Image Analysis of Hep-3B Cells after Drug Treatment

薬物処理されたHep-3B細胞をイメージングした後、共局在プラグインを使用して画像Jの共焦点画像を開きます。イメージJサーバーでNDファイルを開き、ダイアログボックスで分割チャンネルオプションを選択します。緑と赤の画像を操作します。

これらの画像の複製を生成して元の画像をそのままにするには、画像をクリックして複製を選択するか、キーボードショートカットのShiftプラスを使用して背景を縮小 D.To、別の画像の複製を生成し、ローリング半径100で背景を減算し、背景の作成オプションを選択して、指定された画像の背景で画像を生成します。次に、プロセスに移動します。[画像計算機]をクリックして、2番目の複製画像から最初の複製画像を減算します。

得られた画像を共局在解析に利用します。コローカリゼーションプラグインを使用するには、画像をクリックし、タイプを選択してから8ビットを選択して、緑と赤のチャンネル画像を8ビットに変換します。次に、プラグインをクリックして、コローカリゼーションを選択します。

ミトコンドリアとリソソームシグナルの共局在を測定するには、比率を75%に設定し、しきい値の赤チャネルを80.0に、しきい値の緑チャネルを50.0に設定します。共局在プンクタを含み、RGB画像内の3つの8ビット画像を組み合わせた8ビットバイナリ画像が生成されます。これらの画像を8ビット画像に変換します。

細胞の関心領域を取得するには、共局在点の画像を選択して、細胞の領域を強調表示する画像を生成します。セル領域全体を選択するには、結果の共局在ポイント画像を選択して画像をクリックし、しきい値を調整し、しきい値を設定して、すべてのセル領域が強調表示されるようにします。セルの領域を解析するには、[解析] を選択し、[パーティクルの解析] をクリックして、画像内のすべてのパーティクルを 0 から無限遠 ([パーティクルを解析] のデフォルト設定) で測定します。

共局在化したミトコンドリアとリソソームの領域を分析するには、共局在化した8ビット画像を選択します。次に、 [分析] を選択します。クリック分析粒子と0.1625平方マイクロメートルから4平方マイクロメートルの間の点状の合計を測定します。

共局在したミトコンドリアとリソソームの面積を総細胞面積で割って、共局在プンクタを測定します。Hep-3B細胞の共焦点画像は、ミトコンドリアとリソソームの共局在を示しました。VL 850およびFCCPは、Hep-3B細胞において有意なマイトファジーを誘導した。