まず、20ミリリットルの発酵ブドウサンプルを滅菌済みの50ミリリットルのねじ込み式キャップチューブに移します。次に、10ミリリットルの冷水をチューブとボルテックスに加えて均質化します。サンプルを800 G、摂氏4度で1分間遠心分離します。
上清を新しい50ミリリットルのチューブに移し、3000Gで摂氏4度で20分間遠心分離します。上清を廃棄した後、ペレットを1ミリリットルのPBSに再懸濁します。細胞懸濁液を2ミリリットルのスクリューキャップチューブに移し、14, 000 Gで2分間遠心分離します。
次に、ペレットをpH 7.4のリン酸ナトリウム緩衝液978マイクロリットルおよびDNA緩衝液122マイクロリットルに再懸濁します。チューブをボルテックスし、摂氏4度で45分から1時間置きます。1ミリリットルのサンプルを溶解溶液1本のチューブに移し、キャップを締めます。
ビーズビートグラインダーでサンプルをそれぞれ60秒間3回均質化します。それから16、800 G.Transferで1分間溶解のマトリックスEの管をきれいなmicrotubeにsupernannt遠心分離し、管に蛋白質の沈殿物の解決の250マイクロリットルを加えて下さい。チューブを10回振って内容物を混ぜます。
サンプルを16, 800 Gで5分間遠心分離し、上清を滅菌済みの15ミリリットルチューブに移します。次に、上清に1ミリリットルの結合マトリックス懸濁液を加え、チューブを2分間反転させて混合した後、ラックに3分間置きます。1ミリリットルの上清を除去した後、残りの上清にマトリックスを再懸濁します。
600マイクロリットルの混合物をスピンフィルターチューブに移し、遠心分離します。次に、フロースルーをデカントし、500マイクロリットルの洗浄液をスピンフィルターチューブに加えます。スピンフィルターを取り外し、新しいキャッチチューブに5分間入れます。
乾燥後、フィルターメンブレンに50マイクロリットルの温かいDNAseフリー水を加え、ピペットチップでマトリックスを静かに攪拌します。14, 500 Gで1分間遠心分離し、DNAを溶出します。サンプルをアガロースゲルにロードします。
最後に、DNA濃度を測定します。
