Grazie ai membri del laboratorio Moens utile per l&#39;ingresso durante la stesura di questo articolo. HK è post-doctoral fellow supportato da NIH / NICHD concedere # 5R01HD037909-08. CBM è un investigatore con l&#39;Howard Hughes Medical Institute.

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	<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Warga, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+and+developmental+potential+of+cells+in+the+zebrafish+embryo.">Cell lineage and developmental potential of cells in the zebrafish embryo.</a> Trends Genet. 4, 68-74 (1988).</li><li>Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+organization+of+the+zebrafish+fate+map.">Origin and organization of the zebrafish fate map.</a> Development. 108, 581-594 (1990).</li><li>Woo, K., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+coherence+in+the+fate+map+of+the+zebrafish+nervous+system.">Order and coherence in the fate map of the zebrafish nervous system.</a> Development. 121, 2595-2609 (1995).</li><li>Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primordial+germ-cell+development:+the+zebrafish+perspective.">Primordial germ-cell development: the zebrafish perspective.</a> Nat Rev Genet. 4, 690-700 (2003).</li><li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells.">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124, 3157-3165 (1997).</li><li>Koprunner, M., Thisse, C., Thisse, B., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+nanos-related+gene+is+essential+for+the+development+of+primordial+germ+cells.">A zebrafish nanos-related gene is essential for the development of primordial germ cells.</a> Genes Dev. 15 (21), 2877-2885 (2001).</li><li>Weidinger, G., Wolke, U., Koprunner, M., Klinger, M., Raz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+tissues+and+patterning+events+required+for+distinct+steps+in+early+migration+of+zebrafish+primordial+germ+cells.">Identification of tissues and patterning events required for distinct steps in early migration of zebrafish primordial germ cells.</a> Development. 126 (23), 5295-5307 (1999).</li><li>Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+zebrafish+primordial+germ+cell+migration+by+attraction+towards+an+intermediate+target.">Regulation of zebrafish primordial germ cell migration by attraction towards an intermediate target.</a> Development. 129 (1), 25-36 (2002).</li><li>Ciruna, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+maternal-zygotic+mutant+zebrafish+by+germ-line+replacement.">Production of maternal-zygotic mutant zebrafish by germ-line replacement.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 14919-14924 (2002).</li><li>Waskiewicz, A. J., Rikhof, H. A., Moens, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eliminating+zebrafish+pbx+proteins+reveals+a+hindbrain+ground+state.">Eliminating zebrafish pbx proteins reveals a hindbrain ground state.</a> Dev Cell. 3, 723-733 (2002).</li><li>Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=dead+end,+a+novel+vertebrate+germ+plasm+component,+is+required+for+zebrafish+primordial+germ+cell+migration+and+survival.">dead end, a novel vertebrate germ plasm component, is required for zebrafish primordial germ cell migration and survival.</a> Curr Biol. 13, 1429-1434 (2003).</li><li>Blaser, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish.">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li></ol>

La facilità con cui il trapianto può essere usato per produrre chimere mirata è una delle grandi potenze del pesce zebra come modello vertebrato. Una modifica di questo protocollo non sopra descritto permette l&#39;analisi della funzione del gene materno per i geni con ruolo essenziale nello sviluppo zigotico. Dal momento che questi pesci mutanti non possono sopravvivere fino all&#39;età adulta, è necessario trasferire la linea germinale mutante in un altro modo wild-type embrione di accoglienza, la creazione di &q...

Reagenti: Ricette per molti dei reagenti utilizzati per queste procedure si trovano nel Libro Zebrafish, che è disponibile in linea completa al <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html">http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html</a> . Le ricette sono a condizione che vi per la preparazione di pesci di acqua, Medio embrioni con e senza antibiotici, pronasi per dechorionating, destrani fluorescenti e metilcellulosa.

generating chimeric zebrafish embryos by transplantation

Uno degli strumenti più potenti utilizzati al fine di conoscere complessi processi di sviluppo è l&#39;analisi degli embrioni chimerici. Una chimera è definito come un organismo che contiene cellule provenienti da più di un animale, mosaici sono un tipo di chimera in cui si mescolano le cellule da più di un genotipo, di solito wild-type e mutanti. In zebrafish, chimere può essere facilmente fatto con il trapianto di cellule da un embrione donatore in un embrione di ospitare allo stadio embrionale appropriato. Cellule del donatore etichettati sono generati mediante iniezione di un marker lignaggio, come ad esempio un colorante fluorescente, in embrione unicellulare palco. Cellule del donatore etichettati vengono rimossi da embrioni donatori e introdotto in embrioni di ospitare senza etichetta utilizzando un olio controllato pipetta di vetro montato sia su un composto o microscopio da dissezione. Cellule del donatore possono in alcuni casi essere mirate ad una specifica regione o tessuto dello sviluppo dell&#39;embrione stadio di blastula o gastrula ospitare scegliendo un sito trapianto di embrione di accoglienza sulla base di consolidata mappe destino.

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Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Un passo-passo guida mirate a generare embrioni di zebrafish chimerico da trapianto allo stadio di blastula o gastrula.

Generare embrioni di zebrafish Chimerico da trapianto

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

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Research

JoVE Journal

Biology

21.1K Views.  Fred Hutchinson Cancer Research Center - FHCRC. Un passo-passo guida mirate a generare embrioni di zebrafish chimerico da trapianto allo stadio di blastula o gastrula.