マウス脳免疫濃縮フラグメント単離によるヒストンPTM定量化

まず、マウス脳ホモジネートを含む15ミリリットルのポリプロピレンチューブに2.125ミリリットルの等張密度勾配を加えます。各チューブにファックスバッファを補充し、最終容量が8.5ミリリットルになるまでにします。チューブを20回静かに反転させて、完全に混ぜます。

幅の狭い目盛り付きトランスファーピペットを使用して、4ミリリットルのピンク色、密度37%のグラジエントを静かに下敷きにし、2つのきれいな層を確立します。トランスファーピペットを切り替え、37%層の下に2ミリリットルの青色の密度70%のグラジエントを下敷きにします。チューブを摂氏4度に冷却された遠心分離機に移し、制動ランプを最低設定に設定して500Gで20分間回転させます。

遠心分離後、清潔なトランスファーピペットを使用して、15ミリリットルチューブの上部からミエリンを廃棄します。別のトランスファーピペットを使用して、密度勾配の上部フラグメントを清潔な15ミリリットルのポリプロピレンチューブに慎重に集めます。次に、免疫に富むフラグメントを回収しながら、チューブの側面に沿ってピペットをゆっくりと一周させて、サンプル中のすべての細胞を収集します。

免疫濃縮フラグメントを新しい15ミリリットルのポリプロピレンチューブに移します。チューブに10ミリリットルのファックスを加えてサンプルを洗浄します。チューブを20回静かに反転させて完全に混ぜます。

冷却した遠心分離機でチューブを回転させ、ブレーキランプを最低設定にして、単離された免疫細胞をペレット化します。