この記事の執筆中に役立つ、入力用Moensラボのメンバーに感謝します。 HKは、NIH / NICHD助成金＃5R01HD037909 - 08でサポートされているポスドク研究員です。 CBMは、ハワードヒューズ医学研究所との研究者でもある。

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	<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Warga, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+and+developmental+potential+of+cells+in+the+zebrafish+embryo.">Cell lineage and developmental potential of cells in the zebrafish embryo.</a> Trends Genet. 4, 68-74 (1988).</li><li>Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+organization+of+the+zebrafish+fate+map.">Origin and organization of the zebrafish fate map.</a> Development. 108, 581-594 (1990).</li><li>Woo, K., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+coherence+in+the+fate+map+of+the+zebrafish+nervous+system.">Order and coherence in the fate map of the zebrafish nervous system.</a> Development. 121, 2595-2609 (1995).</li><li>Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primordial+germ-cell+development:+the+zebrafish+perspective.">Primordial germ-cell development: the zebrafish perspective.</a> Nat Rev Genet. 4, 690-700 (2003).</li><li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells.">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124, 3157-3165 (1997).</li><li>Koprunner, M., Thisse, C., Thisse, B., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+nanos-related+gene+is+essential+for+the+development+of+primordial+germ+cells.">A zebrafish nanos-related gene is essential for the development of primordial germ cells.</a> Genes Dev. 15 (21), 2877-2885 (2001).</li><li>Weidinger, G., Wolke, U., Koprunner, M., Klinger, M., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+tissues+and+patterning+events+required+for+distinct+steps+in+early+migration+of+zebrafish+primordial+germ+cells.">Identification of tissues and patterning events required for distinct steps in early migration of zebrafish primordial germ cells.</a> Development. 126 (23), 5295-5307 (1999).</li><li>Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+zebrafish+primordial+germ+cell+migration+by+attraction+towards+an+intermediate+target.">Regulation of zebrafish primordial germ cell migration by attraction towards an intermediate target.</a> Development. 129 (1), 25-36 (2002).</li><li>Ciruna, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+maternal-zygotic+mutant+zebrafish+by+germ-line+replacement.">Production of maternal-zygotic mutant zebrafish by germ-line replacement.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 14919-14924 (2002).</li><li>Waskiewicz, A. J., Rikhof, H. A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eliminating+zebrafish+pbx+proteins+reveals+a+hindbrain+ground+state.">Eliminating zebrafish pbx proteins reveals a hindbrain ground state.</a> Dev Cell. 3, 723-733 (2002).</li><li>Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=dead+end,+a+novel+vertebrate+germ+plasm+component,+is+required+for+zebrafish+primordial+germ+cell+migration+and+survival.">dead end, a novel vertebrate germ plasm component, is required for zebrafish primordial germ cell migration and survival.</a> Curr Biol. 13, 1429-1434 (2003).</li><li>Blaser, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish.">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li></ol>

移植を対象とキメラを生成するために使用することができる容易さは、脊椎動物のモデルとしてゼブラフィッシュの列強の一つです。上記以外のこのプロトコルの変更は、接合体の開発において重要な役割を持つ遺伝子の母性遺伝子機能の解析が可能になります。これらの変異体の魚が大人になるまで生き残ることができないので、それは変異細胞の&quot;生殖クローン&quot;を作成し、そうで?...

試薬：これらの手順に使用される試薬の多くのレシピは、フルオンラインで利用可能であるゼブラフィッシュの本、に記載されています<a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html">http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html</a> 。レシピは、魚の水の準備のためにそこに抗生物質、dechorionating、蛍光デキストランのためのプロナーゼ、およびメチルセルロースがある場合とない場合の胚の培地を用意されています。

generating chimeric zebrafish embryos by transplantation

複雑な発達過程を把握するために使用される最も強力なツールの一つは、キメラ胚の解析です。キメラは、複数の動物からの細胞を含む生物として定義され、モザイクには、複数の遺伝子型の細胞は通常、野生型と変異体、混合されているキメラの一種です。ゼブラフィッシュでは、キメラが容易に適切な初期段階での宿主胚にドナー胚からの細胞の移植によって作製することができる。標識されたドナーの細胞は、1細胞期胚に蛍光色素などの系列のマーカー、、の注入によって生成されます。標識されたドナー細胞は、ドナー胚から取り出され、化合物または解剖顕微鏡のどちらかに取り付けられたオイル制御のガラスピペットを使用して、ラベルなしホスト胚に導入されています。ドナー細胞は、いくつかのケースでは定評のある運命のマップに基づいて、ホスト胚の移植部位を選択することで、開発胞胚や原腸胚段階のホスト胚の特定の地域や組織をターゲットとすることができます。

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Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

胞胚や原腸胚の段階で移植の対象となるキメラゼブラフィッシュの胚を生成するためのステップバイステップのガイド。

移植によるキメラゼブラフィッシュ胚の生成

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

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Research

JoVE Journal

Biology

21.1K ビュー.  Fred Hutchinson Cancer Research Center - FHCRC. 胞胚や原腸胚の段階で移植の対象となるキメラゼブラフィッシュの胚を生成するためのステップバイステップのガイド。