まず、麻酔をかけたマウスの仰臥位をイメージングシステムでつなぎ、鼻を鼻錐形に編み込みます。下肢を伸ばし、膝がわずかに空中を向くようにマウスを配置します。イメージングシステムコンピュータで互換性のあるソフトウェアを開きます。
アクイジション・コントロール・パネルから、initializeをクリックしてシステムをウォームアップし、温度ライトが緑色に変わるまで待ちます。次に、[イメージングウィザード]をクリックします。フィルターペアをクリックした後、設定が落射照明用に構成されていることを確認します。
次に、[次へ]を押します。プルダウンリストから目的のプローブを見つけて正しい励起および発光設定を選択し、Nextをクリックします。被写体にマウスを撮影するマウスを選択します。
露出パラメータで、自動設定がチェックされ、蛍光と写真のオプションが選択されていることを確認します。視野のチェックリストで、Dから22.6センチメートルを選択し、[次へ]を押します。すべての設定が正しいことを確認したら、シーケンス取得ボタンを押して、画像が適切な露出になっていることを確認します。
画像を解析するには、白黒画像上の各膝関節の上に一定のサイズの関心領域円を配置します。各膝関節の総放射効率と平均放射効率を計算します。輻射効率が反対側の脚でも計算される場合は、負傷した脚の放射効率測定値を反対側の脚の放射効率で割ってデータを正規化します。
蛍光反射率イメージングでは、損傷していないマウスと比較して、損傷したマウスの関節で有意に高いプロテアーゼ活性が示されました。損傷した関節は、対側関節および損傷していないマウスの関節と比較して、平均放射効率が43%高かった。損傷後2週間で、反対側の関節と比較して、損傷した関節で30〜80%高い放射効率が観察されました。
対照的に、外科手術された関節は、対側関節と比較して4週目に300%高い放射効率を示し、手術の顕著な交絡効果を示唆しています。
