Microfluidic Shear Apparatus Setup for Single-Cell Fluid Shear Assay

せん断アッセイ粘性流動媒体を調製することによってプロトコルを開始する。これを行うには、マグネチックスターまたはホットプレートを使用して、ベース培養培地を摂氏60〜70度で約10〜20分間予熱します。メディアを連続的に攪拌しながら、メチルセルロースをそっと加えて、メチルセルロース粒子が凝固せずに迅速に分散するのを助けます。

このプロセスを約15〜24時間継続して、培地とセルロースの明確で均質な混合物を確保します。せん断装置をセットアップするには、流路にゴム製ガスケットを取り付けて、フローチャンバーとペトリ皿の間の接続を固定し、単一セルの制御された均一な流れを確保します。ゴム製ガスケットは、希望する流量プロファイルと観察領域に応じて異なるサイズで提供されます。

次に、粘性培養培地の注入と回収のためにプログラム可能なシリンジポンプに接続された60または100ミリリットルのデュアルシリンジで構成されるせん断アッセイシステムをセットアップします。準備した粘性流動媒体をシリンジに充填し、充填したシリンジをシリンジポンプのそれぞれの位置に取り付けます。次に、空のシリンジをシリンジポンプの他のシリンジ位置に取り付けます。

1/16インチのチューブとチューブコネクタを使用して、両方のシリンジをフローチャンバーに接続します。指定された速度で一定量の液体を注入および回収するようにポンプをプログラムし、対応するシリンジを選択します。サンプルプログラムが画面に表示されます。

シャーレから細胞培養培地を吸引して、せん断の準備をします。次に、ゴム製ガスケット付きのフローチャンバーを、取り付けられたセルを含むペトリ皿に挿入して固定します。細胞をディッシュに入れたマイクロ流体フローチャンバーを、ディスプレイモニターに接続された倒立顕微鏡に置きます。

これで、単一のセルに流体せん断応力を適用し、結果として生じるセルの変形を光学的に監視する準備が整いました。