Extraction and Analysis of DNA from the Cellular Component of the Eye Humor

DNA抽出を行うには、まず、眼液から得られた細胞ペレットに適量の細胞溶解液を添加します。溶液を上下にピペットで移し、完全に混合します。細胞が完全に溶解したら、タンパク質沈殿液を加えて、総容量の3分の1を構成します。

次に、20〜30秒間激しくボルテックスして混ぜます。その後、室温で3000gで3分間回転させます。その間、300マイクロリットルのイソプロパノールを清潔な微量遠心チューブに移します。

遠心分離が完了したら、上清をイソプロパノールの入ったチューブに慎重にピペットで移します。次に、チューブに1.5マイクロリットルのグリコーゲンを加え、チューブをひっくり返して完全に混合します。チューブをマイナス20°Cの冷凍庫に1時間または一晩置いて、DNA沈殿を促進します。

凍結後、室温で3000gで5分間遠心分離します。次に、イソプロパノールをピペットで取り出します。ペレットを洗浄するには、0.5ミリリットルの70%エタノールを加えます。

チューブを静かに裏返して、均一に洗うようにします。その後、チューブを室温で3000gで1分間回転させます。遠心チューブから上清を廃棄します。

次に、チューブをきれいなガーゼで裏返して溶液を排出し、ペレットを乾燥させます。微量遠心分離機で素早く回転させた後、先端の細い使い捨てピペットチップを使用して、残りのエタノール液滴をピペットで移動します。次に、乾燥したDNAペレットに45マイクロリットルのDNA水和溶液を加えます。

次に、チューブを摂氏50度に設定された加熱ブロックに入れます。眼液の細胞成分と無細胞成分の両方のDNA収量は類似していました。網膜硝子体リンパ腫関連変異の細胞成分および無細胞成分のPCR解析を実施した。

より高い突然変異率は、サイクル閾値の低下によって実証されたように、無細胞成分に存在しました。