Seeding CD34+ Cells into Fluidic Chips

まず、単離されたCD34陽性細胞を遠心分離し、4つのサイトカインを混合した300マイクロリットルの予熱したSFM-34培地に細胞ペレットを再懸濁し、10マイクロリットルの細胞懸濁液を使用して細胞をカウントします。150マイクロリットルのサイトカインを添加したSFM-34の最終容量で細胞をカウントして再懸濁した後、0.5マイクロリットルのROCK阻害剤を添加します。P200ピペットの先端をリザーバー内のチャネルの端に配置して、流体チップからラミニンをゆっくりと吸引します。

次に、細胞懸濁液をチャネルに一貫して添加し、気泡が形成されないようにします。チップを摂氏37度、二酸化炭素5%で一晩インキュベートし、細胞をチャネルに完全に付着させます。内皮細胞が完全に付着したら、前述のように培地を吸引します。

200マイクロリットルのサイトカインを添加したSFM-34をチップに加えます。細胞が90〜100%のコンフルエントに達するまで、培地を毎日交換します。