Performing Single-Cell Shear Assay and Imaging

シングルセルせん断アッセイプロトコルを実行するには、目的の細胞を含むペトリ皿に取り付けられたマイクロ流体フローチャンバーで構成される組み立て済みのせん断装置セットアップを使用します。セットアップ全体を、十分に高い対物レンズとディスプレイモニターを備えた倒立顕微鏡に置きます。顕微鏡対物レンズの焦点を合わせ、適切なコントラストと明瞭な細胞エッジを確保します。

顕微鏡ステージを動かして、細胞がディスプレイモニターにはっきりと見え、ライブ画像であることを確認します。適合フローチャンバーとペトリ皿のイメージングまたは流路内の1つのセルまたは複数の異なるセルを選択します。連続的に均一な粘性媒体の流れを維持するには、同様の注入速度と離脱速度を選択します。

レイノルド数またはREが100未満の流体の適切な層流を確保します。せん断ポンプの[実行]をクリックして、せん断液を連続速度で注入および回収します。液体の注入中に気泡がないことを確認してください。

注入されたせん断液が顕微鏡下で目的の細胞と接触する前に、ソフトウェアの[録画]をクリックしてビデオの録画を開始します。7分間、またはストレス曝露の希望の期間、または目的の細胞が皿の底から剪断されるまで記録を続けます。顕微鏡ソフトウェアの[記録の停止]をクリックします 必要に応じて実行が完了します。

ソフトウェアは自動的にさらなる分析のためにフラッシュドライブを使用して収集することができる画像やビデオを保存します。画像をTIFFファイルとして抽出し、できれば1秒あたり1フレームで抽出して、簡単に分析できるようにします。