリックすると、PSA N-グリコームを表す78の組成物の十分に接続されたセットを示すグラフと、グリカンの主な特性を示す棒グラフが表示されます。
   10. 棒グラフの紫色のバーにカーソルを合わせると、グラフ内のすべてのシアリル構造が特定され、シアリル構造に対する観察可能な偏りが明らかになります。
   11. メインの [タンパク質] タブにとどまり、[タンパク質 (名前)] フィールドで [前立腺特異抗原 - 高 Pi アイソフォーム (psah)] を選択します。
       注: [グリカン の種類] フィールドと [グリカン サイト] フィールドは自動的に入力されます。
   12. [ 選択範囲に追加] ボタンをクリックして、データベースから57個のコンポジションのデータを取得します。[グラフの 計算] ボタンをクリックして、両方のアイソフォームの重畳グラフを生成し、2 つの PSA アイソフォームのグリカミングの違いを評価します。ノードラベルにカーソルを合わせると、コンポジション/ラベルに対応する構造体の数が表示されます(図5)。
4. ユニレクチンにおける糖鎖結合情報
   注: タコでテストされた行列式は、NeuAc(a2-3)Gal(b1-4) と記載されていることを思い出してください。定義上、それはグリカン構造の確立された結合部分であり、そのように、UniLectin3Dデータベース²⁵で検索することができる。
   1. https://www.unilectin.eu/ に移動し、 UniLectin3D ボタンをクリックします。または、グリカン検索 ボタンの https://www.unilectin.eu/unilectin3D/.Click ページに直接移動して、このページを開きます:https://www.unilectin.eu/unilectin3D/glycan_search(補足図6)。
   2. シアル酸を表す紫色のひし形をクリックすると、データベースに保存されているシアル酸で終わるすべてのグリカン結合モチーフの表示が促されます。そのモチーフコレクションの上部には、先に調査したNeuAc(a2-3)Gal(b1-4)GlcNAcモチーフが含まれています(補足図7)。
   3. NeuAc(a2-3)Gal(b1-4)GlcNAc モチーフをクリックすると、NeuAc(a2-3)Gal(b1-4)GlcNAcとの相互作用を確認する3D構造が既知であるすべてのレクチンの表示が促されます。結果はデフォルトですべての種のレクチンを示しています。[ フィールドで検索 ] オプションを使用して、ビューを人間中心の情報に制限します。
   4. [ フィールドで検索 ]オプションをクリックします。 種の フィールドでは、 ホモ・サピエンスと入力します。[ X線構造の探索] ボタンをクリックして、元のリストを除外します。1つのエントリ、すなわちヒトガレクチン-8だけが残っている。リストされた項目の右上隅にある 3D構造と情報の表示ボタンをクリックすると 、NeuAc(a2-3)Gal(b1-4)GlcNAcと相互作用するヒトガレクチン-8の詳細情報が表示されます。
   5. ページに表示されているヒトガレクチン-8の構造情報に、2つの異なるビューアでアクセスします。
      1. マウスを長押しして分子を回転させ、リテモールソフトウェア²⁶を内蔵してリガンドを前面に出し、レクチンの3D構造を表示します。左側にリストされた相互作用の1つにマウスを合わせて右側のビューを更新し、レクチンとリガンドの間の原子間相互作用を詳述するために統合されたPLIPソフトウェア²⁷を使用して、その特定の相互作用が構造内のどこに作用するかを見つけます(図6)。
   6. UniProt、PDB(ヨーロッパまたはアメリカのサイト)、およびGlyConnectの対応するエントリにリンクしている緑色のボタンをクリックして、これらの相互参照を調べます。

