イメージングシステムをセットアップするには、532ナノメートルのレーザーを15分間オンのままにしてウォームアップすることから始めます。次に、イメージングメンブレンの隣に手動で調整可能なステージに取り付けられたカスタマイズされたランプを配置します。呼吸管が接続されたマウスの歯ホルダーをランプに取り付け、ランプの表面に加熱パッドを固定します。
レーザーがウォームアップしたら、ファイバーバンドル入力の前に近赤外線検出器カードを置き、レーザー光がバンドルに入ることを確認してレーザーの位置合わせを確認します。麻酔をかけたマウスの頭の毛を目の近くから耳の後ろまで電気かみそりでトリミングすることから動物の準備を開始します。頭のてっぺんに脱毛クリームを塗ります。
5分間そのままにした後、濡れた綿棒でクリームを拭き取ります。頭の皮膚が完全に脱毛するまで塗布を繰り返します。動物をシステムのプラットフォームに移す直前に、27ゲージの針を使用して、ストック濃度で100マイクロリットルのマイクロバブルを逆軌道的に注入します。
次に、目の保護ローションを1滴目に塗ります。PAUSATイメージングを開始するには、イメージングウィンドウの表面に蒸留水を入れて音響カップリングを行います。次に、マウスの頭を歯入れに固定し、適切な麻酔と空気の流れを確保します。
加熱ランプと温度コントローラーに接続された直腸プローブを使用して、動物の体温を摂氏37度に保ちます。イメージングアプリケーションを開き、Bモード超音波に移動します。ライブ超音波ウィンドウを使用して、マウスの頭を手動で希望の位置に調整し、それに応じてステージの高さを調整します。
Bモードでの超音波送信周波数の値を16メガヘルツに調整します。次に、イメージングアプリケーションに保存ディレクトリ情報を入力します。次に、フローティングボックスを使用して脳スキャンの目的の領域を選択します。
静止取得ボタンを押して、画像取得が完了したらスキャン結果を確認して、目的の領域イメージングを確認します。音響血管造影イメージングを実行するには、画像取得に戻り、モードを音響血管造影に変更します。次に、目的のスキャンプロトコルパラメータを入力し、フレーム間隔を0.2ミリメートルと位置あたり10フレームに設定します。
画像分析でスキャン結果をチェックして、画質を確認します。光音響断層撮影でイメージングするには、光パラメトリック発振器またはOPOアプリケーションを開き、756ナノメートルに設定します。次に、リニアアレイトランスデューサを以前に決定された座標に手動で変換して、ワブラーボリュームとリニアアレイボリュームを自動的に同時登録します。
レーザーアプリケーションを開き、532ナノメートルのレーザーをオンにします。スキャンパラメータを、0.4ミリメートルステップサイズ、20ミリメートルスキャン長、および位置ごとに平均10フレームに設定します。次に、超音波データ収集システムMATLABプログラムを開き、実行ボタンを押します。
次に、スキャンアプリケーションで[開始]を押します。スキャンが完了したら、MATLAB保存プログラムを開きます。保存名を目的のファイル名に変更し、[実行]を押します。
次に、OPO波長を798ナノメートルに変更し、スキャンを繰り返します。音響血管造影、またはAAイメージングは、損傷していない脳では、両方の半球が同様の血管分布を示すことを示しました。同様の結果は、2つの異なる波長の光音響画像でも観察されます。
右外側皮質における顕著なシグナル減少は、電気焼灼マウスのAA画像において観察された。同じ領域はまた、虚血を示唆する組織酸素化の減少を示した。PAUSATイメージングは、血流供給が減少し、酸素飽和度が低下した上部皮質領域を特定することにより、光血栓性脳卒中モデルに基づいて脳卒中領域を特定することができます。
マウスの年齢は、頭蓋骨が厚くなり、音響インピーダンスが異なるため、高齢マウスのイメージング深度が低下するため、イメージングに影響を与える可能性があります。
