まず、麻酔をかけられたマウスに先制鎮痛剤を注射します。バリカンを使用して、マウスの頭を剃ります。動物を脳定位固定台に置き、イヤーバーを正しく配置します。
マウスの口をマウスピースに取り付け、窒息を防ぐために舌を慎重に外側に配置します。麻酔の深さを確認した後、体と頭が水平に水平に保たれるように、動物の下に昇降サポートを配置します。また、動物の体温を維持するために、紙で温かいパッドを使用してください。
乾燥を防ぐために両目に軟膏を塗ります。次に、ヨウ素とアルコールを使用して、マウスの頭を消毒します。メスを使用して頭の正中線に沿って切開し、切り込みを目の後ろから伸ばしてラムダ縫合糸を投稿します。
頭蓋骨を露出させ、0.9塩化ナトリウム溶液で飽和させた滅菌綿の先端で綿棒で拭きます。実体顕微鏡で、吻側鼻静脈またはRRVを特定し、滅菌鉛筆を使用してマークします。滅菌針を基準として、脳の向きを確認します。
DV 座標と ML 座標が変更されていないことを確認します。次に、ウイルス溶液を含む滅菌ガラスピペットをRRVリファレンスに配置して、前後参照をゼロにします。選択した前後座標に達するまで、矢状縫合糸に沿ってピペットを進めます。
この場所に滅菌鉛筆で印を付け、針を持ち上げます。上矢状洞が壊れないように、マークされた位置の周りに小さな円を慎重にドリルで開け、小さな鉗子で頭蓋骨の一部を取り除きます。次に、上矢状洞正中を内側基準として使用し、ピペットをその位置に移動し、背腹基準として硬膜に接触するまで下げます。
硬膜にわずかな休憩を作り、ピペットを好みの背腹位置まで下げます。指定された量のアデノ随伴ウイルスまたはAAVベクターを脳に注入し、ピペットを取り出します。マウスをイヤーバーから外し、外科用クリップを使用して皮膚を閉じます。
動物を別の温かいケージに移して回復させます。マウスの回復に注意してください。意識を取り戻したら、完全に回復したら元の囲いに戻します。