2. グラコネクトでの O-glycomes の調査と比較

1. HGI チャレンジの高信頼度データセットの参照
   注: 概要で説明した HGI データセットは、GlyConnect データベースに格納されます。これは、高い信頼度リストと見なされる37の糖タンパク質に見られる163のN-および23のO-糖ペプチドを含む。GlyConnect ^Compozitor28 は、グリコームデータの一貫性を評価するための鍵です。重要なことに、Compozitorは、分離されたノードを接続するために1つの中間ステップのみが必要な場合に、仮想ノード(灰色で表示)を可能にします。このようにして、仮想ノードはグラフを締め付け、実験結果で見逃されている可能性のある構造として解釈することができます。
   1. GlyConnect のホームページから HGI データセットを参照するには、記事のリファレンス ページである https://glyconnect.expasy.org/browser/references/2943 に直接アクセスします。
      メモ: 色付きのボタンの要約は、この記事の図を部分的に反映しています。しかし、69個のユニークなペプチドのみがリストされている場合、これはペプチドと部位または構造との間の複数の関連を反映している。本稿では、糖ペプチドは、ペプチドと組成物のユニークな組み合わせとして定義される。GlyConnectでは、グリコサイトが最初に考慮され、ペプチドと構造の組み合わせとして記述されています。これは、GlyConnectと上記の引用との間の図の不一致を説明しています。
   2. Hex:5 HexNAc:4 NeuAc:2 など、43 ペプチドの 42 部位で同定された N 結合型組成物の出現頻度が高いのに対し、1 ペプチド中 1 部位で同定されたほとんどの O 結合型組成物の頻繁な一意性を確認します。
   3. 参照エントリ ページの右側にある [Compozitor] リンクをクリックして、データセットの一貫性を評価します。Compozitor ツールが参照の DOI を直接処理し、ツールの [詳細設定] タブで検索フィールドに reference=10.1101/2021.03.14.435332 を入力していることを確認します。DOI 番号の後に &glycan_type=O リンク型と入力して、検索を O 結合型グリカンに絞り込み、クエリは次のようになります。参照=10.1101/2021.03.14.435332&glycan_
      タイプ=Oリンク
   4. 「 選択範囲に追加」 ボタンをクリックして、データベースからデータを取得します(Oリンクされたコンポジションは20個あります)。「 仮想ノードを含める」 オプションを選択したままにします。「グラフを 計算」 ボタンをクリックして、接続されたコンポジションのグラフを表示します。この結果は、グラフを完成させるために必要な9つの仮想ノードとのグリカン生合成の予想される連続性におけるいくつかのギャップを強調している(図7)。
2. GlyConnectで選択した血清タンパク質のO-グリコームとの比較
   注:GlyConnectに保存されたデータによってギャップを埋められるかどうかを評価するために、参照とともにリストされた37のOグリコシル化タンパク質のうち1つが選択されました。データセットでは、インターアルファ-トリプシン阻害剤重鎖H4(Q14624)は、Thr-725上でO-グリコシル化されていることが報告されている。
   1. GlyConnect Compozitor の [タンパク質] タブに移動します (手順 2.1.3 を参照)。タンパク質リストから、インターアルファ-トリプシン阻害剤重鎖H4を選択します。種の選択がデフォルトでホモ・サピエンスであることを確認します。グリカンタイプのNリンクの選択を解除します。最初にサイトの左側にあるマイナス記号をクリックしてすべてのサイトの選択を解除し、次にリストからThr-725のみを選択してから、サイトリストでThr-725のみを選択します。
   2. [選択範囲に追加]ボタンをクリックします(6つのコンポジションがThr-725に関連付けられていることに注意してください)。[グラフの計算] ボタンをクリックして、接続されたコンポジションのグラフを表示します (補足図 8)。
   3. 表示されたグラフを見ると、記事データセットの 20 個の O リンクされたコンポジションのうち 17 個のユニークなコンポジションが青色で表示され、データベース内の 6 個のコンポジションのうち 3 個の一意のコンポジションが赤色で表示されます。換言すれば、2つのソース間の重複は、マゼンタで表される3つの組成物中に存在する。グラフの45°回転が自動的に生成されることに注意してください。
      メモ: 仮想ノードの数は 1 つ減ります。結局のところ、論文データセットの20のO結合組成物に欠損し、仮想ノードとして表されたH2N2S1は、データベース内のInter-α-トリプシン阻害剤重鎖H4のThr-725に関連する追加の組成物で満たされている。これにより、他の2つの仮想ノードはH1N2S1とH2N2S2の間のギャップを埋めるための代替オプションであったため、役に立たなくなるため、グラフのトポロジが簡素化されます。しかし、データベースからインポートされた2番目のコンポジションは、2つの新しい代替仮想ノードH2N2F1S1とH1N2F2S1の作成がなければ分離されます。
   4. 仮想ノードを理解するには、対応するコンポジションが GlyConnect に存在するかどうかを確認します。これを行うには、グラフの下にある [エクスポート] ボタンをクリックします。「 仮想 」を選択するには、他のすべてのオプションの選択を解除します。クリップボードアイコンをクリックして、8つのコンポジションの選択をコピーします。
   5. 選択範囲を Compozitor の [カスタム] タブのクエリウィンドウに貼り付けます。「グリカンタイプ」フィールドで「Oリンク」を選択します。「コンポジション」フィールドの「選択ラベル」を「VN」などに設定して、8 つのコンポジションのリストに名前を付けます。[選択範囲に追加] ボタンをクリックし、[コンピュート グラフ] ボタンをクリックします。すべての仮想ノードが緑色のノードとして表示されるようになりました(図8)。

結果

プロトコルの最初の部分(セクション1)は、GlyConnectプラットフォームを使用して、ヒト前立腺特異抗原(PSA)のAsn-69に結合したN-グリカンの特異性または共通性を調査する方法を示した。グリカン発現における組織依存性(尿および精液)、ならびにアイソフォーム依存性(正常および高pI)の変動を、2つの視覚化ツールを使用して強調した(図4および...

ディスカッション

予期せぬ相関関係を明らかにするためのツールとしてのGlyConnectタコ
GlyConnect Octopusはもともと、グリカンの緩やかな定義でデータベースを照会するように設計されています。実際、文献はしばしば、フコシル化またはシアリル化されている、2つ以上のアンテナで作られているなど、グリコーム中のグリカンの主な特徴を報告している。さらに、N結合型かO結合型かのグリカンは...

資料

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