まず、適切に安楽死させたマウスに75%アルコールをスプレーして皮膚を消毒します。次に、マウスを仰臥位に置きます。動物の腹部の皮膚を持ち上げ、外科用ハサミを使用して小さな切開を行います。
次に、はさみを使用して、腹側正中線に沿って、骨盤から首までの皮膚と腹筋を鈍く分離します。正中線の両側に沿って横隔膜と肋骨を切断して、心臓と肺を露出させます。次に、肝臓、脾臓、腸、腎臓を慎重に取り除き、腸壁の損傷を防ぎます。
その後、肺と食道を切除します。次に、片手で持った鉗子を使用して心臓をそっと持ち上げ、もう一方の手で手術用ハサミを持って大動脈を脊椎から分離します。次に、心臓と大動脈を、抗生物質を添加したPBSを含む60ミリメートルのシャーレに入れます。
マイクロサージェリー鉗子とマイクロサージェリーハサミをアルコールから取り出し、25ミリリットルのPBSですすぎ、余分なアルコールを取り除きます。実体顕微鏡下で作業し、心臓と大動脈から胸腺やその他の組織を取り除きます。次に、心臓を取り除き、血管周囲脂肪組織またはPVATを大動脈に残します。
大動脈をPVATとともに、抗生物質を添加したPBSを含む清潔な60ミリメートルのシャーレに移します。1組の顕微手術用鉗子を使用して大動脈を保持し、別のペアを使用して、付着した脂肪組織を引き剥がしてPVATを大動脈から分離します。PVATへの害を最小限に抑えながら、できるだけ多くの血管組織を切除します。
最後に、採取したPVATを、抗生物質を添加した高グルコースDMEMを含む2ミリリットルの微量遠心チューブに移し、氷上に置きます。
