まず、ニトロセルロースメンブレンから同一の印刷マイクロアレイを切り取り、プロービングに適した容器に入れます。非特異的結合を減らすには、MP-TBSTブロッキングバッファーをマイクロアレイに添加し、回転式シェーカーで1時間インキュベートします。インキュベーション後、バッファーを新しいMP-TBSTと交換します。
モノクローナル抗体およびMP-TBSTとともにアレイを回転式シェーカーで2時間インキュベートします。インキュベーション後、分子プローブ溶液を除去します。アレイをクリーンなTBSTに完全に沈めます。
すぐにバッファーを新しい容量と交換して、残留プローブ溶液を除去します。アレイを回転するシェーカーの上に 5 分間置きます。TBST を新しいバッファー・ボリュームと交換し、アレイをシェーカーの上にさらに 5 分間置きます。
次に、アルカリホスファターゼ標識抗体とアレイを回転式シェーカーで2時間インキュベートします。インキュベーションが完了し、マイクロアレイを洗浄したら、ニトロブルーテトラゾリウムとBCIP発色液で覆い、抗体結合を発色学的に検出します。アレイをきれいな水道水に浸して反応を終了します。
次に、アレイをあぶらとり紙の間に挟んで周囲温度で一晩乾燥させます。非セルロース性植物細胞壁多糖類の16種類のエピトープ診断の相対存在量は、糖鎖指向性モノクローナル抗体を印刷された抽出物に結合させることによって検出されました。抽出された糖鎖のほとんどは、アルカリ性水酸化ナトリウム画分内で検出されました。
LM-10 と LM-11 では、試験したすべてのマンゴー品種の皮に含まれるキシランとアラビノキシランを表す強い結合シグナルが記録されました。LM-10およびLM-11は、ニンニク根組織抽出物に優先的に結合し、葉組織抽出物に弱い結合を示した。LM-19は、部分的にメチルエステル化または非エステル化ホモガラクツロナンを表し、一部のマンゴー品種抽出物およびコーヒー果肉画分にのみ強く結合します。
