環境嫌気性微生物の増殖のための培養ボトル内の嫌気性液体培地の調製

まず、必要な培地成分を測定し、1リットルのボトルに加えます。目的の微生物培養物に応じてpHを調整し、ボトルを旋回させて成分を均一に混合します。電子レンジで液体を沸騰するまで5〜6分間加熱し、電子レンジを頻繁に開き、耐熱手袋を使用してボトルを静かに回転させます。

次に、滅菌済みの10ミリリットルのガラスピペットを窒素ガスマニホールドに取り付けます。マニホールドを開いて酸素を抜き、窒素ガスを排出します。ピペットチップを液体に入れ、気泡が適度に活発になるようにガスの流れを調整します。

ボトルが触れるには熱くなりすぎなくなるまで、液体を窒素で洗い流します。ボトルが冷えるのを待っている間に、滅菌済みの100ミリリットルの培養ボトルを10本セットします。培地ボトルが耐えられる温度に達したら、ピペットチップをボトルのヘッドスペースに引き上げます。

0.125グラムの重炭酸ナトリウムと0.3グラムの硫化ナトリウム一水和物を加え、レサズリンが無色になるまで待ちます。レサズリンの色が変わるのを待っている間に、金属製のカニューレをガスマニホールドのセットアップに取り付けます。窒素流量を適度な速度に調整し、カニューレの先端を培養ボトルに入れます。

レサズリンが無色になったら、各培養ボトルに50ミリリットルの液体を分注します。カニューレを取り外した直後に、各ボトルに同じサイズのゴム栓をします。次に、ストッパーをアルミシールで固定します。

ボトルをオートクレーブ可能なビンに入れ、水位がボトル内の水位と一致するまでビンに水道水を入れます。ボトルを摂氏121度で30分間オートクレーブします。