メンブレンベースの細胞培養プラットフォームでの細胞播種とマイクロ流体モードへの再構成

まず、組み立てた再構成可能な細胞培養プラットフォームのメンブレンに、1平方センチメートルあたり5マイクログラムのフィブロネクチンを室温で1時間コーティングし、細胞接着を改善します。次に、p200ピペットを用いて、塗布液を吸引する。パターニングステンシルをコアモジュールウェルに配置します。

セルメディアをデバイスのウェルと下部チャネルに追加します。ヒト臍帯静脈内皮細胞を井戸に播種します。デバイスをペトリ皿に入れます。

脱イオン水が入った15ミリリットルの円錐形チューブキャップをペトリ皿に追加して、局所的な湿度を維持します。ペトリ皿のセットアップをインキュベーターに移します。フロー下で細胞を培養するには、プラットフォームをオープンウェルからマイクロ流体モードに再構成します。

これを行うには、リザーバーとチューブを内皮細胞増殖培地で満たします。下部ハウジングをサンプルステージに置きます。オープンウェルコアモジュールを下部ハウジングに挿入し、ステンシルを取り外し、モジュールのウェルからセル培地を吸引し、フローモジュールをウェルに配置します。

次に、フローモジュールをコアモジュールにしっかりと密封する上部ハウジングを配置します。インレットとアウトレットのディスペンスチップをフローモジュールポートに接続します。蠕動ポンプを始動して、システムに流体の流れを導入します。

せん断流曝露の所望の時間に達したら、ポンプを停止します。インレットとアウトレットのディスペンス チップを取り外し、上部ハウジングを取り外します。ピンセットを使用して、フローモジュールをウェルからそっと取り外します。

最後に、100マイクロリットルの細胞培地をウェルに添加してから、目的のアッセイを実施します。フロー下で培養した細胞はフロー方向に沿って整列しましたが、フローなしで培養した細胞はランダムな配向を保ったままでした。細胞をストレスにさらすと、健康な血管で重要な役割を果たすクルッペル様第2因子と内皮一酸化窒素合成酵素がアップレギュレーションされました。