黒のインドインクとグリセロール系緩衝液を 1 〜 20 希釈して準備し、室温で 15 、 000 g で 10 分間遠心分離します。40マイクロリットルのインク溶液とグリセロールシステムバッファーを384ウェルプレートの最初のセクションに加えます。次に、25 μL のグリセロール系バッファーをすべての希釈 1 ウェルに添加し、40 μL をすべての希釈 2、3、および 4 ウェルに添加します。
抽出した糖鎖サンプルを希釈ウェルに25マイクロリットル加え、サンプルを1対1の比率で希釈します。10マイクロリットルを希釈液1から希釈液2ウェルに移して各サンプルを4回段階希釈し、ピペットを使用して穏やかに混合します。10マイクロリットルのサンプルを希釈液2から希釈液3ウェルに移して、このプロセスを繰り返します。
希釈4ウェルのプロセスを繰り返した後、そこから10マイクロリットルを廃棄して、すべてのウェルの最終容量が40マイクロリットルになるようにします。40マイクロリットルのインク溶液とグリセロールシステムバッファーを最終プレートに加えます。次に、プレートを粘着カバーで覆い、室温で3000gで10分間遠心分離します。
サンプルをニトロセルロースメンブレンにプリントするには、まずプリントヘッドとキャピラリーをグリセロールシステムバッファーで複数回パージします。バッファーのみでプレートをロードして、テスト印刷を開始します。クリーンバッファーリザーバーから直接プリントするように装置を設定するには、[File]、[New]の順にクリックし、[Print Run]を選択します。
マイクロプレートの種類を選択し、それに応じてスライド設定を変更します。次に、スポットプロパティの設定を編集する前に、ミニアレイの設定を変更します。[概要] タブをクリックして、プレートを表示します。
最後に、[オプション]タブで、[バッファを使用して印刷時間を計算してから、ファイルの場所を割り当ててファイルを保存する]を選択します。場所を保存したら、[印刷実行の開始]を押して実行を続行します。抽出した糖鎖サンプルをプリントしながら、前と同じようにシステムをプログラムします。
Optionsタブで、Using source microplatesをクリックします。最後に、印刷されたマイクロアレイ用に生成された一意のグリッドファイルをダウンストリーム分析用に保存します。定義された糖鎖標準試料も、ポジティブコントロールとして印刷されたマイクロアレイに含めました。
選択した糖鎖標準試料について得られたマップ結合プロファイルは、以前に報告されたエピトープ特異性に対応しています。
