この研究では、イネの苗で育てられた小さな茶色のウンカまたはSBPHを使用します。培養の準備ができたら、増殖させたSBPHを遠沈管に入れ、氷浴に10〜30分間入れます。次に、凍結したSBPHを実体顕微鏡下のスライドガラスの上に置き、腹部を上に向けて、6本の脚に焦点を合わせます。
超極細チップの高精度ピンセットを2本用意。1つのピンセットを使用して、昆虫の体を押し下げて所定の位置に保ち、もう一方のピンセットで片方の足を慎重に引き抜きます。次に、昆虫の胸をそっと押して、血リンパが傷口を流れるようにします。
血リンパを採取するには、1マイクロリットルの毛細管をピペットバルブに入れてマイクロピペットを準備します。毛細管を虫の傷の近くに置き、マイクロピペットピペットバルブを保持します。毛細血管の先端を滲出する血リンパに触れて採取します。
キャピラリーチューブが目的のスケールラインに達したら、ピペットバルブの小さな穴を指でわずかに塞いで、吸収プロセスを停止します。次に、採取した血リンパを100マイクロリットルのPBSバッファーに排出します。血リンパ採取の精度はSDS-PAGEで確認し、別々に採取した3つの血リンパサンプルすべてで同様のタンパク質含有量を示しました。
幼虫の場合、総タンパク質濃度はミリリットルあたり約3.7ミリグラムでした。成人の女性および男性のSBPHでは、タンパク質濃度はそれぞれ約3.5および3.6ミリグラム/ミリリットルであり、3つのサンプル間で有意差は示されなかった。幼虫の血リンパは2〜20ナノメートルの大きさの血球を示した。
さらに、細胞濃度は、収集された3つの血リンパサンプルで同等でした。
